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题名疏水类弹性蛋白多肽的克隆表达及相变特性分析
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作者
王珊珊
刘阳
高琪
王令
路宏朝
张涛
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机构
陕西理工大学生物科学与工程学院
陕西省资源生物重点实验室
陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心
陕西理工大学秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育)
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出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期27-32,共6页
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基金
陕西省教育厅专项科研计划项目(20JK0574)
陕西省教育厅重点科学研究计划项目(20JY006)。
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文摘
类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides,ELPs)作为新型温敏生物材料,在药物递送、组织工程和蛋白质分离纯化领域具有广阔的应用前景,精确控制快速生物合成具有特定相变特性的ELPs至关重要。利用质粒重建递归定向连接技术,成功构建以缬氨酸为客座氨基酸的重组质粒pET28-ELP 25、pET28-ELP 50和pET28-ELP 100,分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)中,经自诱导培养基的培养,SDS-PAGE结果表明,ELPs在大肠杆菌体系中实现了胞内可溶过量表达,表达量约占胞内全细胞蛋白的30%以上。利用可逆相变循环法(inverse transition cycling,ITC)进行分离纯化,仅需3轮ITC获得电泳纯ELP 25、ELP 50和ELP 100。热比浊法测定相变温度,分析显示ELPs的相变温度与多肽浓度、离子强度和多肽分子量均呈负相关,为进一步重组克隆表达特定相变特性的温敏多肽生物材料奠定理论基础。
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关键词
类弹性蛋白多肽
质粒重建递归定向连接
可逆相变循环
相变温度
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Keywords
elastin-like polypeptides
recursive directional ligation by plasmid reconstruction
inverse transition cycling
phase transition temperature
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分类号
Q51
[生物学—生物化学]
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