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谷氨酸脱氢酶gdhA基因缺失对单增李斯特菌抗氧化应激的影响 被引量：1
1
作者 田篮鑫 杨雨婷 +3 位作者 秦祎 张政 田光明 方春 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3771-3779,共9页
【目的】旨在阐明谷氨酸脱氢酶gdhA基因对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响,并探明glnR基因对gdhA基因的调控作用。【方法】采用同源重组技术构建单增李斯特菌gdhA基因缺失株;通过生长曲线测定亲本株10403S、缺失株10403S-ΔgdhA和回补... 【目的】旨在阐明谷氨酸脱氢酶gdhA基因对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响,并探明glnR基因对gdhA基因的调控作用。【方法】采用同源重组技术构建单增李斯特菌gdhA基因缺失株;通过生长曲线测定亲本株10403S、缺失株10403S-ΔgdhA和回补株10403S-CΔgdhA菌株的生长能力;利用抗氧化应激存活试验检测gdhA基因缺失对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响。诱导GdhA蛋白表达并纯化,制备兔多克隆抗体,并通过Western blotting检测抗体特异性。通过构建携带gdhA基因启动子区域的GFP报告质粒,测定氧化应激条件下glnR基因缺失对gdhA基因转录水平的影响。使用Western blotting检测氧化应激条件下glnR基因缺失对GdhA蛋白表达水平的影响,并检测glnR基因缺失对菌株存活能力的影响。【结果】生长曲线结果显示,gdhA基因缺失不影响单增李斯特菌在正常条件下的生长能力。在20 mmol/L H 2O 2条件下,缺失株10403S-ΔgdhA存活能力极显著高于亲本株10403S(P<0.01)。Western blotting结果显示,GdhA兔多克隆抗体制备成功。GFP荧光分析结果显示,glnR基因缺失后,gdhA基因转录水平极显著上调(P<0.01);在氧化应激条件下glnR基因缺失后GdhA蛋白表达水平极显著升高(P<0.01);glnR基因缺失菌株存活能力显著下降(P<0.05)。【结论】谷氨酸脱氢酶编码基因gdhA缺失不影响单增李斯特菌10403S正常生长,但显著提高其氧化应激条件下的存活能力,gdhA基因转录水平及GdhA蛋白表达水平受glnR基因负调控。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 谷氨酸脱氢酶 gdhA基因 氧化应激 glnR基因
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稀土元素对谷氨酸发酵产酸及其谷氨酸脱氢酶的影响 被引量：14
2
作者 王燕 杨平平 +3 位作者 宋香 鄢贵龙 段作营 毛忠贵 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期33-36,共4页
以目前我国谷氨酸发酵广泛使用的谷氨酸棒杆菌S9114 为实验菌株 ,研究了稀土元素对谷氨酸发酵产酸及其谷氨酸脱氢酶的影响。结果表明LaCl3、CeCl3和NdCl3浓度分别为 0 72 0、0 0 71和 0 0 0 7mmol/L时 ,促使谷氨酸发酵产酸水平提高 6... 以目前我国谷氨酸发酵广泛使用的谷氨酸棒杆菌S9114 为实验菌株 ,研究了稀土元素对谷氨酸发酵产酸及其谷氨酸脱氢酶的影响。结果表明LaCl3、CeCl3和NdCl3浓度分别为 0 72 0、0 0 71和 0 0 0 7mmol/L时 ,促使谷氨酸发酵产酸水平提高 6%～ 8% ,对菌体的GDH NADPH的酶活性有显著的激活作用。实验还表明 ,稀土元素对纯化GDH 展开更多
关键词 谷氨酸脱氢酶 产酸 GDH 影响 调节作用 实验 激活作用 谷氨酸发酵 谷氨酸棒杆菌 NADPH
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猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定 被引量：17
3
作者 赵华梅 潘秀珍 +3 位作者 王长军 郭恒彬 李先富 唐家琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期22-25,共4页
目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层... 目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 谷氨酸脱氢酶 GDH家族I NADP(H)一特异性GDH
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硝态氮对黄瓜子叶谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的影响 被引量：30
4
作者 王云华 王志强 +3 位作者 张楚富 周忠新 马敬坤 欧吉权 《武汉植物学研究》 CSCD 2004年第6期534-538,共5页
在硝态氮存在或缺乏的条件下,测定了黄瓜(CucumissativusL.)种子萌发和子叶发育过程中子叶可溶性蛋白质含量以及谷氨酰胺合成酶(GS)和谷氨酸脱氢酶(NAD(H)-GDH)活性的变化。在子叶发育初期,无论外源氮存在与否,每对子叶可溶性蛋白质含量... 在硝态氮存在或缺乏的条件下,测定了黄瓜(CucumissativusL.)种子萌发和子叶发育过程中子叶可溶性蛋白质含量以及谷氨酰胺合成酶(GS)和谷氨酸脱氢酶(NAD(H)-GDH)活性的变化。在子叶发育初期,无论外源氮存在与否,每对子叶可溶性蛋白质含量和GS、NADH-GDH、NAD+-GDH活性随发育上升。在外源氮存在下,第4d后,可溶性蛋白质含量虽有所下降,但基本保持恒定;第6d后,GS和NADH-GDH活性逐渐降低,NAD+-GDH却相反增高。但在无外源氮条件下,于第4d后,可溶性蛋白质水平以及GS、NADH-GDH和NAD+-GDH活性都逐渐降低。在子叶发育的整个过程中,外源氮对GS和NAD+-GDH活性有促进作用,尤其是在子叶发育的后期对NAD+-GDH活性的促进更为明显。 展开更多
关键词 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸脱氢酶 硝态氮 黄瓜子叶 发育
