宏基因组二代测序技术辅助诊断中枢神经系统贝氏柯克斯体感染性血管炎1例 被引量：3

1

作者 蔡衍珊 刘子凡 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期628-630,共3页

Q热是由贝氏柯克斯体感染引起的人畜共患病,临床表现多样且无特异性,贝氏柯克斯体颅内感染罕见,经常被误诊和漏诊,导致部分患者预后不佳。此文报告1例宏基因组二代测序(mNGS)技术辅助诊断的中枢神经系统贝氏柯克斯体颅内感染性血管炎病... Q热是由贝氏柯克斯体感染引起的人畜共患病,临床表现多样且无特异性,贝氏柯克斯体颅内感染罕见,经常被误诊和漏诊,导致部分患者预后不佳。此文报告1例宏基因组二代测序(mNGS)技术辅助诊断的中枢神经系统贝氏柯克斯体颅内感染性血管炎病例,提示mNGS技术在Q热快速诊断中起到重要作用,通过早期诊断,精准治疗,明显改善患者预后。在此基础上回顾国内外相关文献,总结贝氏柯克斯体颅内感染的临床表现和诊治经验,供国内外同行参考。 展开更多

关键词 Q热 贝氏柯克斯体 感染性血管炎 宏基因组二代测序 mNGS

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山羊源贝氏柯克斯体抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1

2

作者 张锐铮 于皓同 +2 位作者 王凯茸 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期21-26,共6页

为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经W... 为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经Western blot鉴定com1蛋白反应原性良好;ELISA检测方法抗原包被量为4μg/mL,血清的稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶2500,阴阳临界值为0.278。用该方法对流产衣原体、山羊支原体、牛支原体阳性血清进行检测,均为阴性;当C.burnetii阳性血清稀释至2048倍时检测结果仍为阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的307份血清样本进行检测,样本阳性率为9.12%。成功建立了一种检测贝氏柯克斯体抗体的间接ELISA检测方法,这为C.burnetii引起的Q热的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 com1蛋白 酶联免疫吸附试验 抗体检测

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贝氏柯克斯体耐受渗透脱水研究模型的建立

3

作者 王涛 孙静 +3 位作者 尹白露 于永慧 何卫平 段学章 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期415-420,共6页

目的基于无生命培养体系,探索建立贝氏柯克斯体耐受脱水的实验室研究模型。方法梯度调整贝氏柯克斯体无生命培养体系中的渗透压条件,利用qPCR定量测定不同渗透压下贝氏柯克斯体在培养周期内基因组拷贝数变化并描记生长曲线,进一步利用... 目的基于无生命培养体系,探索建立贝氏柯克斯体耐受脱水的实验室研究模型。方法梯度调整贝氏柯克斯体无生命培养体系中的渗透压条件,利用qPCR定量测定不同渗透压下贝氏柯克斯体在培养周期内基因组拷贝数变化并描记生长曲线,进一步利用相差显微镜、透射电子显微镜对真核细胞以及无细胞培养方法所得贝氏柯克斯体进行形态学分析,并感染BGMK细胞测定不同渗透压培养所得贝氏柯克斯体的感染性VFU。结果贝氏柯克斯体可在高渗透压条件的无生命培养基中适应性生存7 d以上,经高渗透压培养后的菌体脱水收缩且大小类似于小贝氏体,同时感染后24 h的VFU较对照组降低。结论成功建立了贝氏柯克斯体耐受高渗压脱水的研究模型,为下一步用蛋白质组学等方法研究贝氏柯克斯体在自然环境中耐受干燥脱水的遗传学机制奠定了基础。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 Q热 渗透压 脱水 无生命培养

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检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR 被引量：11

4

作者 张晶波 温博海 +3 位作者 陈梅玲 邱玲 牛东升 李丽莉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期652-655,共4页

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)方法。方法根据贝氏柯克斯体特异的23SrRNA插入基因序列设计引物和探针,以克隆的23SrRNA插入基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI7... 目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)方法。方法根据贝氏柯克斯体特异的23SrRNA插入基因序列设计引物和探针,以克隆的23SrRNA插入基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI7900型)上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.997);与套式PCR相比较,荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体,检出结果均为0。用荧光定量PCR检测贝氏柯克斯体感染的小鼠脾脏标本,脾脏中贝氏柯克斯体的感染量与感染过程具有相关性。结论本研究建立的检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,特别适合样本中微量贝氏柯克斯体DNA的检测,其定量检测可用于动物实验中的贝氏柯克斯体感染程度的分析。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 实时定量PCR 23S RRNA 感染

