高等植物赤霉素3-β-双氧化酶基因研究进展 被引量：5

1

作者 杨意宏 徐浩 +1 位作者 陈段芬 高志民 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期18-22,共5页

赤霉素3-β-双氧化酶(GA3ox)是赤霉素(GA)生物合成过程中的关键酶之一,直接作用于活性GA的生成,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用。GA3ox已在拟南芥、烟草、高粱和杨树等多种植物中得到克隆,在植物个体的不同生长阶段、不同组织中G... 赤霉素3-β-双氧化酶(GA3ox)是赤霉素(GA)生物合成过程中的关键酶之一,直接作用于活性GA的生成,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用。GA3ox已在拟南芥、烟草、高粱和杨树等多种植物中得到克隆,在植物个体的不同生长阶段、不同组织中GA3ox的表达量均存在着差异,这主要是由物种内在的遗传因素所决定的,同时环境因子和外源激素处理对GA3ox表达也有着显著的影响。通过对基因突变体的研究,揭示出GA3ox突变导致GA的生物合成受阻而间接影响植物的生长,导致植物茎秆、花、种子、果、根等部位性状的改变,包括植株矮化、结籽困难等。过量表达GA3ox基因促进GA的生成,诱导细胞的分裂与分化,促进根尖的径向伸长、种子萌发等。主要从GA3ox的基因克隆与表达模式及其功能效应两方面综述了其在高等植物中研究进展,通过对GA3ox在不同植物中的相关功能研究,探讨其在植物生长发育过程中的具体作用,以期为了解GA3ox对植物生长发育的调控机制提供参考,也有助于在生产实践中更好地利用GA3ox开展基因工程研究,定向培育植物新品种。 展开更多

关键词 赤霉素3-β-双氧化酶基因 基因表达 功能分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于PI3K/AKT/GSK-3β信号通路探讨EA改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能障碍的内在机制 被引量：3

2

作者 仲丽丽 路鑫 +7 位作者 于颖 赵秦妍 张静 刘彤慧 倪雪妍 车艳玲 吴丹 刘宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期90-98,共9页

目的探讨鞣花酸(ellagicacid,EA)对APP/PS1双转基因小鼠认知功能的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3(PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路探讨鞣花酸对双转基因小鼠海马氧化应激水平的调节机制。方法将32只SPF级6月龄APP/... 目的探讨鞣花酸(ellagicacid,EA)对APP/PS1双转基因小鼠认知功能的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3(PI3K/AKT/GSK-3β)信号通路探讨鞣花酸对双转基因小鼠海马氧化应激水平的调节机制。方法将32只SPF级6月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为4组,即APP/PS1组、APP/PS1+EA组、APP/PS1+LY294002组、APP/PS1+EA+LY294002组,每组8只,另外选取8只SPF级C57BL/6J野生型小鼠(Wildtype)作为空白对照组,即WT组。APP/PS1+EA组给予50mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃EA;APP/PS1+LY294002组予以1.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射PI3K抑制剂LY294002;APP/PS1+EA+LY294002组予以50mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃EA,同时按1.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射LY294002;WT组和APP/PS1组于相同时间点灌胃等体积10%二甲基亚砜(DMSO)。每日给药1次,连续给药60天。Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,免疫组化、蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT、GSK-3β相关蛋白的表达,透射电镜观察小鼠海马组织超微结构变化。结果与WT组相比,其他四组的逃避潜伏期均增长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.01);APP/PS1组、APP/PS1+LY294002组和APP/PS1+EA+LY294002组中的PI3K、AKT蛋白表达量显著降低(P<0.01),GSK-3β表达量显著升高(P<0.01);APP/PS1+EA组的PI3K表达量降低(P<0.05),AKT表达量显著降低(P<0.01),GSK-3β表达量升高(P<0.05);与WT组相比,APP/PS1组海马神经元细胞数目较少,线粒体结构破坏,大部分线粒体出现肿胀,线粒体的内膜和外模不完整,部分线粒体嵴消失,微管、微丝缠结,排列紊乱,而APP/PS1+EA组神经元细胞数较APP/PS1组增多,线粒体结构较清晰,可见清楚的线粒体嵴,线粒体轻度水肿。微管、微丝排列较整齐有序。结论鞣花酸改善AD模型小鼠的学习和记忆能力、减少海马神经元细胞损伤和凋亡,其作用机制可能是通过调节PI3K、AKT、GSK-3β等相关蛋白降低AD模型小鼠海马氧化应激水平。 展开更多

