花生赤霉素2-氧化酶基因的克隆和表达研究 被引量：7

1

作者 王成祥 李长生 +5 位作者 侯蕾 刘学英 安静 万书波 毕玉平 王兴军 《山东农业科学》 2013年第1期14-18,24,共6页

赤霉素2-氧化酶(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,催化有活性的赤霉素生成无活性的赤霉素。从花生荚果发育不同时期的转录组序列中筛选到GA2ox的基因片段,采用5'-RACE方法克隆了花生GA2ox基因的全长cDNA序列。序... 赤霉素2-氧化酶(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,催化有活性的赤霉素生成无活性的赤霉素。从花生荚果发育不同时期的转录组序列中筛选到GA2ox的基因片段,采用5'-RACE方法克隆了花生GA2ox基因的全长cDNA序列。序列分析表明,花生GA2ox蛋白氨基酸序列含有和其他植物同样保守的结构域。通过qRT-PCR技术对GA2ox基因在花生不同组织器官中的表达分析,发现所检测的10种组织中均有GA2ox的表达,其中成年叶片中表达最丰富,根、刚入土的果针次之。本研究结果为进一步分析该基因在花生生长发育过程中的作用提供了有用信息。 展开更多

关键词 花生 赤霉素 赤霉素2-氧化酶 基因表达

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高羊茅赤霉素2-氧化酶编码基因的克隆及功能验证 被引量：1

2

作者 徐光远 刘松虎 +3 位作者 梁本国 马磊 杨佑明 董江丽 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期130-138,共9页

赤霉素(GA)是一类重要的植物激素,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用。许多赤霉素代谢途径关键酶的编码基因已经被克隆和研究,但在高羊茅(Festuca arundinacea)中尚未见报道,利用RACE技术获得了高羊茅赤霉素2-氧化酶基因(FaGA2ox)... 赤霉素(GA)是一类重要的植物激素,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用。许多赤霉素代谢途径关键酶的编码基因已经被克隆和研究,但在高羊茅(Festuca arundinacea)中尚未见报道,利用RACE技术获得了高羊茅赤霉素2-氧化酶基因(FaGA2ox)。结果表明:FaGA2oxcDNA全长1566bp,包含1026bp开放阅读框,编码一个由341个氨基酸组成的蛋白质。FaGA2ox转基因烟草(Nicotiana tabocum)表现出赤霉素缺陷的表型,叶片面积明显变小,且叶片褶皱,叶片颜色暗绿,节间长度明显变短。综上所述,FaGA2ox在烟草中的过量表达可以导致植株矮化,为进一步利用该基因转化高羊茅培育矮化植株奠定基础。 展开更多

关键词 高羊茅 矮化 赤霉素2-氧化酶

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小桐子赤霉素20氧化酶的基因克隆及低温下表达分析 被引量：2

3

作者 王海波 邹竹荣 龚明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期140-148,共9页

赤霉素20氧化酶是植物赤霉素生物合成的限速酶,决定有生物活性的GA1与GA4的合成量。基于先前获得的小桐子低温锻炼转录组数据,以小桐子幼苗的根为材料,采用RT-PCR技术克隆到小桐子赤霉素20氧化酶基因Jc GA20ox的c DNA序列(Gen Bank登录... 赤霉素20氧化酶是植物赤霉素生物合成的限速酶,决定有生物活性的GA1与GA4的合成量。基于先前获得的小桐子低温锻炼转录组数据,以小桐子幼苗的根为材料,采用RT-PCR技术克隆到小桐子赤霉素20氧化酶基因Jc GA20ox的c DNA序列(Gen Bank登录号KJ670150.1)。该c DNA全长1 307 bp,含有完整的开放阅读框(1 131 bp),编码376个氨基酸,分子量为43 k D,理论等电点为6.7。其推导蛋白属于2-ODD家族,包含2-酮戊二酸双加氧酶结构域(Fe2OG_OXY)。半定量RT-PCR表达分析显示,Jc GA20ox在小桐子各组织中都有表达,但表达水平具有组织特异性,在茎中表达量较高,且受低温诱导表达最显著,而在叶中表达量相对较低。 展开更多

