转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析

1

作者 李慧芬 李旭刚 +3 位作者 吴茜 陈蕾 徐鸿林 朱祯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第10期7-12,共6页

利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑... 利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示 :外源基因在植物已获表达 ,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。 展开更多

关键词 胰蛋白酶抑制剂基因 遗传转化 玉米自交系 抗虫性分析 基因枪 sck 转基因植株

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究 被引量：11

2

作者 赵强 赵志文 +2 位作者 张廷婷 崔德才 王斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期54-58,共5页

本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进... 本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。 展开更多

关键词 豇豆 胰蛋白酶抑制剂 CPTI 基因转化 欧美杨 转基因植株

在线阅读 下载PDF 职称材料

农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)在玉米中的遗传转化 被引量：8

3

作者 伍晓丽 朱祯 +3 位作者 李晚忱 潘光堂 曹墨菊 荣廷昭 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期297-298,共2页

关键词 农杆菌介导 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 玉米 遗传转化 抗虫性

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的克隆 被引量：6

4

作者 杨朝辉 雷建军 +3 位作者 曹必好 宋明 王亚培 王进 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第5期1050-1055,共6页

利用 RT- PCR的方法 ,从豇豆种子、子叶及成熟叶片中分别提取 RNA,反转录后以该基因两端的保守序列为引物进行 PCR扩增 ,PCR产物与 p UCm- T载体连接进行克隆 ,蓝白筛选重组子 ,经测序 ,其核苷酸同源性高达 1 0 0 % ,蛋白质同源性达 91 ... 利用 RT- PCR的方法 ,从豇豆种子、子叶及成熟叶片中分别提取 RNA,反转录后以该基因两端的保守序列为引物进行 PCR扩增 ,PCR产物与 p UCm- T载体连接进行克隆 ,蓝白筛选重组子 ,经测序 ,其核苷酸同源性高达 1 0 0 % ,蛋白质同源性达 91 %。本试验同时对该基因的表达时期差异进行了大致检测 ,结果是种子的表达量最高 ,子叶其次 。 展开更多

关键词 抗虫基因 反转录 测序 豇豆 胰蛋白酶 抑制剂基因 克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究 被引量：5

5

作者 吕玲玲 雷建军 +3 位作者 宋明 曹必好 陈国菊 曾国平 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期78-82,共5页

通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对... 通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对所获得的转基因植株进行PCR扩增,结果显示大多数为阳;PCR-Southern及Southern分子检测分析,结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中.转基因植株叶片的离体饲虫初步试验结果表明,对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用. 展开更多

关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 基因转化 花椰菜 农杆菌介导

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜及抗虫鉴定 被引量：6

6

作者 杨朝辉 宋洪元 何凤田 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期731-735,共5页

用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进... 用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进行了喂虫试验 ,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照 。 展开更多

关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 转化 芥菜 抗虫鉴定 农杆菌介导

在线阅读 下载PDF 职称材料

根癌农杆菌介导的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜的研究

7

作者 杨朝辉 何凤田 +4 位作者 宋明 江渝 彭家和 李蓉芬 黄刚 《西南农业学报》 CSCD 2004年第1期74-77,共4页

为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI... 为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中。在室内进行了喂虫试验,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照,转基因植株之间存在抗虫性差异。 展开更多

关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 芥菜 转化 抗虫

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：3

8

作者 罗娟 王秀敏 +3 位作者 韩烈保 刘君 曾会明 吴云锋 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期16-19,共4页

用CTAB法提取豇豆叶片总DNA后,根据基因两端的保守序列设计引物,经PCR方法扩增得到CpTI基因,将其克隆到pMD-18T载体上,酶切并测序鉴定,将该基因登陆到GeneBank(NO.EU088405)并进行同源性鉴定,证明该基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中... 用CTAB法提取豇豆叶片总DNA后,根据基因两端的保守序列设计引物,经PCR方法扩增得到CpTI基因,将其克隆到pMD-18T载体上,酶切并测序鉴定,将该基因登陆到GeneBank(NO.EU088405)并进行同源性鉴定,证明该基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中的一员。在此基础上,将CpTI基因用限制性内切酶BamHⅠ/SacⅠ切下后,克隆到pCUbi1303的UBI启动子和NOS终止子之间。经PCR和酶切鉴定,得到了该基因的真核表达载体pCUbiCpTI1303,为下一步的转基因做好了准备。 展开更多

关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI) 克隆 植物表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探 被引量：19

9

作者 高越峰 朱祯 +2 位作者 朱玉 肖桂芳 李向辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第9期5-9,共5页