关键词 APP/PS1双转基因小鼠 阿尔茨海默病 鞣花酸 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B 糖原合成酶激酶-3

在线阅读 下载PDF 职称材料

花生赤霉素2-氧化酶基因的克隆和表达研究 被引量：7

3

作者 王成祥 李长生 +5 位作者 侯蕾 刘学英 安静 万书波 毕玉平 王兴军 《山东农业科学》 2013年第1期14-18,24,共6页

赤霉素2-氧化酶(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,催化有活性的赤霉素生成无活性的赤霉素。从花生荚果发育不同时期的转录组序列中筛选到GA2ox的基因片段,采用5'-RACE方法克隆了花生GA2ox基因的全长cDNA序列。序... 赤霉素2-氧化酶(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,催化有活性的赤霉素生成无活性的赤霉素。从花生荚果发育不同时期的转录组序列中筛选到GA2ox的基因片段,采用5'-RACE方法克隆了花生GA2ox基因的全长cDNA序列。序列分析表明,花生GA2ox蛋白氨基酸序列含有和其他植物同样保守的结构域。通过qRT-PCR技术对GA2ox基因在花生不同组织器官中的表达分析,发现所检测的10种组织中均有GA2ox的表达,其中成年叶片中表达最丰富,根、刚入土的果针次之。本研究结果为进一步分析该基因在花生生长发育过程中的作用提供了有用信息。 展开更多

关键词 花生 赤霉素 赤霉素2-氧化酶 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

高等植物赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达及其调控技术的研究进展 被引量：2

4

作者 石海燕 张玉星 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第4期19-22,共4页

揭示赤霉素20-氧化酶基因的分子特征,通过转基因技术调控植物体内活性赤霉素的含量,可为改良品种提供新的思路。从赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达调控及其在植物基因工程中的应用等方面进行了综述。

关键词 赤霉素20-氧化酶 基因克隆 表达调控 高等植物

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗氧化剂Isoverbascoside对MGC80-3细胞抗氧化酶活性和癌基因表达的影响 被引量：7

5

作者 陈瑞川 李立 +3 位作者 苏金华 李忌 王天叫 徐洵 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期913-917,共5页

以苔酚蓝拒染法、核黄素-NBT还原法、DTNB还原法及RNA斑点杂交分析法分别对经不同浓度Isoverbascoside(Isov)处理的MGC80-3 细胞的生长速率、II期抗氧化酶(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶)活性和N-ras、C-m yc及p53 ... 以苔酚蓝拒染法、核黄素-NBT还原法、DTNB还原法及RNA斑点杂交分析法分别对经不同浓度Isoverbascoside(Isov)处理的MGC80-3 细胞的生长速率、II期抗氧化酶(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶)活性和N-ras、C-m yc及p53 基因表达作了检测.结果显示:经Isov处理后,细胞生长明显受抑;II期抗氧化酶活性较处理前明显上升;癌基因N-ras、C-m yc的表达较处理前下降,而抑癌基因p53 表达上升. 表明Isov 展开更多

关键词 MGC80-3 抗氧化酶 抗氧化剂 癌基因 Isov 抗癌性

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆脂肪氧化酶-3基因(Lox3)启动子的克隆及其瞬时表达分析 被引量：5

6

作者 赵艳 史岩玲 +5 位作者 钱丹丹 张庆林 闫帆 王庆钰 张艳 李景文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期65-69,共5页