关键词 小桐子 赤霉素20氧化酶 2-酮戌二酸双加氧酶结构域 低温诱导

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GA2-oxidase氧化酶基因的研究进展 被引量：1

4

作者 郭姗姗 《农业与技术》 2023年第6期18-20,共3页

GA2-oxidase氧化酶(GA2ox)是影响赤霉素合成和代谢的关键酶之一,其可以将具有生物活性的赤霉素或前体分解成没有生物活性的物质,在植物的生长发育中起着重要的作用。目前已经在拟南芥、杨树、水稻和葡萄等多种植物中克隆表达,其功能在... GA2-oxidase氧化酶(GA2ox)是影响赤霉素合成和代谢的关键酶之一,其可以将具有生物活性的赤霉素或前体分解成没有生物活性的物质,在植物的生长发育中起着重要的作用。目前已经在拟南芥、杨树、水稻和葡萄等多种植物中克隆表达,其功能在不同物种之间也存在着差异。本研究主要从GA2ox基因的表达模式和基因功能进行阐述,重点阐述了GA2ox基因的时空表达情况,环境和激素对GA2ox基因的表达影响;GA2ox基因对植物的株高、花、果实和种子性状的改变,及与抗性的相互作用,更好地为了解GA2ox基因的作用机制提供参考。 展开更多

关键词 赤霉素氧化酶 ga2-oxidase氧化酶 基因表达 功能分析

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马铃薯GA2ox家族基因响应赤霉素(GA)和低温胁迫表达分析 被引量：4

5

作者 刘计涛 王梦诗 +5 位作者 索海翠 王丽 单建伟 李成晨 安康 李小波 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第5期1110-1119,共10页

本研究基于结构域筛选马铃薯(Solanum tuberosum)基因组,获得13个StGA2ox基因家族成员。生物信息学分析结果显示,StGA2ox家族基因分为C19和C202个家族,其中C19又分为2个亚族,13个StGA2ox基因不均匀得分布于8条染色体上,其中有5对共线性... 本研究基于结构域筛选马铃薯(Solanum tuberosum)基因组,获得13个StGA2ox基因家族成员。生物信息学分析结果显示,StGA2ox家族基因分为C19和C202个家族,其中C19又分为2个亚族,13个StGA2ox基因不均匀得分布于8条染色体上,其中有5对共线性基因对,7号染色体上有3个基因形成1个串联重复基因簇。此外,StGA2ox启动子区域存在响应低温胁迫、植物激素等多种顺式作用元件。利用实时荧光定量PCR方法分析外源GA_(3)和低温胁迫处理条件下StGA2ox表达模式,所有StGA2ox基因均能够被外源GA_(3)诱导表达,其中StGA2ox2、StGA2ox4、StGA2ox8、StGA2ox9和StGA2ox10受低温胁迫诱导表达显著上调,暗示着这5个基因在调节马铃薯低温胁迫耐性中发挥重要功能,可以作为进一步开展马铃薯耐低温研究的候选基因。 展开更多

关键词 马铃薯 ga2ox基因 生物信息学分析 赤霉素(ga) 低温胁迫

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山核桃赤霉素氧化酶基因CcGA3ox的克隆和功能分析 被引量：5

6

作者 魏广利 梁璧 +4 位作者 张佳琦 胡恒康 黄有军 娄和强 张启香 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期13-28,共16页

【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技... 【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技术,克隆山核桃CcGA3ox基因编码区全长;对序列进行生物信息学分析。为验证基因功能,通过同源重组技术构建具有强启动子的35S::CcGA3ox::GFP过表达载体,以核桃体细胞胚为转化材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析山核桃CcGA3ox基因在转基因阳性核桃植株中的相对表达量。采用紫外分光光度计检测植株中叶绿素含量,并分析其差异。【结果】山核桃CcGA3ox基因开放阅读框(ORF)全长为1 116 bp,编码371个氨基酸。对CcGA3ox氨基酸序列分析发现,其含有2OG-FeⅡ-Oxy结构域。系统进化树显示,CcGA3ox与薄壳山核桃CiGA3ox亲缘关系最近,与核桃JrGA3ox亲缘关系较近。对核桃体细胞胚进行遗传转化、荧光检测及PCR验证表明,35S::CcGA3ox::GFP过表达载体被成功转入核桃体胚中。核桃阳性再生植株与对照植株相比,株高明显增高;qRT-PCR结果表明,CcGA3ox基因相对表达量显著增加。同时,过表达CcGA3ox基因可以降低核桃阳性再生植株中叶绿素含量。【结论】山核桃CcGA3ox基因在核桃生长过程中对株高调控起关键作用。 展开更多

