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大肠埃希菌过表达lexA基因对恩诺沙星杀菌力和抗药性突变的影响被引量：1: 1; 作者牛卫卫白华 +9 位作者王进文颜世敢齐静骆延波李璐璐贾纪美李靖冉黄娟单虎刘玉庆《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期942-946,共5页; 目的构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台。方法构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG... 展开更多; 关键词 LEXA SOS应答大肠埃希菌恩诺沙星抗药性突变质粒过表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

过表达整合素连接激酶肺癌A549细胞的建立及生物学活性被引量：1: 2; 作者胡海艳陈全 +2 位作者陈炎刘革力张璐渝《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期340-343,共4页; 目的:建立稳定过表达整合素连接激酶(ILK)的肺癌A549细胞模型,探讨ILK过表达对肺癌A549细胞生物学活性的影响。方法:以RT-PCR法扩增人ILK基因,构建pEGFP-ILK重组质粒。经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-ILK质粒用脂质体转染肺癌A549细胞,G41... 展开更多; 关键词整合素连接激酶过表达质粒肺癌细胞增殖细胞凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

鸡Elovl2基因组织表达谱及脂代谢功能研究被引量：1: 3; 作者徐钰芳孙洁 +3 位作者韩琪郁建锋徐璐顾志良《中国家禽》北大核心 2022年第3期9-16,共8页; 为探究Elovl2基因在鸡体内的生物学功能,对鸡ELOVL2蛋白的理化性质进行分析,通过RT-qPCR技术检测该基因在鸡各组织中的表达情况。将Elovl2基因过表达重组质粒与最佳干扰片段分别转染鸡LMH细胞系,通过RT-qPCR技术检测Elovl2基因及脂代谢... 展开更多; 关键词 Elovl2基因过表达重组质粒构建 RNAI技术 RT-QPCR 鸡; 在线阅读下载PDF 职称材料

鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究: 4; 作者邵玲张明辉彭军辉《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期529-536,共8页; 为进一步研究程序性细胞死亡6互作蛋白Pdcd6ip(Programmed cell death 6-interacting protein)分子功能,探讨其表达对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)增殖的影响,研究通过逆转录-聚合酶链式反应扩增得到两端带有N... 展开更多; 关键词鲤春病毒血症病毒 Pdcd6ip蛋白过表达质粒细胞活性抗病毒鲤; 在线阅读下载PDF 职称材料

IL-37抑制恶性黑色素瘤转移的体内研究: 5; 作者杨建堂付丽丽 +1 位作者杨焱淼林琳《中南大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心 2024年第12期1885-1890,共6页; 目的:恶性黑色素瘤恶性程度极高,早期即可发生转移,预后极差,严重威胁着人类的健康,研究抑制其转移相关的分子及机制对其治疗及预后有重要意义。白细胞介素(interleukin,IL)-37作为抗炎细胞因子,不仅与多种炎症性疾病有关,还具有抗肿瘤... 展开更多; 关键词恶性黑色素瘤白细胞介素-37 转移 B16F1细胞过表达质粒; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞电穿孔转染条件的建立和验证被引量：4: 6; 作者罗维艾磊周越《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期193-200,共8页; 目的筛选并验证RAW264.7细胞中电穿孔转染TRIB3过表达质粒和TRIB3 siRNA的条件,建立适用于RAW264.7细胞的最佳电穿孔转染方案。方法通过改变脉冲电压、脉冲时长和质粒浓度等条件,将载体为pCMV6-Entry的TRIB3过表达质粒和TRIB3 siRNA转入... 展开更多; 关键词 RAW264.7细胞电穿孔 TRIB3过表达质粒 TRIB3 SIRNA; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大肠埃希菌过表达lexA基因对恩诺沙星杀菌力和抗药性突变的影响被引量：1: 1; 作者牛卫卫白华王进文颜世敢齐静骆延波李璐璐贾纪美李靖冉黄娟单虎刘玉庆; 机构山东省预防兽医学重点实验室山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜牧兽医局; 出处《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期942-946,共5页; 基金国家自然科学基金(81271886) 国家科技支撑计划(2011BAD34B03) +1 种基金山东省自然科学基金(ZR2010HQ047); 文摘目的构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台。