利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离脂肪氧化酶-3基因启动子片段Lox3p。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子及胚特异性表达元件。将克隆得到的Lox3p片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-Lox3... 利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离脂肪氧化酶-3基因启动子片段Lox3p。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子及胚特异性表达元件。将克隆得到的Lox3p片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-Lox3p。通过农杆菌介导法在大豆种子中进行瞬时表达,GUS组织化学染色及荧光测定都显示出Lox3p驱动GUS基因表达的强度高于CaMV35S启动子。结果表明,该Lox3p启动子片段具备一定的胚特异表达特性,为探明大豆脂肪氧化酶-3基因启动子胚特异表达调控序列及其调控机制的研究奠定基础。 展开更多

关键词 大豆 脂肪氧化酶-3基因 启动子 瞬时表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

山核桃赤霉素氧化酶基因CcGA3ox的克隆和功能分析 被引量：5

7

作者 魏广利 梁璧 +4 位作者 张佳琦 胡恒康 黄有军 娄和强 张启香 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期13-28,共16页

【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技... 【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技术,克隆山核桃CcGA3ox基因编码区全长;对序列进行生物信息学分析。为验证基因功能,通过同源重组技术构建具有强启动子的35S::CcGA3ox::GFP过表达载体,以核桃体细胞胚为转化材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析山核桃CcGA3ox基因在转基因阳性核桃植株中的相对表达量。采用紫外分光光度计检测植株中叶绿素含量,并分析其差异。【结果】山核桃CcGA3ox基因开放阅读框(ORF)全长为1 116 bp,编码371个氨基酸。对CcGA3ox氨基酸序列分析发现,其含有2OG-FeⅡ-Oxy结构域。系统进化树显示,CcGA3ox与薄壳山核桃CiGA3ox亲缘关系最近,与核桃JrGA3ox亲缘关系较近。对核桃体细胞胚进行遗传转化、荧光检测及PCR验证表明,35S::CcGA3ox::GFP过表达载体被成功转入核桃体胚中。核桃阳性再生植株与对照植株相比,株高明显增高;qRT-PCR结果表明,CcGA3ox基因相对表达量显著增加。同时,过表达CcGA3ox基因可以降低核桃阳性再生植株中叶绿素含量。【结论】山核桃CcGA3ox基因在核桃生长过程中对株高调控起关键作用。 展开更多

关键词 山核桃 赤霉素3-氧化酶基因(GA3ox) 遗传转化 功能分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

梨矮化砧木中矮1号GA20-氧化酶基因克隆与表达分析 被引量：12

8

作者 宣利利 欧春青 +4 位作者 王斐 王志刚 程飞飞 李振茹 姜淑苓 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期883-887,共5页

中矮1号是中国农业科学院果树研究所选育的梨优良矮化砧木,为研究其矮化机理,利用RT-PCR结合RACE方法克隆了梨矮化砧木中矮1号的1个GA20-氧化酶基因,并对该基因及其氨基酸序列以及该基因在不同生长类型梨品种中不同时期新梢叶片中的表... 中矮1号是中国农业科学院果树研究所选育的梨优良矮化砧木,为研究其矮化机理,利用RT-PCR结合RACE方法克隆了梨矮化砧木中矮1号的1个GA20-氧化酶基因,并对该基因及其氨基酸序列以及该基因在不同生长类型梨品种中不同时期新梢叶片中的表达进行了分析。结果表明,该基因全长1 179 bp,推导编码392个氨基酸,其编码的蛋白质具有GA20-氧化酶基因家族所具有的功能活性位点和特征保守单元,该基因与苹果GA20-氧化酶基因氨基酸序列一致性达91.58%,因此确定该基因为中矮1号GA20-氧化酶基因,将其命名为PcGA20ox1(Gen-Bank登录号为HQ833589)。PcGA20ox1基因在中矮1号、亲本锦香和对照早酥3个品种不同发育阶段新梢叶片中的表达强度均为中矮1号<锦香<早酥,与植株高矮表现一致,表明PcGA20ox1基因的表达强弱与植株高矮相关。 展开更多