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氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性及免疫保护性研究 被引量：6

5

作者 孙长俭 陈梅玲 +4 位作者 杨晓 温博海 牛东升 李青凤 王锡乐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期544-547,共4页

目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评... 目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评价CMR疫苗体外刺激小鼠脾细胞增殖的能力;以贝氏柯克斯体攻击免疫小鼠和用贝氏柯克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠血和脾脏样本。结果CMR免疫第4周起,小鼠血清中检出高水平的特异性抗体,CMR加氢氧化铝佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体显著高于未加佐剂组。CMR在体外刺激正常小鼠和免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平显著高于对照组,WCV则抑制正常脾淋巴细胞增殖。三种剂量(30μg、10μg、1μg/只)CMR免疫小鼠血和脾脏样本贝氏柯克斯体含量显著低于未免疫组,以30μg组及加佐剂免疫小鼠的样本含菌量更显著低于对照组。结论采用我国分离株制备的CMR疫苗能诱导机体产生高效特异性体液免疫和细胞免疫应答,使机体抵抗大剂量的贝氏柯克斯体感染,具有良好的免疫原性和免疫保护性;氢氧化铝佐剂能显著增强CMR疫苗的免疫保护效能。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 Q热疫苗 氯仿-甲醇提取残存组分

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贝氏柯克斯体被单核细胞吞噬及其在单核细胞内生长的初步研究 被引量：4

6

作者 李丽莉 温博海 +3 位作者 张晶波 邱玲 陈梅玲 牛东升 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期940-944,共5页

目的探讨贝氏柯克斯体被单核细胞吞噬及其在单核细胞内生长的规律。方法将泛影葡胺梯度超速离心纯化的I相贝氏柯克斯体(强毒株)与体外培养人单核细胞(THP-1)相互作用,用免疫荧光染色和显微镜检查单核细胞内贝氏柯克斯体。用Gamma射线灭... 目的探讨贝氏柯克斯体被单核细胞吞噬及其在单核细胞内生长的规律。方法将泛影葡胺梯度超速离心纯化的I相贝氏柯克斯体(强毒株)与体外培养人单核细胞(THP-1)相互作用,用免疫荧光染色和显微镜检查单核细胞内贝氏柯克斯体。用Gamma射线灭活贝氏柯克斯体作平行实验。结果在4 h内分析单核细胞的吞噬作用,发现单核细胞内灭活贝氏柯克斯体的数量迅速增加,而活立克次体的数量无明显变化。在第1-6d的实验周期内,单核细胞内灭活贝氏柯克斯体数逐渐减少,第5d近于完全消失;而活贝氏柯克斯体的数量从第4d开始逐渐增加。结论单核细胞吞噬活贝氏柯克斯体的效率明显低于对灭活贝氏柯克斯体的吞噬;活贝氏柯克斯体可以在人单核细胞内缓慢生长繁殖,而灭活贝氏柯克斯体则在单核细胞内逐渐被清除。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 单核细胞 吞噬 感染

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Q热贝氏柯克斯体间接ELISA检测方法的建立 被引量：4

7

作者 武文君 贾广乐 +4 位作者 廖娟红 梅琳 韩雪清 林祥梅 张映 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期95-101,共7页

本研究以Q热贝氏柯克斯体弱毒株Ⅱ相全菌为包被抗原建立Q热贝氏柯克斯体间接ELISA检测方法,通过方阵滴定法对抗原包被浓度和二抗反应浓度的确定及各项反应条件的优化,确定其阴阳性临界值为0.44。用本方法与IDEXX Q热抗体检测试剂盒对39... 本研究以Q热贝氏柯克斯体弱毒株Ⅱ相全菌为包被抗原建立Q热贝氏柯克斯体间接ELISA检测方法,通过方阵滴定法对抗原包被浓度和二抗反应浓度的确定及各项反应条件的优化,确定其阴阳性临界值为0.44。用本方法与IDEXX Q热抗体检测试剂盒对393份牛临床血清进行检测,检出的血清阳性率分别为11.45%和6.10%,符合率为94.66%。结果表明,本试验建立的检测Q热贝氏柯克斯体的间接ELISA法具有较好的特异性及较强的敏感性,可初步应用于Q热贝氏柯克斯体抗体的临床检测。 展开更多