方法构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG诱导BL21-lexA过表达lexA,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定LexA蛋白,用荧光定量PCR测定SOS应答基因recA和umuC表达变化;然后用恩诺沙星梯度平板测定恩诺沙星对BL21-unmodified(空质粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗药性突变率。结果重组质粒菌株BL21-lexA在IPTG诱导下过表达LexA,抑制recA和umuC表达,提高了大肠埃希菌对恩诺沙星的敏感性,降低了抗药性突变率。结论通过IPTG诱导BL21-lexA过表达LexA蛋白,能构建稳定的SOS应答抑制模型,用于筛选SOS抑制剂,提高恩诺沙星杀菌力和降低抗药性突变。; 关键词 LEXA SOS应答大肠埃希菌恩诺沙星抗药性突变质粒过表达; Keywords lexA SOS response Escherichia coli Enrofloxacin Resistance mutation Plasmid overexpression; 分类号 R378 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名过表达整合素连接激酶肺癌A549细胞的建立及生物学活性被引量：1: 2; 作者胡海艳陈全陈炎刘革力张璐渝; 机构重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学基础医学院免疫学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期340-343,共4页; 文摘目的:建立稳定过表达整合素连接激酶(ILK)的肺癌A549细胞模型,探讨ILK过表达对肺癌A549细胞生物学活性的影响。方法:以RT-PCR法扩增人ILK基因,构建pEGFP-ILK重组质粒。经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-ILK质粒用脂质体转染肺癌A549细胞,G418压力筛选出稳定转染细胞克隆并扩大培养(A549/pEGFP-ILK组),设pEGFP-C1空质粒转染A549细胞(A549/pEGFP-C1组)及空白A549细胞对照组。用荧光显微镜观察EGFP-ILK融合蛋白的表达及细胞内定位,RT-PCR法检测各组细胞中ILK mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中ILK蛋白表达水平,MTT比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,HE染色观察细胞形态变化。结果:酶切及测序证实,pEGFP-ILK重组质粒构建成功。该质粒转染A549细胞、并经G418压力筛选后,获得了表达绿色荧光蛋白的稳定转染株,ILK基因表达产物主要定位于细胞质内。与对照组相比,A549/pEGFP-ILK细胞ILK的mRNA及蛋白表达水平明显升高,其过表达率分别为218.18%和245.45%(P<0.05);过表达ILK的A549细胞增殖活力显著增强(P<0.05);凋亡水平被显著抑制(P<0.05);过表达ILK的A549细胞的核分裂相增多。结论:成功建立过表达ILK肺癌细胞模型,ILK过表达可促进癌细胞增殖、抗凋亡及核分裂相增多。; 关键词整合素连接激酶过表达质粒肺癌细胞增殖细胞凋亡; Keywords integrin linked kinase （ILK） over-expressing plasmid lung cancer cell proliferation cell apoptosis; 分类号 R392.12 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸡Elovl2基因组织表达谱及脂代谢功能研究被引量：1: 3; 作者徐钰芳孙洁韩琪郁建锋徐璐顾志良; 机构常熟理工学院生物与食品工程学院; 出处《中国家禽》北大核心 2022年第3期9-16,共8页; 基金国家自然科学基金青年科学基金项目(31802050)。; 文摘为探究Elovl2基因在鸡体内的生物学功能,对鸡ELOVL2蛋白的理化性质进行分析,通过RT-qPCR技术检测该基因在鸡各组织中的表达情况。将Elovl2基因过表达重组质粒与最佳干扰片段分别转染鸡LMH细胞系,通过RT-qPCR技术检测Elovl2基因及脂代谢相关基因mRNA水平的变化,利用GC-MS技术检测细胞内相关脂肪酸含量的变化。结果显示:鸡ELOVL2蛋白属于稳定蛋白,该基因mRNA主要表达于脑和肝脏组织。转染pcDNA3.1-Elovl2后,基因相对表达水平显著上升,过表达重组质粒构建成功。