关键词 梨 矮化砧木 赤霉素 GA20-氧化酶基因 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

脂多糖对人胃癌细胞环氧化酶-2基因启动子活性的影响 被引量：2

9

作者 徐苓 马妍慧 +1 位作者 袁向亮 沈立松 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期283-287,335,共6页

目的研究炎症状态下人胃癌细胞中环氧化酶-2(COX-2)基因启动子活性。方法采用免疫组织化学染色方法观察人胃癌组织中COX-2的表达情况。构建人COX-2基因启动子重组质粒pGL3-COX-2-promoter,采用脂质体介导转染法将重组质粒和内参质粒pRL... 目的研究炎症状态下人胃癌细胞中环氧化酶-2(COX-2)基因启动子活性。方法采用免疫组织化学染色方法观察人胃癌组织中COX-2的表达情况。构建人COX-2基因启动子重组质粒pGL3-COX-2-promoter,采用脂质体介导转染法将重组质粒和内参质粒pRL-TK共转染胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823。以不同质量浓度的脂多糖(LPS)工作液刺激细胞,于干预后不同时间点收集细胞,利用双荧光报告系统进行双荧光素酶报告基因活性检测,Western blotting检测COX-2蛋白的表达。结果免疫组织化学染色观察发现,胃癌癌细胞胞质及癌旁黏膜上皮细胞的胞质中均有COX-2蛋白表达。在相同时间点,SGC-7901和BGC-823内COX-2基因启动子活性随LPS质量浓度的上升而增高(P<0.05);高浓度(10μg/mL)LPS刺激6 h后COX-2基因启动子活性达到峰值,随后逐渐降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示:在10μg/mL LPS干预下,SGC-7901和BGC-823内COX-2蛋白表达随LPS干预时间的延长而呈现上升趋势。结论炎症刺激可激活人胃癌细胞COX-2基因启动子的表达活性。 展开更多

关键词 胃癌 环氧化酶-2 启动子 双荧光素酶报告基因 脂多糖

在线阅读 下载PDF 职称材料

小桐子赤霉素20氧化酶的基因克隆及低温下表达分析 被引量：2

10

作者 王海波 邹竹荣 龚明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期140-148,共9页

赤霉素20氧化酶是植物赤霉素生物合成的限速酶,决定有生物活性的GA1与GA4的合成量。基于先前获得的小桐子低温锻炼转录组数据,以小桐子幼苗的根为材料,采用RT-PCR技术克隆到小桐子赤霉素20氧化酶基因Jc GA20ox的c DNA序列(Gen Bank登录... 赤霉素20氧化酶是植物赤霉素生物合成的限速酶,决定有生物活性的GA1与GA4的合成量。基于先前获得的小桐子低温锻炼转录组数据,以小桐子幼苗的根为材料,采用RT-PCR技术克隆到小桐子赤霉素20氧化酶基因Jc GA20ox的c DNA序列(Gen Bank登录号KJ670150.1)。该c DNA全长1 307 bp,含有完整的开放阅读框(1 131 bp),编码376个氨基酸,分子量为43 k D,理论等电点为6.7。其推导蛋白属于2-ODD家族,包含2-酮戊二酸双加氧酶结构域(Fe2OG_OXY)。半定量RT-PCR表达分析显示,Jc GA20ox在小桐子各组织中都有表达,但表达水平具有组织特异性,在茎中表达量较高,且受低温诱导表达最显著,而在叶中表达量相对较低。 展开更多

关键词 小桐子 赤霉素20氧化酶 2-酮戌二酸双加氧酶结构域 低温诱导

在线阅读 下载PDF 职称材料

KLF3基因3′-UTR区双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建与活性鉴定 被引量：1

11

作者 翟博 李旭 +4 位作者 王春昕 赵云辉 孙铭 张立春 张明新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期644-650,共7页