关键词 Q热 贝氏柯克斯体 间接ELISA Ⅱ相抗原

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贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达 被引量：2

8

作者 魏文进 崔红 +4 位作者 陈唯军 牛东升 张雪颖 陈梅玲 温博海 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期23-25,共3页

目的　克隆和表达贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii) 2 7kDa外膜蛋白基因 (com1 )。方法　采用PCR方法 ,从质粒pGEM -T/com1扩增出Com1基因片段 ,经鉴定后 ,将其克隆于原核表达载体 pQE30 ,构建成重组质粒 pQE30 /com1 ,IPTG诱导表达。... 目的　克隆和表达贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii) 2 7kDa外膜蛋白基因 (com1 )。方法　采用PCR方法 ,从质粒pGEM -T/com1扩增出Com1基因片段 ,经鉴定后 ,将其克隆于原核表达载体 pQE30 ,构建成重组质粒 pQE30 /com1 ,IPTG诱导表达。结果　 (1 )获得长约 760bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知com1序列相同。 (2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 2 7kDa处有表达条带。经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌体蛋白的 1 7 2 %。 (3)经分析 ,有较好的抗原性。 (4)表达菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于包涵体中。结论　贝氏柯克斯体com1基因在大肠杆菌中获得了高效表达 。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 27kDa外膜蛋白基因 克隆 表达 测序

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贝氏柯克斯体新桥株刺激人树突状细胞的表型分析 被引量：1

9

作者 王颖 吴德平 +3 位作者 王锡乐 陈梅玲 尉雁 温博海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1041-1045,共5页

目的树突状细胞(dendritic cell,DC)具有成熟与未成熟两种形态,前者是早期免疫应答强有力的抗原呈递细胞,后者能诱导免疫耐受。分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)、Cb脂多糖(LPS)、去除LPS的Cb对DC的激活作用,探讨Cb逃逸宿主免疫... 目的树突状细胞(dendritic cell,DC)具有成熟与未成熟两种形态,前者是早期免疫应答强有力的抗原呈递细胞,后者能诱导免疫耐受。分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)、Cb脂多糖(LPS)、去除LPS的Cb对DC的激活作用,探讨Cb逃逸宿主免疫清除的机理。方法从健康成年人的外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DC;分别用灭活Cb、Cb LPS、去LPS Cb刺激体外培养未成熟DC,大肠杆菌LPS作为阳性对照刺激因子;刺激后24h,用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测DC表面分子:成熟标记分子CD83与共刺激分子CD40、CD58、CD80、CD86。结果去LPS Cb刺激DC表面分子表达水平与大肠杆菌LPS刺激最相近,显著强于未刺激DC,而灭活Cb、Cb LPS刺激DC表面分子CD83、CD40、CD80、CD86的表达在一低水平。结论LPS遮盖了Cb激活DC所需的表面分子,除去LPS后暴露的分子与DC相互作用,对DC的成熟刺激作用显著高于灭活Cb、Cb LPS的刺激作用。LPS的存在有利于贝氏柯克斯体逃逸宿主的免疫清除。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 树突状细胞 表面分子 流式细胞分析

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贝氏柯克斯体中国分离株com1基因的序列分析 被引量：3

10

作者 余全 张国全 +2 位作者 FUKUSHI Hideto YAMAGUCHI Tsuyoshi Hirai Katsuya 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期404-406,共3页

目的　通过com1基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体中国分离株的一些遗传特征。方法　对贝氏柯克斯体中国分离株的com1基因进行扩增、测序和分析 ,将我们的结果与国外研究结果进行比较。结果　在 7个中国分离株中 ,可检测到 3种不同的com1... 目的　通过com1基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体中国分离株的一些遗传特征。方法　对贝氏柯克斯体中国分离株的com1基因进行扩增、测序和分析 ,将我们的结果与国外研究结果进行比较。结果　在 7个中国分离株中 ,可检测到 3种不同的com1基因序列。除质粒型相同的分离株表现出类似的com1基因序列外 ,质粒型为QpRS的中国分离株可被单独划分成一个新的基因组。结论　本研究结果显示 ,根据com1基因序列进行的贝氏柯克斯体株基因分组与分离株所含质粒型有很大的相关性 ,而与以前报道的疾病形式和分离株的地理分布无关。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 com1基因 DNA序列 序列分析 Q热

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氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的免疫保护性评价 被引量：1

11

作者 王锡乐 邢洪光 +5 位作者 熊小路 陈梅玲 吴德平 王世斌 王颖 温博海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期207-209,213,共4页

