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蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶的部分纯化
被引量：
3
1
作者
汤方
张常忠
+2 位作者
梁沛
史雪岩
高希武
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期172-178,共7页
通过用聚乙烯亚胺(PEI)、硫酸铵、聚乙二醇(PEG)沉淀技术和GSH-Sepharose 4B亲和柱对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)幼虫中谷胱甘肽S-转移酶进行了部分纯化研究.结果表明PEG10000和PEG20000的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果.通...
通过用聚乙烯亚胺(PEI)、硫酸铵、聚乙二醇(PEG)沉淀技术和GSH-Sepharose 4B亲和柱对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)幼虫中谷胱甘肽S-转移酶进行了部分纯化研究.结果表明PEG10000和PEG20000的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果.通过PEI沉淀去核酸后,再用硫酸铵沉淀,中肠和脂肪体GST活性分布在70%～75%和60%～65%沉淀段,比活力分别为1081.49和596.41 nmol/(min·mg),纯化倍数分别为2.53和2.2.在6种PEG中,PEG10000和PEG20000的纯化效果较好.在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%～45%和30%～40%,GST比活力分别为795.11和1 080.18 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.4和3.97.PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%～40%和25%～45%,比活力分别是767.57和945.96 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.81和3.05.用GSH-Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5 888.44nmol/(min·mg),纯化倍数达到107.38.
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关键词
棉铃虫
谷
胱
甘
肽
S-转移酶
硫酸铵沉淀
聚乙烯亚胺沉淀
聚乙二醇沉淀
GSH—Sephamse
4
b
亲和
柱
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职称材料
丹酚酸B基于Nrf2-Gpx4通路介导的铁死亡途径改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏间质纤维化
被引量：
8
2
作者
孙源博
宋嫣然
+2 位作者
王诗琪
孙丽欣
李桂芹
《陆军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期1018-1024,共7页
目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,Gpx4)通路介导的铁死亡途径,探究丹酚酸B对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠...
目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,Gpx4)通路介导的铁死亡途径,探究丹酚酸B对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的改善作用。方法采用随机数字表法将40只大鼠分为假手术组、模型组、丹酚酸B组、丹酚酸B+Nrf2抑制剂组,每组10只。除假手术组外,其余各组建立UUO模型,假手术组除不结扎、剪断输尿管外,其余操作相同。丹酚酸B组灌胃100 mg·kg^(-1)·d^(-1)丹酚酸B,丹酚酸B+Nrf2抑制剂组在丹酚酸B组基础上腹腔注射Nrf2抑制剂ML38530 mg·kg^(-1)·d^(-1),假手术组、模型组灌胃等体积无菌生理盐水,连续9 d。HE染色和Masson染色检测肾组织形态和纤维化情况;试剂盒检测肾脏组织中Fe^(2+)、丙二醛(maleicdialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹检测肾脏组织中Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ,CoL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ,CoL-Ⅲ)、Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组肾脏组织中Fe^(2+)、MDA含量,CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),血清中SOD活性降低(P<0.05),肾脏组织中Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B组肾脏组织中Fe^(2+)、MDA含量,CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ的mRNA和蛋白水平降低(P<0.05),血清中SOD活性,肾脏组织中Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与丹酚酸B组相比,丹酚酸B+Nrf2抑制剂组肾脏组织中Fe^(2+)、MDA含量,CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),血清中SOD活性,肾脏组织中Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。结论丹酚酸B能够激活Nrf2-Gpx4通路进而抑制铁死亡实现对UUO大鼠RIF的缓解。
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关键词
肾脏间质纤维化
单侧输尿管梗阻
丹酚酸
b
核因子E2相关因子2-
谷
胱
甘
肽
过氧化物酶
4
通路
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职称材料
G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达
被引量：
5
3
作者
康巧华
陈巧林
+2 位作者
季清洲
任宏伟
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期75-79,共5页
利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中...
利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明 。
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关键词
G蛋白
RA
b
3A
克隆
表达
谷胱甘肽-sepharose4b亲和层析
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职称材料
题名
蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶的部分纯化
被引量：
3
1
作者
汤方
张常忠
梁沛
史雪岩
高希武
机构
中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期172-178,共7页
基金
国家重点基础研究发展规划"973"项目 (G2000016207)
国家自然科学基金项目 (30471153
30170621)
文摘
通过用聚乙烯亚胺(PEI)、硫酸铵、聚乙二醇(PEG)沉淀技术和GSH-Sepharose 4B亲和柱对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)幼虫中谷胱甘肽S-转移酶进行了部分纯化研究.结果表明PEG10000和PEG20000的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果.通过PEI沉淀去核酸后,再用硫酸铵沉淀,中肠和脂肪体GST活性分布在70%～75%和60%～65%沉淀段,比活力分别为1081.49和596.41 nmol/(min·mg),纯化倍数分别为2.53和2.2.在6种PEG中,PEG10000和PEG20000的纯化效果较好.在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%～45%和30%～40%,GST比活力分别为795.11和1 080.18 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.4和3.97.PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%～40%和25%～45%,比活力分别是767.57和945.96 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.81和3.05.用GSH-Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5 888.44nmol/(min·mg),纯化倍数达到107.38.