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NaCl对水稻谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的胁迫作用 被引量：36
5
作者 林清华 李常健 +3 位作者 彭进 张楚富 Peng Shaobing Bennett John 《武汉植物学研究》 CSCD 2000年第3期206-210,共5页
在 Na Cl的胁迫下 ,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的 Na Cl浓度的升高而降低 ;游离 NH+ 4 在叶中积累 ,在根中未见明显变化。与根相比 ,叶对 Na Cl的胁迫作用更为敏感。叶的 NADH- GOGAT和 NADH- GDH活性... 在 Na Cl的胁迫下 ,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的 Na Cl浓度的升高而降低 ;游离 NH+ 4 在叶中积累 ,在根中未见明显变化。与根相比 ,叶对 Na Cl的胁迫作用更为敏感。叶的 NADH- GOGAT和 NADH- GDH活性在 Na Cl胁迫下降低的程度明显大于根。无论是否有 Na Cl存在 ,根的 NADH- GDH活性明显高于叶。 GS/GDH比值分析提示 ,在对照下 ,根中的 NH+ 4 的同化以 GS- GOGAT途径为主 ;而在 Na Cl胁迫下 ,GS- GOGAT途径明显削弱 ,GDH途径在 NH+ 4 的同化中的作用明显加强。无论是否有 Na Cl的存在 ,叶的 NH+ 4 同化途径都是以 GS- GOGAT为主。 展开更多
关键词 谷氨酸合酶 谷氨酸脱氢酶 水稻 NaCl胁迫作用
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类产碱假单胞菌谷氨酸脱氢酶的提纯、鉴定及某些特性的初步研究 被引量：6
6
作者 丁诗华 杨志荣 +2 位作者 唐亚雄 景仁志 刘世贵 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期968-973,共6页
从类产碱假单胞菌纯化出电泳纯的谷氨酸脱氢酶，用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为２９０ ｋＤ，亚基分子量为４７ ｋＤ，提示该酶为六聚体．该酶对ＮＡＤＰ（Ｈ）和底物均具有高度专一性，对谷氨酸、... 从类产碱假单胞菌纯化出电泳纯的谷氨酸脱氢酶，用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为２９０ ｋＤ，亚基分子量为４７ ｋＤ，提示该酶为六聚体．该酶对ＮＡＤＰ（Ｈ）和底物均具有高度专一性，对谷氨酸、α－酮戊二酸及ＮＡＤＰ＋ 的Ｋｍ 值分别为：２８ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ、１．２ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ及０．０６３ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ．用Ｈｉｌｌ作图法求得酶对ＮＨ＋４ 和ＮＡＤＰＨ 的［Ｓ］０．５分别为２４ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ和０．０３７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ．最适反应温度为５０℃，催化氨化反应和脱氨反应的最适ｐＨ 分别为８．０和８．８，在热稳定性方面不及嗜热细菌的谷氨酸脱氢酶稳定．提纯的谷氨酸脱氢酶在低温（４℃）条件下，可在Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中贮存半年以上，活力无明显下降，冷冻则可导致纯酶液迅速失活．氮源对菌体谷氨酸脱氢酶水平有显著影响． 展开更多
关键词 类产碱假单胞菌 谷氨酸脱氢酶 纯化 鉴定 酶活性
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鸭肝谷氨酸脱氢酶的纯化与酶学性质研究 被引量：5
7
作者 朱鸿 李想韵 +4 位作者 王松 付伟丽 唐靓婷 诰赵伟 唐云明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第19期231-235,共5页
目的:获得鸭肝谷氨酸脱氢酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法:采用丙酮脱脂、重金属离子沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和SephacrylS-200凝胶层析方法,分离纯化鸭肝谷氨酸脱氢酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯... 目的:获得鸭肝谷氨酸脱氢酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法:采用丙酮脱脂、重金属离子沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和SephacrylS-200凝胶层析方法,分离纯化鸭肝谷氨酸脱氢酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子质量测定。结果:从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的谷氨酸脱氢酶,纯化倍数为60.93倍,酶活力回收率为11.02%,比活力达24.37U/mg。酶相对分子质量为371.41,亚基相对分子质量为61.60。推测该酶由6个相同亚基构成。该酶对NADH的Km为53.19μmol/L,最适pH值为10.0,最适反应温度为35℃。该酶在pH8.0左右较稳定;在40℃以下酶活力保持稳定。Zn2+、Li+和Cu2+对该酶具有显著的抑制作用。结论:分离纯化获得谷氨酸脱氢酶,该酶具有较高应用价值。 展开更多
关键词 鸭肝 谷氨酸脱氢酶 分离纯化 性质
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巴西橡胶树谷氨酸脱氢酶基因cDNA片段克隆及表达分析 被引量：4
8
