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克罗诺杆菌DNA质粒标准样品的制备及在婴幼儿配方奶粉检测中的应用被引量：1: 1; 作者马跃然王晖 +4 位作者范慧霞赵红阳卢行安郜晓峰康文艺《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第12期322-331,共10页; 选取阪崎克罗诺杆菌中atpD、gyrB、infB、fusA和glnS管家基因作为靶序列,构建质粒标准样品快速检测克罗诺杆菌。通过测序和菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对构建的重组质粒进行验证,传15代后对重组质粒进行测序验... 展开更多; 关键词克罗诺杆菌管家基因质粒标准样品快速检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测用质粒标准样品研制: 2; 作者陈进甄玉荷 +6 位作者廉鲁昕牛沁雅赵红阳卢行安周巍崔生辉杨保伟《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第23期9094-9102,共9页; 目的研制可作为β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测质控用标准样品。方法通过检索美国国家生物技术信息中心基因库,获得β-内酰胺类抗生素耐药性编码基因bla_(TEM)、bla_(PSE)、bla_(CTX-M)、bla_(CMY)和bla_(OXA)的DNA序列,构建耐药基... 展开更多; 关键词 Β-内酰胺类抗生素耐药基因质粒标准样品; 在线阅读下载PDF 职称材料

转基因康乃馨Moonlite品系检测用质粒标准样品研制: 3; 作者杨茹梦尹璐 +3 位作者钱昌元左翠花于海燕李想《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1692-1702,共11页; 截至2020年底,国际上已有19种转基因康乃馨品系进入商业化种植。为了实现转基因康乃馨的有效检测监管,研制检测标准样品十分必要。目前,国际上还没有该类标准品的相关报道。为此,本文研制了商业化时间最长、种植量较大的转基因康乃馨Moo... 展开更多; 关键词转基因康乃馨 Moonlite品系质粒标准样品; 在线阅读下载PDF 职称材料

创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用: 4; 作者袁玮陈蕾蕾 +6 位作者杨金玉周庆新裘纪莹赵双枝付恩君赵国琰陈相艳《山东农业科学》北大核心 2024年第1期147-155,共9页; 针对我国缺乏适用于创伤弧菌检测的质粒标准样品的现状,本研究开展了创伤弧菌鉴定即用型定性质粒标准样品的研制和应用工作。首先构建了创伤弧菌毒力基因vvhA的重组质粒,经测序验证后制备成质粒标准样品冻干粉,然后对其进行PCR定性检测... 展开更多; 关键词创伤弧菌质粒定性标准样品水产品检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名克罗诺杆菌DNA质粒标准样品的制备及在婴幼儿配方奶粉检测中的应用被引量：1: 1; 作者马跃然王晖范慧霞赵红阳卢行安郜晓峰康文艺; 机构河南大学国家食用菌加工技术研发专业中心河南大学药学院中国检验检疫科学研究院; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第12期322-331,共10页; 基金 “十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFC1601400)。; 文摘选取阪崎克罗诺杆菌中atpD、gyrB、infB、fusA和glnS管家基因作为靶序列,构建质粒标准样品快速检测克罗诺杆菌。通过测序和菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对构建的重组质粒进行验证,传15代后对重组质粒进行测序验证质粒稳定性。制备的atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品,对其进行定性实验,并检测其检出限和稳定性,然后使用atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品对婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌进行检测。通过菌落PCR和测序结果显示atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品制备成功。PCR体系对质粒标准样品检测具有特异性,atpD、gyrB、infB、fusA和glnS检出限分别为1.14×10^(6)、1.07×10^(7)、1.09×10^(7)、1.73×10^(5)、7.54×10^(5)拷贝/μL。质粒冻干粉可以在-20、4、25℃稳定保存90 d。将质粒标准样品用于23份婴幼儿奶粉样品检测,检测出1份具有gyrB管家基因。参考GB 4789.40—2016《食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》的方法进行传统微生物分离检测,未检测出克罗诺杆菌。相较于传统方法质粒标准样品的应用极大提高了样品的检测效率。; 关键词克罗诺杆菌管家基因质粒标准样品快速检测; Keywords Cronobacter house-keeping genes plasmid standards rapid detection; 分类号 TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测用质粒标准样品研制: 2; 作者陈进甄玉荷廉鲁昕牛沁雅赵红阳卢行安周巍崔生辉杨保伟; 机构西北农林科技大学食品科学与工程学院中国检验检疫科学研究院河北省食品检验研究院中国食品药品检定研究院; 出处《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第23期9094-9102,共9页; 基金 “十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFC1601400)。; 文摘目的研制可作为β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测质控用标准样品。方法通过检索美国国家生物技术信息中心基因库,获得β-内酰胺类抗生素耐药性编码基因bla_(TEM)、bla_(PSE)、bla_(CTX-M)、bla_(CMY)和bla_(OXA)的DNA序列,构建耐药基因重组质粒和工程菌。将工程菌传代培养15代,同时使用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增和DNA测序测定确认目标基因的遗传稳定性。大量制备菌悬液,提取重组质粒,真空干燥得到质粒标准样品。