试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Target... 试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与KLF3基因3′-UTR相互作用的miRNA;使用脂质体2000转染试剂将miRNAs mimics与构建好的KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶报告载体或突变载体共转染于常规培养的293T细胞中,检测荧光素酶活性。结果表明,KLF3基因3′-UTR可能是miR-21的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-21 mimics组(0.6900±0.0144)比突变组(1.000±0.0688)和空白对照组(1.000±0.0159)KLF3基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体和突变载体的活性降低了31%(P<0.01)。本试验成功构建了含有KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶基因报告载体与突变载体,初步证实miR-21对KLF3基因有调控作用。 展开更多

关键词 KLF3基因 双荧光素酶基因报告载体 MIR-21 3′-非编码区

在线阅读 下载PDF 职称材料

PttGA20-氧化酶基因dsRNA抑止载体的构建 被引量：2

12

作者 周冰彬 陈晓阳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第32期14005-14007,共3页

[目的]通过基因工程手段抑止赤霉素调控基因PttGA20-氧化酶基因的表达,从而抑制植物高生长和节间伸长,达到培育矮化植株的目的。[方法]依据RNAi原理,设计引物扩增正义及反义PttGA20ox片段插入pBI121载体CaMV35S启动子下游区域,并在正义... [目的]通过基因工程手段抑止赤霉素调控基因PttGA20-氧化酶基因的表达,从而抑制植物高生长和节间伸长,达到培育矮化植株的目的。[方法]依据RNAi原理,设计引物扩增正义及反义PttGA20ox片段插入pBI121载体CaMV35S启动子下游区域,并在正义和反义片段间隔区插入茎环结构GUS基因片段,将npⅡt标记基因替换为抗除草剂基因bar,构建dsRNA抑止载体。[结果]所构建的抑止载体经经不同内切酶酶切鉴定后均可释放出与目的条带大小相同片段,表明已成功构建PttGA20-氧化酶基因dsRNA抑止载体。[结论]该研究为培育矮化植株提供了新的途径。 展开更多

关键词 赤霉素 PttGA20-氧化酶基因 RNAI 载体构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

血清lncRNA DUXAP8及miR-24-3p在子痫前期诊断及妊娠结局评估中的价值 被引量：1

13

作者 高海侠 高京京 +3 位作者 张晓月 司凡 刘晓铮 刘双双 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第2期155-160,共6页

目的分析血清长非编码RNA双同源盒A伪基因8(lncRNA DUXAP8),微小RNA(miR)-24-3p在子痫前期(PE诊断及妊娠结局评估中的价值。方法选取2019年3月至2022年9月承德市中心医院妇儿院区产科124例PE患者为PE组,同期健康孕妇124例为对照组。根... 目的分析血清长非编码RNA双同源盒A伪基因8(lncRNA DUXAP8),微小RNA(miR)-24-3p在子痫前期(PE诊断及妊娠结局评估中的价值。方法选取2019年3月至2022年9月承德市中心医院妇儿院区产科124例PE患者为PE组,同期健康孕妇124例为对照组。根据妊娠结局分为不良组27例和良好组97例。均采用qRT-PCR法测定血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p水平。采用多因素Logistic回归分析PE孕妇妊娠结局影响因素。采用ROC曲线分析血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p水平诊断PE及预后的价值。结果PE组血清lncRNA DUXAP8水平低于对照组,miR-24-3p水平高于对照组(P<0.05)。TargetScanHuman网站预测显示,lncRNA DUXAP8与miR-24-3p间可能存在靶向关系。相关性分析表明,lncRNA DUXAP8与miR-24-3p呈负相关(r=-0.471,P<0.001)。血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p联合诊断PE的AUC显著高于单独诊断(Z_(lncRNA DUXAP8-联合)=3.285,P=0.001;Z_(miR-24-3p-联合)=3.020,P=0.003),联合诊断的敏感性为92.74%,特异性为72.31%。良好组孕妇血清lncRNA DUXAP8水平高于不良组,miR-24-3p水平低于不良组(P<0.05)。良好组孕妇收缩压、舒张压、产前血糖、血红蛋白、24 h尿蛋白、白细胞计数、LDH低于不良组,血小板计数、血清白蛋白高于不良组(P<0.05)。lncRNA DUXAP8是PE孕妇妊娠结局不良保护因素,miR-24-3p是危险因素(P<0.05)。血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p联合诊断PE孕妇妊娠结局的AUC显著高于单独诊断(Z_(lncRNA DUXAP8-联合)=2.113,P=0.035,Z_(miR-24-3p-联合)=3.033,P=0.002),联合诊断的敏感性为88.89%,特异性为80.41%。结论PE孕妇lncRNA DUXAP8水平降低,miR-24-3p水平升高,可能与PE的发生和孕妇妊娠结局相关。 展开更多

