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一种快速高效提取酵母质粒的方法 被引量:2
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作者 张怡 刘坤 +5 位作者 曹鹏 魏森 韦丹丹 杜建 李鹏坤 李成伟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1194-1198,共5页
质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法... 质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法和试剂盒法提取的酵母质粒,在产率、纯度和对后续实验的影响等方面进行了比较。结果表明,与另外两种方法比较,玻璃珠液氮法提取酵母质粒具有效率高、质量好、成本低、时间短、操作简单的优点,可作为实验室规模化提取酵母质粒的常用方法。 展开更多
关键词 酵母菌 质粒提取 玻璃珠液氮法
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猪呼吸道、消化道内细菌质粒的提取
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作者 胡辉 余兴龙 +3 位作者 李杰 肖朝庭 李润成 李斌 《湖北畜牧兽医》 2011年第9期10-12,共3页
使用多种选择培养基,通过菌落形态、革兰氏染色、镜检和生化反应,对猪呼吸道、消化道中常规菌群进行初步分类,并使用碱变性法提取质粒。结果从健康猪呼吸道和消化道中分离培养出66株菌株(兼性厌氧菌),获得了长沙地区猪呼吸道、消化道中... 使用多种选择培养基,通过菌落形态、革兰氏染色、镜检和生化反应,对猪呼吸道、消化道中常规菌群进行初步分类,并使用碱变性法提取质粒。结果从健康猪呼吸道和消化道中分离培养出66株菌株(兼性厌氧菌),获得了长沙地区猪呼吸道、消化道中菌群的基本数据,为相关基础研究和模型应用提供了重要的参考数据;获得了丰富的质粒DNA库,为进一步针对质粒所具有的耐药基因相关研究打下基础。 展开更多
关键词 呼吸道 消化道 常规菌群 分离鉴定 质粒提取
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一种改良式质粒DNA提取方法的建立与应用 被引量:6
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作者 张林琳 李磊 +3 位作者 李翔 贺大林 朱国栋 王新阳 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期106-108,共3页
目的建立一种稳定、可靠的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值。方法将含有目的质粒的菌株扩增后,运用改良后的碱裂解法进行质粒DNA小量提取,微量核酸仪测定提取质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电泳、内... 目的建立一种稳定、可靠的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值。方法将含有目的质粒的菌株扩增后,运用改良后的碱裂解法进行质粒DNA小量提取,微量核酸仪测定提取质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电泳、内切酶酶切及质粒转染真核细胞鉴定提取质粒DNA的质量及转染效率。结果改良式质粒提取方法获得质粒DNA产量为3.2 mg/L菌液,A260/280=1.91;内切酶酶切完全;质粒DNA以超螺旋结构为主;真核细胞转染效率为20%左右。结论改良式质粒DNA抽提方法操作简单、实用,获得质粒DNA产量多、质量高,能达到分子生物学常规实验的要求。 展开更多
关键词 质粒DNA提取 酶切 转染
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四种去内毒素试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较
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作者 杨振苹 张静静 +7 位作者 邢体坤 王斌 宋路萍 荆新蕊 宋彦君 黄帅 王亚萍 潘若文 《中国医药科学》 2020年第13期11-14,共4页
目的比较四种去内毒素质粒提取试剂盒所提质粒中内毒素的水平。方法本实验选用了四种商业化去内毒素试剂盒进行质粒提取,然后用鲎试剂凝胶法和动态浊度法对所提质粒DNA进行内毒素检测。结果四种试剂盒所提取的质粒得率、A260/A280、A260... 目的比较四种去内毒素质粒提取试剂盒所提质粒中内毒素的水平。方法本实验选用了四种商业化去内毒素试剂盒进行质粒提取,然后用鲎试剂凝胶法和动态浊度法对所提质粒DNA进行内毒素检测。结果四种试剂盒所提取的质粒得率、A260/A280、A260/A230均符合要求,内毒素水平均小于0.1EU/μg。其中,C试剂盒所提取的质粒中内毒素含量最低。结论四种去内毒素质粒提取试剂盒在质粒得率、内毒素含量、价格方面有一定的差异。其中C试剂盒所提质粒得的率最高,内毒素含量最低,但价格也最贵;B试剂盒性价比最高,使用时应根据实际情况综合考虑。 展开更多
关键词 质粒 内毒素 去内毒素质粒提取试剂盒 凝胶法 动态浊度法
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利用反向PCR鉴定沼泽红假单胞菌中野生质粒
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作者 宋智勇 曲媛媛 周集体 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期33-37,共5页
为准确研究沼泽红假单胞菌的野生质粒及其携带的基因信息,在常规碱裂解法基础上,对沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustrisASl.2352中野生质粒提取方法进行了优化,优化方法具有易操作、耗时少、纯度高等特点.所得质粒DNA纯度和... 为准确研究沼泽红假单胞菌的野生质粒及其携带的基因信息,在常规碱裂解法基础上,对沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustrisASl.2352中野生质粒提取方法进行了优化,优化方法具有易操作、耗时少、纯度高等特点.所得质粒DNA纯度和质量均满足进一步分子操作的需要.同时,利用反向PCR技术鉴定该野生质粒,并结合生物信息学方法对其进行分析。比传统的质粒丢失法验证和考察质粒更为省时、可靠和直观.证明菌株携带4个野生质粒,其中2.3kb的质粒序列与Escherichiacoli pEC157 Rom-like proteingene有97.8%的同源性.推测1885~1887碱基为复制起点. 展开更多
关键词 反向PCR 野生质粒 沼泽红假单胞菌 质粒提取
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