关键词 山核桃 赤霉素3-氧化酶基因(ga3ox) 遗传转化 功能分析

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广藿香PcGA2ox1基因克隆、VIGS载体构建和表达分析

7

作者 严雅玲 曾晴 +2 位作者 严寒静 何梦玲 张宏意 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期19-26,共8页

赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学... 赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学分析结果表明,PcGA2ox1蛋白编码186个氨基酸,为亲水性蛋白,分子量为20.98 kDa,等电点为5.81,不含信号肽,无跨膜结构域,具有GA2ox超基因家族的保守结构域,主要定位在细胞核。系统发育分析结果显示,PcGA2ox1基因与丹参GA2ox7的亲缘关系最为密切。qRT-PCR结果显示,PcGA2ox1基因在广藿香中的表达具有组织特异性,叶中表达量最高,根中表达量最低。用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术侵染广藿香的结果显示,侵染两周后,PcGA2ox1基因表达量比阴性对照下降83%,比空白对照下降71%,沉默效果明显。本研究结果可为深入了解PcGA2ox1结构、功能和作用机理奠定基础,并为广藿香优良品种选育提供参考。 展开更多

关键词 广藿香 赤霉素2-氧化酶(ga2ox) 基因克隆 病毒诱导基因沉默(VIGS) 表达分析

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草地早熟禾PpGA2ox基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 被引量：7

8

作者 檀鹏辉 李俊 +3 位作者 陈小云 张兰 滕珂 尹淑霞 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期8-14,30,共8页

利用RACE技术从草地早熟禾中克隆赤霉素合成代谢的关键酶GA2-氧化酶基因(PpGA2ox),提交到GenBank,登录号为KX254272。其开放阅读框为1047bp,编码348个氨基酸。系统进化分析表明,PpGA2ox与大麦、小麦及二穗短柄草中的GA2ox亲缘关系较近... 利用RACE技术从草地早熟禾中克隆赤霉素合成代谢的关键酶GA2-氧化酶基因(PpGA2ox),提交到GenBank,登录号为KX254272。其开放阅读框为1047bp,编码348个氨基酸。系统进化分析表明,PpGA2ox与大麦、小麦及二穗短柄草中的GA2ox亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示,其编码的蛋白定位于细胞核和细胞质中。实时荧光定量分析表明,PpGA2ox在幼嫩叶片中的表达量最高,且受GA3、MeJA及IAA三种激素的诱导。 展开更多

关键词 草地早熟禾 ga2-氧化酶基因 克隆 亚细胞定位 表达分析

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草地早熟禾PpGA2ox基因启动子的克隆及功能分析 被引量：9

9

作者 檀鹏辉 滕珂 +2 位作者 李俊 张兰 尹淑霞 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页

为了研究草地早熟禾(Poa pratensis L.)GA2-氧化酶基因(PpGA2ox)的启动子,利用染色体步移的方法从草地早熟禾中克隆得到1109bp的PpGA2ox基因启动子序列。Plant CARE在线预测结果表明该启动子序列中存在CAAT-box、TATA-box等启动子基本... 为了研究草地早熟禾(Poa pratensis L.)GA2-氧化酶基因(PpGA2ox)的启动子,利用染色体步移的方法从草地早熟禾中克隆得到1109bp的PpGA2ox基因启动子序列。Plant CARE在线预测结果表明该启动子序列中存在CAAT-box、TATA-box等启动子基本顺式作用元件以及响应干旱胁迫和茉莉酸甲酯诱导的调控元件。构建PpGA2ox基因启动子与GUS报告基因融合的植物表达载体转化拟南芥,阳性植株GUS组织化学染色结果表明PpGA2ox基因启动子可以驱动GUS基因在拟南芥中表达并且表达具有组织特异性。与对照相比,激素处理及非生物胁迫下GUS基因表达量发生变化,推测PpGA2ox基因的表达可受到激素及非生物胁迫调控。 展开更多