从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源... 从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源率分别为99．5％和98．2％。由此，构建了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的植物高效表达载体pBinSKTI。并采用农杆菌介导的叶盘法转化了烟草，获得的转基因烟草再生植株经抗虫测试表明：与对照烟草相比，具有明显的抗棉铃虫能力。 展开更多

关键词 大豆胰蛋白酶 抑制剂 抗虫基因 转基因烟草

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制基因改良大白菜抗虫性的研究(英文) 被引量：2

10

作者 赵军良 梁爱华 +1 位作者 徐鸿林 朱祯 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期878-885,共8页

以8个大白菜亲本材料无菌苗为实验材料,从近生长点处切下无菌苗子叶,在MS＋1 mg/L 2,4-D培养基上预培养48 h,以携带豇豆胰蛋白酶抑制基因（该基因可赋予大白菜抗菜青虫和小菜蛾等昆虫的抗性,Cowpea Trypsin Inhibitor gene,CpTI）的质粒... 以8个大白菜亲本材料无菌苗为实验材料,从近生长点处切下无菌苗子叶,在MS＋1 mg/L 2,4-D培养基上预培养48 h,以携带豇豆胰蛋白酶抑制基因（该基因可赋予大白菜抗菜青虫和小菜蛾等昆虫的抗性,Cowpea Trypsin Inhibitor gene,CpTI）的质粒pBinΩSCK为载体,通过OD600值约0.3～0.4的根癌农杆菌LBA4404侵染3min,在MS＋2 mg/L BA＋0.5 mg/L NAA＋5 mg/L硝酸银＋2%蔗糖＋8 g/L琼脂培养基上共培养48 h,将其转到含有卡那霉素和头孢霉素的筛选培养基中,约4周出现大量转化体,经分子杂交检测,证明了豇豆胰蛋白酶抑制剂基因整合到了大白菜基因组中,室内和田间的抗虫试验也表明,豇豆胰蛋白酶抑制剂基因赋予了转基因大白菜较强的抗虫能力.本研究还对影响农杆菌遗传转化效率及植株再生的各种因素进行了优化. 展开更多

关键词 根癌农杆菌 大白菜 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 昆虫抗性 遗传转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种简便、快捷的胰蛋白酶抑制剂基因的分离与克隆方法 被引量：3

11

作者 秦新民 邓智年 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期420-424,共5页

从 3个豇豆品种幼嫩叶片中分离出核基因组 DNA,参照已知的几种 Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列 ,设计合成了 2 7bp,且含有 Bam H I位点的寡核苷酸引物 ,分别以 3种豇豆核基因组 DNA为模板 ,PCR扩增 ,均得到长度约为 3 40 bp的 DN... 从 3个豇豆品种幼嫩叶片中分离出核基因组 DNA,参照已知的几种 Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列 ,设计合成了 2 7bp,且含有 Bam H I位点的寡核苷酸引物 ,分别以 3种豇豆核基因组 DNA为模板 ,PCR扩增 ,均得到长度约为 3 40 bp的 DNA片段。产物 DNA片段经 DNA序列分析 ,结果表明三者的碱基序列相同 ,与报道的胰蛋白酶抑制剂基因相比 ,同源性为 1 0 0 %和 99.7%。 展开更多

关键词 胰蛋白酶抑制剂 克隆方法 豇豆 PCR扩增 基因分离 CPTI 抗虫基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

胰蛋白酶抑制剂SKTI3基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：1

12

作者 柴晓杰 吕品 +1 位作者 张宇 王丕武 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期384-386,共3页

以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因SKTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654 bp,与已发表的SKTI3基因序列同源性达99%。将目的基因... 以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因SKTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654 bp,与已发表的SKTI3基因序列同源性达99%。将目的基因片段插入到pB I121 35S启动子下,构建重组质粒pB ISKTI3,采用冻融法将该重组质粒转入农杆菌EHA105中,获得了植物表达载体。 展开更多

关键词 胰蛋白酶抑制剂基因 克隆 植物表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

胰蛋白酶抑制剂抗虫基因转化烟草的研究 被引量：5

13

作者 吴晓梅 陈德海 +1 位作者 缪颖 杨盛昌 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期706-709,共4页

实验用携带质粒pAM194/TI的根癌农杆菌LBA4404转化烟草,通过筛选,共获得35株卡那霉素抗性苗.GUS组织染色、PCR检测及抗虫试验表明胰蛋白酶抑制剂抗虫基因已经成功地整合进再生植株染色体基因组中,有些已正确表达.

