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基于超分支滚环扩增技术对中华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母的高灵敏检测
1
作者
魏华
赵清如
+6 位作者
谭雅冰
李金玲
孙昕
赵莹莹
李应东
孙娜
李晓东
《渔业研究》
2025年第5期681-694,共14页
【背景】二尖梅奇酵母(Metschnikowiabicuspidate)是中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)“牛奶病”的病原之一,严重阻碍着中华绒螯蟹养殖业的发展。目前尚无有效治疗“牛奶病”的药物,快速、高效、准确的病原诊断是其防控的关键。相比传统...
【背景】二尖梅奇酵母(Metschnikowiabicuspidate)是中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)“牛奶病”的病原之一,严重阻碍着中华绒螯蟹养殖业的发展。目前尚无有效治疗“牛奶病”的药物,快速、高效、准确的病原诊断是其防控的关键。相比传统的病原分离培养技术,聚合酶链式反应(PCR)等分子生物学技术已能够实现二尖梅奇酵母的安全快速检测,但仍需要复杂的变温设备,难以进行池边检测。【目的】建立一种基于超分支滚环扩增(HRCA)技术检测二尖梅奇酵母的新方法,为池边检测酵母菌病原提供新思路。【方法】本研究基于二尖梅奇酵母26S rRNA基因(U44822)序列,设计出特异性高的锁式探针(PLP)和引物,建立HRCA技术,并对该方法的灵敏度、特异性、重复性和应用效果进行了评价。【结果】HRCA最佳反应体系为PLP浓度1μmol/L、扩增时间20min、扩增温度63℃、Bst DNA聚合酶浓度2 U/mL。该方法对标准品的检测范围为0.50~1000 fmol/L,具有较高的种属间特异性,可以实现单碱基错配识别,且重复性与稳定性良好。在实际样本检测中,该方法对中华绒螯蟹二尖梅奇酵母肝胰腺DNA的检测灵敏度为4.13×10^(1) pg/μL,对随机抽取的中华绒螯蟹二尖梅奇酵母检出率为56.25%,与实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测结果一致。【结论】本文建立的HRCA技术可以在恒温条件下高效、快速、灵敏、特异地检测出中华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母,适用于池边检测。本研究结果不仅为酵母菌病原的检测提供一种新手段,也为该病的早期诊断和预防提供新的技术支撑,在水产病原诊断领域具有很大的应用潜力。
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关键词
超
分支
滚
环
扩
增
(HRCA)
技术
二尖梅奇酵母
中华绒螯蟹
牛奶病
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职称材料
利用超分支滚环扩增技术检测miR-21
2
作者
郭仲莉
曾照芳
鲁卫平
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第18期1963-1965,共3页
目的利用超分支滚环扩增(hyper-rolling cycle amplification,HRCA)技术建立一种检测microRNA的方法。方法以miR-21为研究对象,设计特异的逆转录引物及锁式探针。通过对不同浓度的模板及不同的microRNA进行检测来研究本方法的灵敏度和...