目的动物实验评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的免疫保护性。方法将三批小量制备的CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)分别用1μg、10μg、100μg三个剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,4周后用初次免... 目的动物实验评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的免疫保护性。方法将三批小量制备的CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)分别用1μg、10μg、100μg三个剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,4周后用初次免疫的一半剂量腹腔注射加强免疫1次,2周后用107的贝氏柯克斯体强毒株腹腔注射感染免疫小鼠,感染第7d活杀小鼠、摘取小鼠脾脏,用荧光定量PCR检测小鼠脾脏组织的贝氏柯克斯体。结果所有Q热疫苗免疫组的小鼠脾脏荷菌量均显著少于非免疫组,100μg免疫组的荷菌量显著低于10μg免疫组,10μg疫苗组显著低于1μg免疫组。每批CMRV免疫组与相同剂量WCV免疫组之间的贝氏柯克斯体含量无显著差异。结论国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗具有与灭活Q热疫苗一样良好的抗贝氏柯克斯体感染的免疫保护性。 展开更多

关键词 Q热疫苗 贝氏柯克斯体 免疫保护性

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贝氏柯克斯体表面抗原基因p1与hspB的融合基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1

12

作者 李青凤 牛东升 +2 位作者 温博海 邱玲 陈梅玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第9期741-744,共4页

目的　将贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii)表面抗原P1蛋白基因与热休克蛋白B(HspB)基因片段融合 ,并使该融合基因在大肠杆菌细胞内表达 ,产生P1 HspB融合蛋白。 方法　采用PCR方法 ,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增P1蛋白基因 (p1)... 目的　将贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii)表面抗原P1蛋白基因与热休克蛋白B(HspB)基因片段融合 ,并使该融合基因在大肠杆菌细胞内表达 ,产生P1 HspB融合蛋白。 方法　采用PCR方法 ,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增P1蛋白基因 (p1)和HspB蛋白基因 (hspB)片段 ,将两基因片段分别与原核表达载体 pQE30连接 ,分别构建重组表达质粒pQE30 / p1和pQE30 /hspB。用BamHI和SacIDNA内切酶将 p1基因片段从 pQE30 /p1切下并与 pQE30 /hspB的hspB连接 ,构建重组质粒 pQE30 / p1 hspB。用IPTG诱导pQE30 / p1 hspB转化的大肠杆菌表达融合基因 p1 hspB。 结果　SDS PAGE分析发现 pQE30 /p1 hspB转化的大肠杆菌表达一 83kDa融合蛋白 ;经薄层扫描分析 ,该融合蛋白约占到全菌体蛋白的 12 .1% ;免疫印迹分析发现该融合蛋白能被贝氏柯克斯体感染小鼠血清所识别。结论　构建的 p1 hspB融合基因在大肠杆菌中得到了有效表达 ,表达的P1 HspB融合蛋白能与抗贝氏柯克斯体抗体特异反应 ,P1 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 表面抗原 基因重组 融合蛋白

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贝氏柯克斯体热休克蛋白B基因的克隆与表达 被引量：1

13

作者 李青凤 牛东升 +2 位作者 温博海 邱玲 陈梅玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期97-99,共3页

目的克隆贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)热休克蛋白B(HspB)基因并在大肠杆菌细胞内高效表达。方法采用PCR方法,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增出HspB的基因片段,鉴定后将目的片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组表达质粒pQE30/... 目的克隆贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)热休克蛋白B(HspB)基因并在大肠杆菌细胞内高效表达。方法采用PCR方法,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增出HspB的基因片段,鉴定后将目的片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组表达质粒pQE30/hspB,IPTG诱导该重组质粒转化的大肠杆菌产生HspB重组蛋白。结果(1)PCR扩增获得长约1556bp的hspB基因片段。(2)SDS-PAGE证明,HspB重组蛋白的分子量为53.7kDa。(3)经薄层扫描分析,表达蛋白约占全菌体蛋白的71.2%。结论贝氏柯克斯体hspB基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为Q热疫苗的研制提供了一易于获得的候选蛋白分子。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 热休克蛋白 基因克隆 表达

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PCR和DNA斑点杂交分析贝氏柯克斯体的核酸标识 被引量：1

14

作者 张军 朱丽娜 +4 位作者 张晶波 温博海 陈梅玲 邱玲 牛东升 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期375-378,共4页