关键词
棉铃虫
谷
胱
甘
肽
S-转移酶
硫酸铵沉淀
聚乙烯亚胺沉淀
聚乙二醇沉淀
GSH—Sephamse
4
b
亲和
柱
Keywords
Helicoverpa armigera
glutathione S-transferases
ammonium sulfate fractionation
polyethylene imine fractionation
polyethyleneglycol fractionation
GSH
-sepharose
4
b
分类号
Q965.9 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
丹酚酸B基于Nrf2-Gpx4通路介导的铁死亡途径改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏间质纤维化
被引量：
8
2
作者
孙源博
宋嫣然
王诗琪
孙丽欣
李桂芹
机构
牡丹江医学院附属红旗医院:肾脏内科
牡丹江医学院附属红旗医院:血液透析室
出处
《陆军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期1018-1024,共7页
基金
黑龙江省青年创新人才培养计划项目(UNPYSCT-2018120)
黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(2019-KYYWFMY-0047)
“红旗科研基金”科技项目(2018HQ-05)。
文摘
目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,Gpx4)通路介导的铁死亡途径,探究丹酚酸B对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的改善作用。方法采用随机数字表法将40只大鼠分为假手术组、模型组、丹酚酸B组、丹酚酸B+Nrf2抑制剂组,每组10只。除假手术组外,其余各组建立UUO模型,假手术组除不结扎、剪断输尿管外,其余操作相同。丹酚酸B组灌胃100 mg·kg^(-1)·d^(-1)丹酚酸B,丹酚酸B+Nrf2抑制剂组在丹酚酸B组基础上腹腔注射Nrf2抑制剂ML38530 mg·kg^(-1)·d^(-1),假手术组、模型组灌胃等体积无菌生理盐水,连续9 d。HE染色和Masson染色检测肾组织形态和纤维化情况;试剂盒检测肾脏组织中Fe^(2+)、丙二醛(maleicdialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹检测肾脏组织中Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ,CoL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ,CoL-Ⅲ)、Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组肾脏组织中Fe^(2+)、MDA含量,CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),血清中SOD活性降低(P<0.05),肾脏组织中Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B组肾脏组织中Fe^(2+)、MDA含量,CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ的mRNA和蛋白水平降低(P<0.05),血清中SOD活性,肾脏组织中Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与丹酚酸B组相比,丹酚酸B+Nrf2抑制剂组肾脏组织中Fe^(2+)、MDA含量,CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),血清中SOD活性,肾脏组织中Nrf2、Gpx4的mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。结论丹酚酸B能够激活Nrf2-Gpx4通路进而抑制铁死亡实现对UUO大鼠RIF的缓解。
关键词
肾脏间质纤维化
单侧输尿管梗阻
丹酚酸
b
核因子E2相关因子2-
谷
胱
甘
肽
过氧化物酶
4
通路
Keywords
renal interstitial fi
b
rosis
unilateral ureteral o
b
struction
salvianolic acid
b
nuclear factor erythroid 2-related factor 2-glutathione peroxidase
4
pathway
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
R692 [医药卫生—泌尿科学]
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职称材料
题名
G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达
被引量：
5
3
作者
康巧华
陈巧林
季清洲
任宏伟
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院
扬州大学畜牧兽医学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期75-79,共5页
基金
国家 95攻关合同项目资助 (No .96 C0 2 0 1 0 9)
文摘
利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明 。
关键词
G蛋白
RA
b
3A
克隆
表达
谷胱甘肽-sepharose4b亲和层析
Keywords
G protein, Ra
b
3a, cloning and expression, Glutathione Sepharose
4
b
affinity chromatography
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶的部分纯化
汤方
张常忠
梁沛
史雪岩
高希武
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
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职称材料
2
丹酚酸B基于Nrf2-Gpx4通路介导的铁死亡途径改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏间质纤维化
孙源博
宋嫣然
王诗琪
孙丽欣
李桂芹
《陆军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
8
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职称材料
3
G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达
康巧华
陈巧林
季清洲
任宏伟
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
5
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职称材料
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