使用PCR和定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)检测质粒标准样品的最低检出限。使用超微量分光光度计测定质粒标准样品的质量,RT-qPCR测定质粒作为模板扩增时的循环数(cycle threshold,Ct),以此评价标准样品的均匀性及贮藏稳定性。结果5种重组质粒DNA可在工程菌中稳定遗传且无突变发生,5种质粒DNA标准样品均匀性良好。各质粒DNA经梯度稀释后,PCR最低检出限在2.33×10^(4)~2.25×10^(6)拷贝数/μL之间,RT-qPCR最低检出限在1.93~1850拷贝数/μL之间。样品在37℃贮存14 d、4℃贮存3个月、-20℃贮存12个月稳定性良好。结论研究制备得到的β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测用质粒标准样品的目的基因遗传稳定性、标准样品的均匀性和贮存稳定性均良好。; 关键词 Β-内酰胺类抗生素耐药基因质粒标准样品; Keywords β-lactam antibiotics drug resistance genes standard plasmid DNA reference sample; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转基因康乃馨Moonlite品系检测用质粒标准样品研制: 3; 作者杨茹梦尹璐钱昌元左翠花于海燕李想; 机构上海应用技术大学香料香精技术与工程学院上海海关动植物与食品检验检疫技术中心; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1692-1702,共11页; 基金上海市技术标准项目(21DZ2203000) 海关总署科研项目(2020HK164); 文摘截至2020年底,国际上已有19种转基因康乃馨品系进入商业化种植。为了实现转基因康乃馨的有效检测监管,研制检测标准样品十分必要。目前,国际上还没有该类标准品的相关报道。为此,本文研制了商业化时间最长、种植量较大的转基因康乃馨Moonlite品系质粒标准样品,使其与转基因康乃馨检测技术标准的应用相配套,为口岸转基因产品的检测监管提供必要的技术支撑。首先,将康乃馨内源ANS基因1279 bp片段和转基因康乃馨Moonlite品系406 bp 5′端特异性序列分别插入到pcDNA3.0载体的酶切位点和距离1 kb以上的多克隆位点上,合成质粒DNA标准样品。后将质粒DNA标准样品进行稀释、分装,对其均匀性、最小取样量和短期、长期稳定性等进行测定,采用数字PCR方法对质粒DNA标准样品进行定值,并进行不确定度评估。质粒DNA标准样品pLite经全基因组测序,与公开发布的序列完全一致。均匀性实验结果表明,分别以ANS基因和Moonlite品系特异性序列为目标进行测定,F值分别为1.61和1.14,均小于95%置信区间的F值,质粒DNA标准样品足够均匀。质粒DNA标准样品的最小取样量为2μL。稳定性实验结果表明,质粒DNA标准样品pLite在45℃高温条件下,可稳定保存14 d;在26℃及以下温度条件下,可稳定保存1个月,在4℃及以下温度可稳定保存6个月,说明质粒DNA标准样品适宜运输。质粒DNA标准样品在反复冻融25次后,拷贝数浓度无显著变化。定值结果表明,质粒DNA标准样品pLite中康乃馨内源ANS基因拷贝数的参考值为(6.13±0.22)×10^(6)μL^(-1),Moonlite品系特异性序列拷贝数的参考值为(6.10±0.24)×10^(6)μL^(-1)。研制的质粒DNA标准样品pLite具有良好的均匀性和稳定性,获得国家标准样品证书后,可用于转基因康乃馨Moonlite品系的检测。; 关键词转基因康乃馨 Moonlite品系质粒标准样品; Keywords genetically modified carnation Moonlite plasmid standard material; 分类号 S681.9 [农业科学—观赏园艺]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用: 4; 作者袁玮陈蕾蕾杨金玉周庆新裘纪莹赵双枝付恩君赵国琰陈相艳; 机构山东省农业科学院农产品加工与营养研究所/山东省农产品精深加工技术重点实验室/农业农村部新食品资源加工重点实验室山东师范大学生命科学学院; 出处《山东农业科学》北大核心 2024年第1期147-155,共9页; 基金国家重点研发计划“食品安全关键技术研发”重点专项(2017YFC1601400) 山东省重点研发计划项目(2022TZXD0022) +3 种基金山东省农业科学院国际科技合作专项(CXGC2022F09)。; 文摘针对我国缺乏适用于创伤弧菌检测的质粒标准样品的现状,本研究开展了创伤弧菌鉴定即用型定性质粒标准样品的研制和应用工作。首先构建了创伤弧菌毒力基因vvhA的重组质粒,经测序验证后制备成质粒标准样品冻干粉,然后对其进行PCR定性检测及紫外分光光度计法定量分析。均匀性检验结果表明,样品间无显著差异,均匀性良好,符合预期目标;短期稳定性检验结果表明,样品能在4℃、37℃条件下稳定保存14天;长期稳定性检验结果表明,样品能在-20℃条件下稳定保存至少12个月。研究结果表明,创伤弧菌质粒定性标准样品的均匀性和稳定性均符合国家定性标准样品的要求,为创伤弧菌的快速、高通量的定性鉴定分析提供了可靠的参考物质。将标准样品应用于鱼类、贝类等10份海鲜类食品样品的检测中,经传统培养法验证,检测结果准确无误。本研究所研制的创伤弧菌质粒定性标准样品具有较好的商业应用潜力,为其在食品检测领域的推广应用奠定了重要基础。; 关键词创伤弧菌质粒定性标准样品水产品检测; Keywords Vibrio vulnificus Certified plasmid reference material Aquatic products Detection; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	克罗诺杆菌DNA质粒标准样品的制备及在婴幼儿配方奶粉检测中的应用	马跃然王晖范慧霞赵红阳卢行安郜晓峰康文艺	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2023	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测用质粒标准样品研制	陈进甄玉荷廉鲁昕牛沁雅赵红阳卢行安周巍崔生辉杨保伟	《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心	2021	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	转基因康乃馨Moonlite品系检测用质粒标准样品研制	杨茹梦尹璐钱昌元左翠花于海燕李想	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用	袁玮陈蕾蕾杨金玉周庆新裘纪莹赵双枝付恩君赵国琰陈相艳	《山东农业科学》北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料