目的利用超分支滚环扩增(hyper-rolling cycle amplification,HRCA)技术建立一种检测microRNA的方法。方法以miR-21为研究对象,设计特异的逆转录引物及锁式探针。通过对不同浓度的模板及不同的microRNA进行检测来研究本方法的灵敏度和特异性。结果通过对反应条件进行优化,100 nmol/L的锁式探针在Taq DNA连接酶作用下46℃连接30 min,Bst DNA聚合酶作用下60℃反应50 min,可实现靶序列最大效率的扩增。该方法特异性好,最低检测浓度为10 pmol/L。结论 HRCA技术灵敏度高、特异性好,无需特殊昂贵的仪器,且简单易操作,能够应用于microRNA检测。
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关键词
MIR-21
超分支滚环扩增技术
锁式探针
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职称材料
题名
基于超分支滚环扩增技术对中华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母的高灵敏检测
1
作者
魏华
赵清如
谭雅冰
李金玲
孙昕
赵莹莹
李应东
孙娜
李晓东
机构
沈阳农业大学动物科学与医学学院
盘锦光合蟹业有限公司
盘锦光合蟹业有限公司
出处
《渔业研究》
2025年第5期681-694,共14页
基金
国家重点研发计划(2023YFD2401802)
国家虾蟹产业技术体系建设项目(CARS-48)
辽宁省应用基础研究计划项目(2023JH2/101300129)。
文摘
【背景】二尖梅奇酵母(Metschnikowiabicuspidate)是中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)“牛奶病”的病原之一,严重阻碍着中华绒螯蟹养殖业的发展。目前尚无有效治疗“牛奶病”的药物,快速、高效、准确的病原诊断是其防控的关键。相比传统的病原分离培养技术,聚合酶链式反应(PCR)等分子生物学技术已能够实现二尖梅奇酵母的安全快速检测,但仍需要复杂的变温设备,难以进行池边检测。【目的】建立一种基于超分支滚环扩增(HRCA)技术检测二尖梅奇酵母的新方法,为池边检测酵母菌病原提供新思路。【方法】本研究基于二尖梅奇酵母26S rRNA基因(U44822)序列,设计出特异性高的锁式探针(PLP)和引物,建立HRCA技术,并对该方法的灵敏度、特异性、重复性和应用效果进行了评价。【结果】HRCA最佳反应体系为PLP浓度1μmol/L、扩增时间20min、扩增温度63℃、Bst DNA聚合酶浓度2 U/mL。该方法对标准品的检测范围为0.50~1000 fmol/L,具有较高的种属间特异性,可以实现单碱基错配识别,且重复性与稳定性良好。在实际样本检测中,该方法对中华绒螯蟹二尖梅奇酵母肝胰腺DNA的检测灵敏度为4.13×10^(1) pg/μL,对随机抽取的中华绒螯蟹二尖梅奇酵母检出率为56.25%,与实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测结果一致。【结论】本文建立的HRCA技术可以在恒温条件下高效、快速、灵敏、特异地检测出中华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母,适用于池边检测。本研究结果不仅为酵母菌病原的检测提供一种新手段,也为该病的早期诊断和预防提供新的技术支撑,在水产病原诊断领域具有很大的应用潜力。
关键词
超
分支
滚
环
扩
增
(HRCA)
技术
二尖梅奇酵母
中华绒螯蟹
牛奶病
Keywords
hyper-branched rolling circle amplification(HRCA)
Metschnikowia bicuspidate
Eriocheir sinensis
milky disease
分类号
S945 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
利用超分支滚环扩增技术检测miR-21
2
作者
郭仲莉
曾照芳
鲁卫平
机构
第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科
重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第18期1963-1965,共3页
基金
国家自然科学基金(81171667)
重庆市科委攻关课题(CSTC2011AC5033)
文摘
目的利用超分支滚环扩增(hyper-rolling cycle amplification,HRCA)技术建立一种检测microRNA的方法。方法以miR-21为研究对象,设计特异的逆转录引物及锁式探针。通过对不同浓度的模板及不同的microRNA进行检测来研究本方法的灵敏度和特异性。结果通过对反应条件进行优化,100 nmol/L的锁式探针在Taq DNA连接酶作用下46℃连接30 min,Bst DNA聚合酶作用下60℃反应50 min,可实现靶序列最大效率的扩增。该方法特异性好,最低检测浓度为10 pmol/L。结论 HRCA技术灵敏度高、特异性好,无需特殊昂贵的仪器,且简单易操作,能够应用于microRNA检测。
关键词
MIR-21
超分支滚环扩增技术
锁式探针
分类号
R394-33 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于超分支滚环扩增技术对中华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母的高灵敏检测
魏华
赵清如
谭雅冰
李金玲
孙昕
赵莹莹
李应东
孙娜
李晓东
《渔业研究》
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
利用超分支滚环扩增技术检测miR-21
郭仲莉
曾照芳
鲁卫平
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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职称材料
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