三组siRNA均显著抑制Elovl2基因表达,抑制效果最佳的为siRNA-681。抑制Elovl2基因表达后,pck1基因的表达量较对照组相比上升2倍,但二者差异不显著。过表达Elovl2基因后,各种脂肪酸含量均有所增加,而经RNAi技术抑制Elovl2基因表达后,各种脂肪酸则有不同程度减少,受其影响最明显的为C22∶1N9。试验结果为进一步研究鸡Elovl2基因的功能奠定了基础。; 关键词 Elovl2基因过表达重组质粒构建 RNAI技术 RT-QPCR 鸡; Keywords Elovl2gene overexpression recombinant plasmid construction RNAi technology RT-qPCR chicken; 分类号 S831.2 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究: 4; 作者邵玲张明辉彭军辉; 机构上海市水产研究所; 出处《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期529-536,共8页; 基金上海市科技兴农重点攻关项目(2021-02-08-00-12-F00755) 上海市青年科技启明星计划(21QA1408300) +1 种基金国家自然科学基金(31602196)资助。; 文摘为进一步研究程序性细胞死亡6互作蛋白Pdcd6ip(Programmed cell death 6-interacting protein)分子功能,探讨其表达对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)增殖的影响,研究通过逆转录-聚合酶链式反应扩增得到两端带有Nhe I和EcoR I酶切位点的pdcd6ip编码片段,并将其克隆至真核表达载体pCI-neo上,构建了真核表达质粒pCI-pdcd6ip。获得的过表达质粒转染至EPC细胞后进行RT-qPCR和western blot检测Pdcd6ip的表达情况,并利用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。细胞转染后24h进行SVCV感染,检测Pdcd6ip过表达对SVCV增殖的影响。结果显示,Pdcd6ip蛋白真核重组质粒能够在EPC细胞中大量表达,转染后72h细胞活性较对照组无显著差异。同时,免疫荧光、RT-qPCR和western blot检测结果均显示,Pdcd6ip蛋白过表达后,SVCV M蛋白mRNA水平和蛋白表达水平较对照组显著下降,表明Pdcd6ip过表达显著抑制了SVCV的增殖。研究为抗SVCV药物的研发提供了新的研究基础和设计思路。; 关键词鲤春病毒血症病毒 Pdcd6ip蛋白过表达质粒细胞活性抗病毒鲤; Keywords Spring viraemia of carp virus Pdcd6ip Overexpression plasmid Cell viability Antiviral effect Cyprinus carpio; 分类号 S941.4 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名IL-37抑制恶性黑色素瘤转移的体内研究: 5; 作者杨建堂付丽丽杨焱淼林琳; 机构遵义医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔黏膜病科遵义医科大学口腔医学院/附属口腔医院综合科遵义医科大学第二附属医院胸外科南京大学医学院附属口腔医院口腔黏膜病科; 出处《中南大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心 2024年第12期1885-1890,共6页; 文摘目的:恶性黑色素瘤恶性程度极高,早期即可发生转移,预后极差,严重威胁着人类的健康,研究抑制其转移相关的分子及机制对其治疗及预后有重要意义。白细胞介素(interleukin,IL)-37作为抗炎细胞因子,不仅与多种炎症性疾病有关,还具有抗肿瘤作用。本研究旨在通过建立恶性黑色素瘤肺转移小鼠模型,研究IL-37对小鼠体内恶性黑色素瘤转移的作用。方法:将IL-37过表达(IL-37 overexpression,IL-37 oe)和Vector质粒分别转染小鼠黑色素瘤细胞B16F1,设置IL-37 oe组(加入转染试剂及IL-37 oe质粒)、空白对照(Blank)组(只加入转染试剂)和Vector组(加入转染试剂及Vector质粒)。C57小鼠随机分为3组,每组3只。分别收集处于对数生长期的Blank组、Vector组和IL-37 oe组B16F1细胞在无菌条件下进行小鼠尾静脉注射。每3天称量并记录小鼠体重。1个月后,采用颈椎脱臼法处死小鼠,分别解剖并分离各组小鼠肺器官及心、肝、脾、肾等脏器,肺器官采图并记录转移结节数;小鼠心、肝、脾、肾等各脏器组织用4%的多聚甲醛固定后制作石蜡切片,并进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色。结果:蛋白质印迹显示质粒构建成功。第1、4、7、10、13、16、19、22、25和28天,IL-37 oe组小鼠体重较Blank组和Vector组差异均无统计学意义(均P>0.05)。