关键词 长非编码RNA双同源盒A伪基因8 微小RNA-24-3p 子痫前期 妊娠结局

在线阅读 下载PDF 职称材料

一个抑制AP-1活性的人类新基因AC3-33的克隆和初步功能研究 被引量：2

14

作者 刘鹏 邓唯唯 +6 位作者 高鹏 陆阳 孙博 李明 赵杰 石太平 张秀军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期575-582,共8页

Activator protein-1(AP-1)是重要的转录因子,其活性失调与肿瘤等多种疾病直接相关。本文运用"高通量高内涵细胞筛选技术(high throughput-high content cell-based screening technology)"对650个以未知功能基因为主的人类... Activator protein-1(AP-1)是重要的转录因子,其活性失调与肿瘤等多种疾病直接相关。本文运用"高通量高内涵细胞筛选技术(high throughput-high content cell-based screening technology)"对650个以未知功能基因为主的人类基因进行AP-1双荧光素酶报告基因筛选(Dual-Luciferase reporter gene screening),获得了一个可抑制佛波酯(PMA)加离子霉素(Inonmycin)诱导的AP-1活性的人类新基因AC3-33(GenBank中该基因名为C3orf33,No.FLJ31139)。生物信息学分析该基因序列全长1931bp,由6个外显子和5个内含子组成,定位于3q25.31,从271～1026有一个编码251个氨基酸的可读框,编码一个约29kDa的蛋白,在肾上腺和宫颈等多种组织都有表达。AC3-33与其他人类已知蛋白质没有明显的同源性,亚细胞定位于细胞质中,许多氨基酸序列高度保守。初步实验结果显示AC3-33是一个有重要功能的人类新基因。 展开更多

关键词 AP-1 基因克隆 双荧光素酶报告基因筛选 AC3-33

在线阅读 下载PDF 职称材料

1α,25-双羟维生素D_3作用于靶细胞的机制 被引量：4

15

作者 麦康森 张文兵 《青岛海洋大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第6期891-896,共6页

1α,2 5-双羟维生素 D3 [1 α,2 5(OH) 2 D3 ]作用于靶细胞后产生 2种不同的信号传导系统 :基因效应和非基因效应。前者是指 1α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D核受体 (n VDR)结合 ,n VDR再与视黄酸 X受体 (RXR)发生异二聚化反应 ,在转录因子... 1α,2 5-双羟维生素 D3 [1 α,2 5(OH) 2 D3 ]作用于靶细胞后产生 2种不同的信号传导系统 :基因效应和非基因效应。前者是指 1α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D核受体 (n VDR)结合 ,n VDR再与视黄酸 X受体 (RXR)发生异二聚化反应 ,在转录因子 (TF)的作用下 ,促使靶基因转录。后者是指 1 α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D膜受体 (m VDR)结合 ,随之引发一系列信号传导 ,促使细胞膜上的 Ca2 +-通道迅速打开。探讨 1α,2 5(OH) 2 D3 的作用机制有利于开发治疗维生素 D内分泌系统疾病的新药。本文就目前有关 1 α,2 5(OH) 2 D3 作用于靶细胞的机制的研究成果进行综述。 展开更多

