无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新...无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新技术的涌现推动了CFPS系统的快速发展,尤其在细胞提取物和模板DNA方面。细胞提取物和模板DNA是CFPS系统中不可或缺的重要组成,很大程度上决定了无细胞反应的效率和成本。本文综述了CFPS系统中细胞提取物和模板DNA方面的研究进展,主要介绍了最近新开发的细胞提取物系统的特点和应用前景,以及质粒DNA模板和线性DNA模板的研究进展。展开更多
为了研究褪黑素受体在人脑中的表达状况以及褪黑素在老年性痴呆中的作用 ,本研究克隆了 Mel1 a和 RORβ等两种褪黑素受体的 c DNA并将其转入 p Bluescript ( KS+)质粒载体中。重组质粒通过限制性内切酶鉴定分析并测序。结果表明 ,克隆...为了研究褪黑素受体在人脑中的表达状况以及褪黑素在老年性痴呆中的作用 ,本研究克隆了 Mel1 a和 RORβ等两种褪黑素受体的 c DNA并将其转入 p Bluescript ( KS+)质粒载体中。重组质粒通过限制性内切酶鉴定分析并测序。结果表明 ,克隆的序列与 Gen Bank中的序列一致。利用线性化的质粒模板反转出 c RNA探针 。展开更多
在2014年第1期的Cell Research杂志上发表了一篇利用CRISPR／Cas9技术进行大鼠条件基因敲除技术的技术性论文（Ma，et al．，Generating rats with conditional alleles using CRISPR／Cas9， Cell Research （2014）24：122-125．），...在2014年第1期的Cell Research杂志上发表了一篇利用CRISPR／Cas9技术进行大鼠条件基因敲除技术的技术性论文（Ma，et al．，Generating rats with conditional alleles using CRISPR／Cas9， Cell Research （2014）24：122-125．），这篇论文利用CRISPR／Cas9在靶基因的特定外显子产生DNA双链断裂，同时提供一个环形质粒模板，该质粒包含两端被loxP位点标记的、且与被打断外显子相同的DNA片段。在受精卵内同源重组修复系统（ homologous recombination repair pathway ）的作用下，可实现高效率的靶基因loxP位点标记，从而用于大鼠的条件性基因敲除。论文中利用该技术实现了三个甲基化酶基因（Dnmt1， Dnmt3a， Dnmt3b）loxP位点标记，效率高达30％，使得制备一个含loxP位点标记大鼠的周期仅2～3个月，成为目前为止最经济、快速的大鼠条件基因敲除技术。展开更多
文摘无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新技术的涌现推动了CFPS系统的快速发展,尤其在细胞提取物和模板DNA方面。细胞提取物和模板DNA是CFPS系统中不可或缺的重要组成,很大程度上决定了无细胞反应的效率和成本。本文综述了CFPS系统中细胞提取物和模板DNA方面的研究进展,主要介绍了最近新开发的细胞提取物系统的特点和应用前景,以及质粒DNA模板和线性DNA模板的研究进展。
文摘为了研究褪黑素受体在人脑中的表达状况以及褪黑素在老年性痴呆中的作用 ,本研究克隆了 Mel1 a和 RORβ等两种褪黑素受体的 c DNA并将其转入 p Bluescript ( KS+)质粒载体中。重组质粒通过限制性内切酶鉴定分析并测序。结果表明 ,克隆的序列与 Gen Bank中的序列一致。利用线性化的质粒模板反转出 c RNA探针 。
