恒温解旋扩增技术（Helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）是纽英伦生物实验室美籍华人KONG Hui-min于2004年发展建立的一种核酸等温扩增技术[1],它模仿生物体内DNA的合成,在恒温条件下（62℃或37℃）凭借解旋酶解开双...恒温解旋扩增技术（Helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）是纽英伦生物实验室美籍华人KONG Hui-min于2004年发展建立的一种核酸等温扩增技术[1],它模仿生物体内DNA的合成,在恒温条件下（62℃或37℃）凭借解旋酶解开双链DNA,然后引物与模板特异性结合,在DNA聚合酶的作用下合成互补链,进行特异性基因的扩增[2].展开更多
目的:建立一种用于单核细胞增生李斯特菌的实时荧光赖解旋酶恒温核酸扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌hly基因序列设计引物对,基于荧光定量聚合酶链式反应(polym...目的:建立一种用于单核细胞增生李斯特菌的实时荧光赖解旋酶恒温核酸扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌hly基因序列设计引物对,基于荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)仪的平台,提取单核细胞增生李斯特菌基因组DNA,以此作为模板,优化反应温度、反应时间及引物浓度。利用单核细胞增生李斯特菌及10株对照菌株,并与实时荧光PCR对比,来验证实时荧光HDA方法的特异性和灵敏度,并初步用于样品检测。结果:实时荧光HDA体系的最适引物浓度为0.075μmol/L,反应温度及反应时间为65℃、80 min(40个循环),具有良好的特异性和灵敏度。结论:建立了一种特异性强、灵敏度高的实时荧光HDA检测单核细胞增生李斯特菌的方法。展开更多
文摘恒温解旋扩增技术（Helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）是纽英伦生物实验室美籍华人KONG Hui-min于2004年发展建立的一种核酸等温扩增技术[1],它模仿生物体内DNA的合成,在恒温条件下（62℃或37℃）凭借解旋酶解开双链DNA,然后引物与模板特异性结合,在DNA聚合酶的作用下合成互补链,进行特异性基因的扩增[2].