关键词 1α 25-双羟维生素D3 靶细胞 基因效应 非基因效应 作用机制 内分泌系统疾病 药理学

在线阅读 下载PDF 职称材料

MiR-30a-3p靶基因的预测与验证 被引量：1

16

作者 孙晓娈 姚元庆 +2 位作者 尹国武 延佳佳 朱晓明 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期671-674,共4页

目的:预测和验证miR-30a-3p的靶基因。方法:利用生物信息学方法预测miR-30a-3p的靶基因;扩增靶基因3'UTR区,与pmirGLO质粒连接构建靶基因融合表达载体后与miR-30a-3p mimics共同转染到人正常滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中,利用双荧... 目的:预测和验证miR-30a-3p的靶基因。方法:利用生物信息学方法预测miR-30a-3p的靶基因;扩增靶基因3'UTR区,与pmirGLO质粒连接构建靶基因融合表达载体后与miR-30a-3p mimics共同转染到人正常滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-3p与靶基因的靶向关系;在HTR-8/SVneo细胞中转染miR-30a-3p mimics,利用Western Blot实验检测靶蛋白表达水平。结果:生物信息学方法预测结果显示胰岛素样生长因子-1(IGF-1)为miR-30a-3p靶基因之一;双荧光素酶报告基因实验显示,IGF-1基因3'UTR区中含有明确的miR-30a-3p结合位点;Western Blot实验结果显示HTR-8/SVneo细胞转染miR-30a-3p mimics后,IGF-1蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论:miR-30a-3p与IGF-1有确切的靶向关系,miR-30a-3p能够负性调控IGF-1蛋白水平的表达。 展开更多

关键词 微小RNA miR-30a-3p 胰岛素样生长因子-1 双荧光素酶报告基因实验

在线阅读 下载PDF 职称材料

MiR-143通过负调控GLI3基因来抑制鼻咽癌细胞的迁移 被引量：6

17

作者 钟文 何本夫 +3 位作者 朱成全 肖烈钢 周思朗 彭心昭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1057-1061,共5页

目的探讨miR-143在鼻咽癌细胞迁移中的生物学功能及可能的分子机制。方法应用生物信息软件预测miR-143靶基因,分别将预测靶基因GLI3的3'UTR及其突变体构建到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中。通过荧光素酶报告基因检测分析miR-143对... 目的探讨miR-143在鼻咽癌细胞迁移中的生物学功能及可能的分子机制。方法应用生物信息软件预测miR-143靶基因,分别将预测靶基因GLI3的3'UTR及其突变体构建到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中。通过荧光素酶报告基因检测分析miR-143对靶基因GLI3的调控作用,并检测转染miR-143 mimics、inhibitor和siGLI3后鼻咽癌5-8F细胞miR-143和GLI3的表达水平及迁移能力的变化。结果生物信息学预测Hh信号通路转录基因GLI3可能是miR-143的靶基因;双荧光素酶报告基因分析表明miR-143能够作用于GLI3的3'UTR;Western Blot和qRT-PCR结果进一步证明5-8F细胞中miR-143与GLI3的表达呈负相关,并影响5-8F细胞的迁移能力。结论 MiR-143可通过负调控靶基因GLI3抑制鼻咽癌细胞的迁移,为进一步研究miR-143及Hh信号通路在鼻咽癌中的作用机制提供参考价值。 展开更多