关键词 抗虫基因 烟草 再生植株 根癌农杆菌 PCR检测 卡那霉素抗性 胰蛋白酶抑制剂 携带 组织染色 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

豇豆胰蛋白酶抑制剂不同组分的制备方法 被引量：1

14

作者 金宪雷 张泉霖 +1 位作者 杜林方 刘科 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2012年第B12期118-121,共4页

以豇豆种子为材料,经脱脂、乙酸钠抽提、硫酸铵分级沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物。再经凝胶过滤、离子交换层析和FPLC,分别得到了豇豆蛋白酶抑制剂的不同组分,并进行了SDS-PAGE分析。同时通过明胶活性电泳,证实了各部分均具备专一的胰... 以豇豆种子为材料,经脱脂、乙酸钠抽提、硫酸铵分级沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物。再经凝胶过滤、离子交换层析和FPLC,分别得到了豇豆蛋白酶抑制剂的不同组分,并进行了SDS-PAGE分析。同时通过明胶活性电泳,证实了各部分均具备专一的胰蛋白酶抑制剂活性。 展开更多

关键词 豇豆 胰蛋白酶抑制剂 分离纯化 活性电泳

在线阅读 下载PDF 职称材料

即墨野生大豆胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及序列分析 被引量：2

15

作者 徐一榕 朱妍 +2 位作者 张燕茹 王旻 张莉 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期517-524,共8页

为了从分子水平上解析野生大豆胰蛋白酶抑制剂的特异性,应用RT-PCR方法从即墨野生大豆(Glycine soja Sieb.et Zucc)中扩增出胰蛋白酶抑制剂两种编码基因Kunitz型(KTI,654 bp)及Bowman-Birk型(BBI,357 bp)的基因全长序列,并对两个基因序... 为了从分子水平上解析野生大豆胰蛋白酶抑制剂的特异性,应用RT-PCR方法从即墨野生大豆(Glycine soja Sieb.et Zucc)中扩增出胰蛋白酶抑制剂两种编码基因Kunitz型(KTI,654 bp)及Bowman-Birk型(BBI,357 bp)的基因全长序列,并对两个基因序列做生物信息学分析。分别登录到Gen Bank Accession No.AB112031.1和Accession No.AB081833.1并进行同源性鉴定,证明这两个基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中的成员。结果表明:即墨野生大豆的KTI基因与野生大豆(Glycine soja,No.AB308134.1)、大豆(Glycine max,No.EF541136.1)的KTI基因序列同源性都为99%,具有6个保守基序;BBI基因与野生大豆(Glycine soja,No.AB081834.1)、大豆(Glycine max,NM_001250058.3)BBI基因序列同源性均为99%,具有5个保守基序,通过二级、三级结构分析发现与栽培大豆有着明显的差别。 展开更多

关键词 野生大豆 胰蛋白酶抑制剂 基因 生物信息学

在线阅读 下载PDF 职称材料

加热对转基因和非转基因大豆胰蛋白酶抑制剂活性以及蛋白质溶解度的影响 被引量：1

16

作者 刘晓庆 朱晓鸣 +3 位作者 韩冬 金俊琰 杨云霞 解绶启 《饲料工业》 北大核心 2013年第10期32-37,共6页

大豆是重要的植物蛋白和油脂来源,具有极高的营养价值,在水产饲料中得到了广泛应用。但是大豆中含有多种抗营养因子,特别是胰蛋白酶抑制剂限制了大豆及其制品在饲料中的利用。试验旨在研究加热法处理转基因和非转基因大豆对胰蛋白酶抑... 大豆是重要的植物蛋白和油脂来源,具有极高的营养价值,在水产饲料中得到了广泛应用。但是大豆中含有多种抗营养因子,特别是胰蛋白酶抑制剂限制了大豆及其制品在饲料中的利用。试验旨在研究加热法处理转基因和非转基因大豆对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果及蛋白质溶解度的影响,采用60、80、100、120℃,分别加热1、2 h。结果表明:转基因大豆含有较高的胰蛋白酶抑制剂;两种大豆胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)都随加热温度升高而降低,非转基因大豆TIA对温度更敏感;120℃、2 h能有效抑制大豆TIA,在该条件下转基因和非转基因大豆的胰蛋白酶抑制剂活性的相对抑制率分别为73.64%和78.79%,且不影响其蛋白质溶解度。 展开更多

关键词 转基因 非转基因 大豆 胰蛋白酶抑制剂活性 蛋白质溶解度

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)研究进展 被引量：8

17

作者 赵洪锟 李启云 +1 位作者 王玉民 庄炳昌 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期218-222,共5页

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种... 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种蛋白酶抑制剂抗虫谱广 ,能显著抑制幼虫的生长发育不易产生抗性 ,对人畜无害 ,因此对其进行研究及开发利用具有重要的经济和社会效益。迄今为止 ,至少已有 4种基因被克隆 ,通过转基因技术在烟草、水稻、小麦等作物获得了抗性植株 .本文从SKTI的类型、基因克隆及生理功能等方面作一简单综述。 展开更多