目的确认贝氏柯克斯体特异的核酸标识。方法用PCR法特异扩增贝氏柯克斯体24kDa,27kDa、30kDa、34kDa、热休克蛋白B等表面蛋白基因,以及23SrRNA插入序列和16S23SrRNA间区序列等基因片段,从DNA电泳凝胶中回收纯化PCR扩增的目的DNA片段,用... 目的确认贝氏柯克斯体特异的核酸标识。方法用PCR法特异扩增贝氏柯克斯体24kDa,27kDa、30kDa、34kDa、热休克蛋白B等表面蛋白基因,以及23SrRNA插入序列和16S23SrRNA间区序列等基因片段,从DNA电泳凝胶中回收纯化PCR扩增的目的DNA片段,用地高辛随机引物标记法标记目的DNA片段作探针,行DNA斑点杂交。结果PCR扩得的7个贝氏柯克斯体DNA片段探针只能与贝氏柯克斯体基因组DNA杂交而不能与其他种属的立克次体的基因组杂交,每种探针检测同源目的基因的灵敏度可达到10pg。结论这7种贝氏柯克斯体DNA片段是贝氏柯克斯体特异的DNA片段,可作为贝氏柯克斯体的核酸标识,基于它们的序列设计的引物和探针具有极高的贝氏柯克斯体种特异性。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 PCR DNA探针 斑点杂交

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Q热贝氏柯克斯体环介导等温扩增实时浊度检测法的建立 被引量：1

15

作者 贾广乐 徐丽丽 廖娟红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期19-22,共4页

根据Q热贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计1套特异性引物,建立快速检测Q热的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)实时浊度检测方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,... 根据Q热贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计1套特异性引物,建立快速检测Q热的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)实时浊度检测方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,在恒温反应条件下,对靶基因的特定区域进行扩增,建立LAMP检测方法。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒,而对结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏杆菌(Brucella.spp)及部分牛血液的核酸样本的特异性检测结果均为阴性,无交叉反应。本研究建立的LAMP实时浊度检测方法灵敏度高、特异性好,在Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 Q热 贝氏柯克斯体 环介导等温扩增 实时浊度检测法

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贝氏柯克斯体sucB基因的序列分析 被引量：2

16

作者 余全 To Ho Hirai Katsuya 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期407-409,共3页

目的　通过sucB基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体分离株的一些遗传特征。方法　对 16株贝氏柯克斯体分离株的sucB基因进行扩增、测序和分析。结果　sucB基因 113 7bp序列中 ,仅发现 3个位置的碱基突变 ,引起 3个氨基酸的改变。从 3个碱... 目的　通过sucB基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体分离株的一些遗传特征。方法　对 16株贝氏柯克斯体分离株的sucB基因进行扩增、测序和分析。结果　sucB基因 113 7bp序列中 ,仅发现 3个位置的碱基突变 ,引起 3个氨基酸的改变。从 3个碱基突变可大致将这些分离株分为两大群。结论　sucB基因在贝氏柯克斯体是一个很保守的酶基因。群的划分似与分离株的质粒型有很大的相关性 ,而与疾病形式和分离株的地理分布相关性较少。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 DNA序列 sucB基因 序列分析 Q热

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贝氏柯克斯体重组膜蛋白抗原激活树突状细胞诱导特异性免疫应答

17

作者 王颖 王锡乐 +3 位作者 吴德平 熊小路 尉雁 温博海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期509-514,共6页

目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外... 目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DCs;分别用Cb的5种重组膜蛋白IcmO、EnhA、SecB、Lo1A、HspB刺激DCs;用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测刺激后DCs表面分子表达。结果 SecB刺激的DCs表达CD83,CD86,CD80,CD54,CD58,和CD40水平显著高于其它4种蛋白;将SecB激活DCs或SecB激活DCs培养上清刺激T淋巴细胞,FACS检测显示刺激后CD4+和CD8+细胞高水平表达的T淋巴细胞活化标志CD69以及细胞因子IFN-γ和TNF-α。结论 SecB膜蛋白抗原能有效激活DCs和它所激活DCs能够诱导特异性细胞免疫应答,为贝氏柯克斯体潜在保护性抗原。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 树突状细胞 表面分子 细胞因子 流式细胞分析

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贝氏柯克斯体抑制单核细胞的杀菌活性

18

作者 李丽莉 朱力 +2 位作者 温博海 王恒樑 陈梅玲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期421-424,共4页