关键词 MIR-143 GLI3 双荧光素酶报告基因 5-8F 迁移

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠miR-151-3p靶基因筛选和鉴定 被引量：1

18

作者 魏欢 李仲文 沈清武 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期23-31,共9页

采用生物信息软件系统分析miR-151-3p的保守性,并筛选出与小鼠肌肉发育和肿瘤发生相关靶基因:蛋白激酶3(serine/threonine kinase 3,Akt 3),Twist碱性螺旋-环-螺旋转录因子(twist basic helix-loophelix 1,Twist 1)和T型电压依赖性钙通... 采用生物信息软件系统分析miR-151-3p的保守性,并筛选出与小鼠肌肉发育和肿瘤发生相关靶基因:蛋白激酶3(serine/threonine kinase 3,Akt 3),Twist碱性螺旋-环-螺旋转录因子(twist basic helix-loophelix 1,Twist 1)和T型电压依赖性钙通道α1g亚基(calcium channel,voltage-dependent,T type,alpha 1g subunit,Cacna1g)。采用实时定量PCR及双荧光素酶报告基因检测技术对以上靶基因进行初步验证,结果表明,超表达miR-151-3p显著抑制Akt 3mRNA表达,而Twist 1和Cacna1g mRNA表达变化不显著;双荧光素酶报告系统分析发现,miR-151-3p显著抑制野生型Akt 3报告载体相对荧光素酶活性,突变Akt 3 3′UTR与miR-151-3p结合的位点后,相对荧光素酶活性得到恢复,而Twist 1和Cacna1g基因双荧光素酶报告载体无此现象,结果证实Akt 3是miR-151-3p的靶基因。 展开更多

关键词 miR-151-3p 靶基因 双荧光素酶报告基因检测系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

MiR-20b直接靶向3’-UTR调控HIF-1α表达 被引量：1

19

作者 王贺龙 罗玉岚 +4 位作者 陶象男 汪忆梦 何晶 郭术俊 宋传旺 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期657-661,共5页

目的:探讨微小RNA-20b(micro RNA-20b/miR-20b)是否直接靶向低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)信使RNA的3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)调控其基因表达。方法:采用Target Scan和miRanda算法预测H... 目的:探讨微小RNA-20b(micro RNA-20b/miR-20b)是否直接靶向低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)信使RNA的3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)调控其基因表达。方法:采用Target Scan和miRanda算法预测HIF-1α3’-UTR区是否存在miR-20b的配对序列;构建并鉴定表达HIF-1α3’-UTR的双荧光素酶基因报告系统(pmiRRB-ReportTM-HIF-1α3’-UTR),将重组质粒(recombinant plasmid,RP)与mimics-miR-20b(M)或NC-miR-20b(N)共转染He La细胞,本研究共分为RP、RP+M、RP+N、P、P+M和P+N六组,24 h后检测各组双荧光素酶活性的比值。结果:HIF-1α3’-UTR区存在miR-20b配对区域;成功构建了含HIF-1α3’-UTR序列的双荧光素酶基因报告载体;重组质粒与mimics-miR-20b共转染的He La细胞荧光素酶活性明显低于其他对照组(P=0.022)。结论:miR-20b可以直接靶向结合HIF-1α3’-UTR区负向调控其表达。 展开更多

关键词 低氧诱导因子 3’-非编码区 miR-20b 双荧光素酶基因报告系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

miR-148-5p靶向H型血管调控因子Slit3的实验研究 被引量：2

20

作者 陈赛楠 黄云梅 +1 位作者 林燕萍 黄美雅 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期959-965,共7页

目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3′UTR... 目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3′UTR互作的miRNAs,构建野生型和突变型Slit3-3′UTR重组荧光素酶报告载体,和miRNAs表达载体共转染293 T细胞,双荧光素酶报告基因测定荧光素酶活性验证miRNA对Slit3-3′UTR的靶向作用。结果 与假手术组相比,模型组Slit3 mRNA表达水平略上调和平均光密度显著上调,生物信息学预测Slit3-3′UTR与miR-148a-5p、miR-148b-5p、miR-410-3p、miR-129-5p和miR-374-5p存在碱基结合位点,野生型Slit3-3′UTR共转染miR-148b-5p荧光活性下调至空白对照组的68.91%,突变型Slit3-3′UTR共转染miR-148b-5p荧光活性未见下调。结论 Slit3可能是绝经后骨质疏松症H型血管的调控基因,miR-148b-5p与Slit3-3′UTR的靶向结合直接调控Slit3的表达水平。 展开更多

关键词 绝经后骨质疏松症 H型血管 Slit3 miR-148-5p 双荧光素酶报告基因

在线阅读 下载PDF 职称材料