关键词 类型 基因克隆 生理功能 分布频率 大豆 Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 SKTI

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜荞胰蛋白酶抑制剂cDNA片段的克隆及序列特征 被引量：3

18

作者 张政 李玉英 +1 位作者 史晓儒 王转花 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期46-51,共6页

采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂 buckwheattrypsinin-hibitor,BTI ,经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-R... 采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂 buckwheattrypsinin-hibitor,BTI ,经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-RACE等方法,直接体外扩增该抑制剂基因,首次获得总长为361bp的DNA片段 GenBank登录号为AY335158 ,并命名为BTI-W1.该片段包括一个183bp的开放阅读框,编码61个氨基酸.由该基因推导的氨基酸序列与已报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂BTI-2的氨基酸序列的同源性达100%.BTI-W1基因的获得,对于深入开展荞麦胰蛋白酶抑制剂结构与功能关系的研究具有重要意义,也为荞麦植物资源的开发利用建立了前期研究基础. 展开更多

关键词 养麦 胰蛋白酶抑制剂 RT-PCR 基因克隆 DNA序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂通过下调己糖激酶Ⅱ抑制HepG2细胞生长 被引量：2

19

作者 崔晓东 闫红 +1 位作者 任荣 王转花 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期939-946,共8页

糖酵解过度活跃是肿瘤细胞能量代谢的显著特征。抑制过度糖酵解已经成为一种新的癌症疗法。重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,r BTI)可以通过上调磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)进而抑制Hep G2细胞增... 糖酵解过度活跃是肿瘤细胞能量代谢的显著特征。抑制过度糖酵解已经成为一种新的癌症疗法。重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,r BTI)可以通过上调磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)进而抑制Hep G2细胞增殖。有关r BTI对肿瘤细胞能量代谢的影响仍未见报道。本研究中的MTT和ATP检测分析表明,r BTI以剂量依赖性方式抑制细胞活力及胞内ATP含量。qRT-PCR和Western印迹分析表明,r BTI处理Hep G2细胞后,己糖激酶Ⅱ转录显著下调,但是糖酵解过程中的其他酶及葡萄糖转运蛋白基因在转录水平未发生显著变化,同时己糖激酶Ⅱ蛋白水平的表达也显著下调。酶活性分析也表明,r BTI能显著降低己糖激酶的活性。进一步分析表明,r BTI使细胞内PTEN转录及表达水平明显上调,己糖激酶Ⅱ转录和p-AKT,p-m TOR、己糖激酶Ⅱ的表达下调。当PTEN抑制剂phen存在时,可阻断r BTI诱导的己糖激酶Ⅱ表达下降,表明r BTI能通过上调PTEN进而影响己糖激酶Ⅱ的表达。免疫荧光及Western印迹分析显示,r BTI作用后减弱了己糖激酶Ⅱ在线粒体的定位,导致己糖激酶Ⅱ与线粒体电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage-dependent anion channel,VDAC)分离,促使己糖激酶Ⅱ从线粒体转位到细胞质,降低糖酵解的效率。上述结果证明,r BTI对肿瘤细胞能量代谢的调控作用主要通过抑制PI3K/AKT信号通路,下调己糖激酶Ⅱ的表达并影响空间定位,进而抑制肿瘤细胞糖酵解过程,导致癌细胞生长受到抑制。 展开更多

关键词 荞麦胰蛋白酶抑制剂 能量代谢 磷酸酶及张力蛋白同源基因 己糖激酶Ⅱ

在线阅读 下载PDF 职称材料

国槐离体再生及抗虫基因sck的转导 被引量：6

20

作者 张晓英 王华芳 +2 位作者 朱祯 王天祥 尹伟伦 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第9期34-38,F0003,共6页

以国槐叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基;利用根癌农杆菌介导法将经过修饰的广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck(Signal-CpTI-KDEL)导入国槐。国槐叶片与农杆菌共培养结束后,转移至筛选培养基MS+BA3 mg·L-1+IA... 以国槐叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基;利用根癌农杆菌介导法将经过修饰的广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck(Signal-CpTI-KDEL)导入国槐。国槐叶片与农杆菌共培养结束后,转移至筛选培养基MS+BA3 mg·L-1+IAA0·05 mg·L-1+G418 8 mg·L-1+Cef 500 mg·L-1上。不定芽在培养基1/2MS+IBA1·0 mg·L-1+G418 10 mg·L-1+Cef 100 mg·L-1上进一步培养获得完整再生植株。通过PCR和Southern blotting检测证明,修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck已成功导入国槐细胞。 展开更多

关键词 国槐 根癌土壤农杆菌 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck 基因转导

在线阅读 下载PDF 职称材料