关键词 草地早熟禾 ga2-氧化酶基因 启动子 GUS染色

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毛果杨赤霉素氧化酶基因家族鉴定与功能分析 被引量：2

10

作者 修志静 管非凡 +2 位作者 诸葛祥林 王一鸣 杨海灵 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期137-146,172,共11页

【目的】赤霉素氧化酶(GAox)是不同赤霉素之间相互转化的关键酶,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因家族(2ODD),选择毛果杨GAox基因家族为研究对象,探究木本植物GAox基因家族成员的进化关系和功能分化机制。【方法】在Phytozome和PLAZA... 【目的】赤霉素氧化酶(GAox)是不同赤霉素之间相互转化的关键酶,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因家族(2ODD),选择毛果杨GAox基因家族为研究对象,探究木本植物GAox基因家族成员的进化关系和功能分化机制。【方法】在Phytozome和PLAZA数据库中搜索到水稻、拟南芥和毛果杨2ODD基因,通过系统进化分析确认毛果杨2ODD基因中参与赤霉素代谢的GAox基因,然后整合基因组定位、基因结构、基因表达模式和酶生化活性等数据对GAox基因家族进行研究。【结果】从毛果杨基因组中鉴定得到124个2ODD成员,通过系统进化分析确认其中包含27个GAox基因,它们可能参与到赤霉素合成。毛果杨27个GAox基因分成4个亚家族,分别是C20-GA2ox、GA20ox、C19-GA2ox和GA3ox。基因组定位的结果发现27个毛果杨GAox基因分散定位在19条染色体中的14条染色体上,其中有11对GAoxs基因是由基因组的大片段重复产生的。酶学活性测定的结果表明,PtGA2ox3和PtGA2ox5催化GA1生成GA8,GA9生成GA51,而PtGA20ox6、PtGA20ox7和PtGA20ox8催化GA15生成GA24,GA24生成GA9,GA53生成GA20,显示该基因家族成员在底物特异性方面发生了变化。其中PtGA2ox3对GA9的活性是PtGA2ox5的104倍,但是PtGA2ox3和PtGA2ox5具有相似的三维结构。通过活性中心的序列比对发现,PtGA2ox3存在多个非极性氨基酸,PtGA2ox5存在多个带羟基的氨基酸,推测PtGA2ox3活性中心位置附近的非极性基团是引起其催化活性高的原因。【结论】毛果杨GAox基因家族的基本特征、进化关系和部分基因的功能得到了初步解析,为加深对毛果杨赤霉素代谢途径的了解提供新的视角。 展开更多

关键词 毛果杨 赤霉素 基因家族 2ODD ga氧化酶 生化活性

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拟南芥G蛋白突变体gpa1-1、gpa1-2形态及生理特性分析

11

作者 史冬燕 陈善娜 +3 位作者 邓国宾 夏小环 徐玲玲 陈小兰 《西南农业学报》 CSCD 2005年第3期260-263,共4页

对拟南芥野生型Ws及其G蛋白α亚基突变体gpa1 1和gpa1 2的形态特征进行了比较,并研究了低温处理对其抗氧化酶系活力和丙二醛含量的差异。结果表明,与野生型相比,两突变体形态上发生了较大的变化,并表现出对低温反应敏感性的降低。低温12... 对拟南芥野生型Ws及其G蛋白α亚基突变体gpa1 1和gpa1 2的形态特征进行了比较,并研究了低温处理对其抗氧化酶系活力和丙二醛含量的差异。结果表明,与野生型相比,两突变体形态上发生了较大的变化,并表现出对低温反应敏感性的降低。低温12h时,野生型的SOD酶和POD酶活迅速发生变化,丙二醛含量迅速升高,而两突变体变化较平缓。 展开更多

关键词 ga Ws gpa1-1 gpa1-2 抗氧化酶系 丙二醛

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基于转录组测序技术探究GA_3和CPPU抑制葡萄果锈产生的机理 被引量：5

12

作者 冯娇 王武 +1 位作者 侯旭东 陶建敏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期895-903,共9页