目的比较贝氏柯克斯体感染单核细胞和非感染单核细胞的蛋白谱,发现该柯克斯体感染诱导单核细胞表达蛋白。方法用贝氏柯克斯体I相毒株感染人单核细胞(THP-1),采用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳对感染单核细胞和非感染单核细胞同时做蛋白分... 目的比较贝氏柯克斯体感染单核细胞和非感染单核细胞的蛋白谱,发现该柯克斯体感染诱导单核细胞表达蛋白。方法用贝氏柯克斯体I相毒株感染人单核细胞(THP-1),采用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳对感染单核细胞和非感染单核细胞同时做蛋白分离,用专业电泳图谱分析软件发现它们之间的差异表达蛋白,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定差异表达蛋白。结果质谱分析鉴定97个差异表达蛋白,经蛋白氨基酸序列数据库检索和生物信息学分析发现其中15个差异表达蛋白参与调节单核细胞的吞噬、杀菌、细胞凋亡等。结论贝氏柯克斯体侵入单核细胞诱导细胞某些蛋白分子差异表达,增强柯克斯体细胞内入侵、抑制单核细胞的杀菌活性和细胞凋亡,促进贝氏柯克斯体在细胞内生存。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 单核细胞 蛋白质组 差异表达 杀菌活性

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贝氏柯克斯体感染小鼠血清与其毒力相关蛋白的免疫印迹反应

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作者 王锡乐 陈梅玲 +3 位作者 吴德平 孙长俭 杨晓 温博海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期593-596,共4页

目的筛选与贝氏柯克斯体感染血清反应的贝氏柯克斯体毒力相关蛋白。方法以贝氏柯克斯体标准株九里株为模板,采用PCR扩增包括IV型分泌系统、分泌性蛋白和膜蛋白在内的毒力及毒力相关的基因,将扩得目的基因片段与原核表达质粒pET32a重组,... 目的筛选与贝氏柯克斯体感染血清反应的贝氏柯克斯体毒力相关蛋白。方法以贝氏柯克斯体标准株九里株为模板,采用PCR扩增包括IV型分泌系统、分泌性蛋白和膜蛋白在内的毒力及毒力相关的基因,将扩得目的基因片段与原核表达质粒pET32a重组,将重组质粒转化大肠杆菌,用贝氏柯克斯体实验感染小鼠血清与转化大肠杆菌作免疫印迹。结果设计173对引物共扩增出170个目的基因,经PCR及酶切鉴定,有155个基因与pET32a质粒重组成功,SDS-PAGE电泳分析发现,共有104个转化菌表达目的蛋白,在104个重组蛋白中,筛选到32个与贝氏柯克斯体感染小鼠血清反应的重组蛋白。结论这些与贝氏柯克斯体感染血清反应的毒力相关蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。 展开更多

关键词 贝氏柯克斯体 毒力 重组蛋白 免疫印迹

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苣荬菜乙醇提取液抗贝氏柯克斯体的初步研究

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作者 温博栋 邱建波 +2 位作者 王锡乐 熊小路 温博海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期222-224,共3页

目的初步探讨苣荬菜（北败酱）乙醇提取物的抗Q热病原菌-贝氏柯克斯体药效。方法用乙醇提取苣荬菜,1g干生药获得1mL提取液;用贝氏柯克斯体腹腔感染Balb/c小鼠（105菌体/只）感染后第2d用倍比（5-160倍）稀释苣荬菜乙醇提取液腹腔给药,每... 目的初步探讨苣荬菜（北败酱）乙醇提取物的抗Q热病原菌-贝氏柯克斯体药效。方法用乙醇提取苣荬菜,1g干生药获得1mL提取液;用贝氏柯克斯体腹腔感染Balb/c小鼠（105菌体/只）感染后第2d用倍比（5-160倍）稀释苣荬菜乙醇提取液腹腔给药,每天1次、连续给药5d;第7d处死小鼠并取小鼠脾脏组织提取DNA,用种特异性荧光定量PCR检测DNA。结果 10、20、40、80倍稀释药物组小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量约2~5倍少于非药物处理对照组,其中20倍稀释药物组的小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量显著（5倍）少于对照组。结论我们的研究首次证明苣荬菜乙醇提取物对贝氏柯克斯体体内生长有明显的抑制作用,提示它具有潜在的抗贝氏柯克斯体药效。 展开更多

关键词 苣荬菜(北败酱) 贝氏柯克斯体 药效 抗菌

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