解剖小鼠肺器官发现肺部肿瘤结节,表明建模成功。HE染色发现IL-37 oe组小鼠心、肝、脾、肾等脏器组织形态学变化较Blank组和Vector组均无明显差异。3组小鼠的肺组织中,Blank组肺转移的结节数为(24.00±2.08)个,Vector组肺转移的结节数为(24.67±0.88)个,IL-37 oe组为(5.33±1.45)个;IL-37 oe组肺部的转移结节数目明显低于Blank组和Vector组(均P<0.05),而Blank组和Vector组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-37在小鼠体内能抑制恶性黑色素瘤细胞肺转移结节数,且对小鼠体重及其他脏器无明显影响,有望成为恶性黑色素瘤基因治疗或免疫治疗的潜在分子靶标。; 关键词恶性黑色素瘤白细胞介素-37 转移 B16F1细胞过表达质粒; Keywords malignant melanoma interleukin-37 metastasis B16F1 cells overexpression plasmid; 分类号 R739.5 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞电穿孔转染条件的建立和验证被引量：4: 6; 作者罗维艾磊周越; 机构南京体育学院运动健康学院北京体育大学运动生理学教研室江苏省体育科学研究所; 出处《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期193-200,共8页; 基金南京体育学院校级培育项目(PY201924) 江苏省高校自然科学研究面上项目(18KJB180013)。; 文摘目的筛选并验证RAW264.7细胞中电穿孔转染TRIB3过表达质粒和TRIB3 siRNA的条件,建立适用于RAW264.7细胞的最佳电穿孔转染方案。方法通过改变脉冲电压、脉冲时长和质粒浓度等条件,将载体为pCMV6-Entry的TRIB3过表达质粒和TRIB3 siRNA转入RAW264.7细胞,24 h后相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞存活率,72 h后Western Blot法检测TRIB3蛋白表达以验证目的基因表达改变情况。结果(1)以不同脉冲电压转染时,110和120 mV组细胞形态和存活率与对照组无差异,130和140 mV组悬浮细胞较多、细胞存活率显著低于对照组(P<0.01),120、130和140 mV组TRIB3蛋白表达显著增加(P<0.05);(2)以不同脉冲时长进行转染时,10和20 ms组细胞形态和存活率与对照组无差异,30 ms组细胞存活率显著低于对照组(P<0.01),20和30 ms组TRIB3蛋白表达显著增加(P<0.01);(3)以不同质粒浓度进行转染时,2和4μg组细胞形态和存活率与对照组无差异,6μg组细胞存活率低于对照组(P<0.05),4μg组TRIB3表达显著增加(P<0.01);(4)以120 mV、20 ms条件转染不同浓度TRIB3 siRNA时,各组细胞形态和存活率均与对照组无差异,10 nmol/L组TRIB3表达仅为对照组的0.19倍(P<0.01)。结论以120 mV、20 ms条件在RAW264.7细胞中电穿孔转染TRIB3过表达质粒(每样本4μg)和TRIB3 siRNA(10 nmol/L),在保证较高的细胞存活率的同时能显著改变目的基因的蛋白表达水平,为后续RAW264.7细胞中质粒转染相关的基础研究提供实验依据和借鉴。; 关键词 RAW264.7细胞电穿孔 TRIB3过表达质粒 TRIB3 SIRNA; Keywords RAW264.7 cells electroporation TRIB3 overexpression plasmid TRIB3 siRNA; 分类号 Q95-33 [生物学—动物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	大肠埃希菌过表达lexA基因对恩诺沙星杀菌力和抗药性突变的影响	牛卫卫白华王进文颜世敢齐静骆延波李璐璐贾纪美李靖冉黄娟单虎刘玉庆	《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	过表达整合素连接激酶肺癌A549细胞的建立及生物学活性	胡海艳陈全陈炎刘革力张璐渝	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	鸡Elovl2基因组织表达谱及脂代谢功能研究	徐钰芳孙洁韩琪郁建锋徐璐顾志良	《中国家禽》北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究	邵玲张明辉彭军辉	《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	IL-37抑制恶性黑色素瘤转移的体内研究	杨建堂付丽丽杨焱淼林琳	《中南大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞电穿孔转染条件的建立和验证	罗维艾磊周越	《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心	2020	4	在线阅读下载PDF 职称材料