为探究GA_3(赤霉素)和CPPU[N-(2-氯-4-吡啶基)-N'-苯基脲]抑制葡萄果锈生成的内在机理,以阳光玫瑰葡萄为试验材料,在盛花期用25 mg/L GA_3处理花穗,花后2周用25 mg/L GA_3+10 mg/L CPPU再次处理花穗,以清水处理作为对照,取果锈生成... 为探究GA_3(赤霉素)和CPPU[N-(2-氯-4-吡啶基)-N'-苯基脲]抑制葡萄果锈生成的内在机理,以阳光玫瑰葡萄为试验材料,在盛花期用25 mg/L GA_3处理花穗,花后2周用25 mg/L GA_3+10 mg/L CPPU再次处理花穗,以清水处理作为对照,取果锈生成关键期的2个葡萄果皮样品,应用Illumina RNA-Seq测序系统进行转录组分析。共获得55 314 986条有效数据和2 373个差异基因,GO功能注释到细胞组分、分子功能及生物学过程3个大类30个功能组,大量基因富集于碳水化合物代谢、生物合成等生物学过程。KEGG代谢通路分析结果显示将1 186个差异表达基因注释到126条代谢通路,富集于"代谢途径"与"苯丙烷合成"代谢通路。通过qRT-PCR方法对筛选的9个差异表达基因进行验证,荧光定量结果与测序结果相符。研究结果说明GA_3和CPPU处理减少葡萄果锈的产生主要与苯丙烷合成及类黄酮代谢相关,GA_3和CPPU显著抑制苯丙烷及类黄酮合成相关基因表达,进而降低了果锈生成路径中相关酶的活性,减少了果锈生成相关次生代谢物的产生,抑制葡萄果锈的生成。 展开更多

关键词 葡萄 果锈 转录组测序 代谢通路 差异表达基因 ga3(赤霉素) CPPU[N-(2-氯-4-吡啶基)-N’-苯基脲

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外源激素对金福菇菌丝营养生长的影响 被引量：11

13

作者 王谦 刘敏 +1 位作者 徐啸晨 王莎 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2012年第3期286-290,共5页

为缩短金福菇母种的生长周期,研究了5种不同质量浓度的外源激素对金福菇营养生长阶段菌丝生长的影响,通过测定菌丝的日平均生长速度筛选出5种不同激素单独使用时的适宜质量浓度.实验结果表明,5种激素的适宜质量浓度分别为吲哚乙酸(IAA)1... 为缩短金福菇母种的生长周期,研究了5种不同质量浓度的外源激素对金福菇营养生长阶段菌丝生长的影响,通过测定菌丝的日平均生长速度筛选出5种不同激素单独使用时的适宜质量浓度.实验结果表明,5种激素的适宜质量浓度分别为吲哚乙酸(IAA)1.0mg/L,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)1.5mg/L,6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.5mg/L,赤霉素(GA)1.0mg/L,三十烷醇1.5mg/L.其中,GA对金福菇菌丝生长具有更大的促进作用,其适宜的质量浓度为1.0mg/L,长速提高15.77%. 展开更多

关键词 金福菇 吲哚乙酸(IAA) 2 4-二氯苯氧乙酸(2 4-D) 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 赤霉素(ga) 三十烷醇

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外源激素对毛头鬼伞液体培养中菌丝生长的影响 被引量：2

14

作者 王谦 刘敏 +1 位作者 李淑萍 苏岩 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第5期514-519,共6页

研究了不同质量浓度的5种外源激素对毛头鬼伞液体菌种制备的影响.通过测定菌丝体鲜质量、菌球数量,筛选出每种激素单独使用时的适宜质量浓度.结果表明:5种激素的适宜质量浓度分别为吲哚乙酸(IAA)0.5mg/L,赤霉素(GA)1.5mg/L,三十烷醇0.5m... 研究了不同质量浓度的5种外源激素对毛头鬼伞液体菌种制备的影响.通过测定菌丝体鲜质量、菌球数量,筛选出每种激素单独使用时的适宜质量浓度.结果表明:5种激素的适宜质量浓度分别为吲哚乙酸(IAA)0.5mg/L,赤霉素(GA)1.5mg/L,三十烷醇0.5mg/L,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.6mg/L,萘乙酸(NAA)0.4mg/L.其中,GA质量浓度在1.5mg/L时对毛头鬼伞菌丝生物量促进作用最大,菌丝体鲜质量提高了37.21%. 展开更多

关键词 毛头鬼伞 吲哚乙酸（IAA） 赤霉素（ga） 三十烷醇 2 4-二氯苯氧乙酸（2 4-D） 萘乙酸 （NAA）

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