作者 冯仁军 卢利方 +2 位作者 程萍 袁克华 张银东 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期114-118,共5页
谷氨酸脱氢酶[Glutamatedehy drogenase,(GDH;E.C.1.1.4.2)]在植物处于逆境或胁迫时,发挥着重要的作用,主要功能可能是解除逆境或胁迫条件下高浓度的铵毒害.该研究通过同源克隆从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)中获得谷氨酸脱氢酶基因(... 谷氨酸脱氢酶[Glutamatedehy drogenase,(GDH;E.C.1.1.4.2)]在植物处于逆境或胁迫时,发挥着重要的作用,主要功能可能是解除逆境或胁迫条件下高浓度的铵毒害.该研究通过同源克隆从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)中获得谷氨酸脱氢酶基因(HbGDH)的部分cDNA片段(GeneBank登录号:DQ672585),其蛋白包含一个谷氨酸脱氢酶保守结构域.BLAST比对表明HbGDH基因与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryzasativa)GDH基因分别有82%、79%的同源率;系统进化树分析发现HbGDH蛋白与拟南芥、水稻GDH蛋白聚为一簇;不同组织的表达分析表明HbGDH基因在胶乳中表达较高,叶片中次之,树皮中最低. 展开更多
关键词 巴西橡胶树 谷氨酸脱氢酶 同源克隆 RT-PCR
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氨氮胁迫下中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)谷氨酸脱氢酶基因的表达分析 被引量：4
9
作者 何玉英 李少飞 +1 位作者 王清印 李健 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第5期83-91,共9页
采用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)谷氨酸脱氢酶GDH基因(Fc GDH)。Fc GDH基因全长1779 bp,包括1个1659 bp的开放阅读框(ORF),编码552个氨基酸,预测分子量大小为61.3 k Da,理论等电点为6.54。同源性分析显示,Fc ... 采用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)谷氨酸脱氢酶GDH基因(Fc GDH)。Fc GDH基因全长1779 bp,包括1个1659 bp的开放阅读框(ORF),编码552个氨基酸,预测分子量大小为61.3 k Da,理论等电点为6.54。同源性分析显示,Fc GDH氨基酸序列与其他动物高度保守,其中,与凡纳滨对虾最为相似,高达98%,其次为中华绒螯蟹,为89%。系统进化树分析显示,Fc GDH氨基酸序列与凡纳滨对虾GDH聚为一支,之后依次为:中华绒螯蟹、黑腹果蝇、埃及按蚊。组织表达分析发现,Fc GDH基因在肌肉、鳃、肝胰腺、胃、肠、淋巴和血淋巴中均有表达,其中,肌肉中表达量最高。氨氮胁迫后,Fc GDH基因在肌肉和肝胰腺组织中变化显著,在胁迫后期,Fc GDH基因表达量均上调,且与对照组相比差异显著(P<0.05),说明Fc GDH基因在氨氮解毒代谢过程中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 中国明对虾 谷氨酸脱氢酶 基因克隆 基因表达 氨氮胁迫
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抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立 被引量：7
10
作者 李妍 宁云山 +3 位作者 李莉 彭丹丹 董文其 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期435-438,共4页
目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-... 目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测.结果筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG1,亲和常数(κ)介于1×10-8～2.82×10-10.以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%.结论建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒. 展开更多
关键词 疟原虫 恶性 谷氨酸脱氢酶 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法
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谷氨酸生产菌S_(9114)中依赖于NADPH谷氨酸脱氢酶的纯化及性质 被引量：3
11
作者 王燕 宋香 +2 位作者 杨平平 段作营 毛忠贵 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期5-9,共5页
利用DEAE 纤维素离交柱层析、疏水柱层析和凝胶过滤层析等从谷氨酸棒杆菌S9114 中分离纯化出依赖于NADPH的谷氨酸脱氢酶 (GOH NADPH )。经HPLC测定 ,该酶的分子量为 188ku ;经SDS -PAGE电泳测得该酶的亚基分子量为 3 2ku。提示该谷氨酸... 利用DEAE 纤维素离交柱层析、疏水柱层析和凝胶过滤层析等从谷氨酸棒杆菌S9114 中分离纯化出依赖于NADPH的谷氨酸脱氢酶 (GOH NADPH )。经HPLC测定 ,该酶的分子量为 188ku ;经SDS -PAGE电泳测得该酶的亚基分子量为 3 2ku。提示该谷氨酸脱氢酶由 6个亚基组成。该酶对NADPH具有高度专一性 ,在pH 7 5、3 7℃下 ,以α 酮戊二酸、NH4Cl和NADPH为底物时的米氏常数Km 分别为 9 2 2mmol/L、5 2 7mmol/L和 2 3 1× 10 -3mmol/L。最适反应pH为 7 5 ,最适反应温度为 42℃ ,并对热比较稳定。此外 ,KCl对GDH NADPH的活性具有激活作用。 展开更多
关键词 谷氨酸生产菌 谷氨酸脱氢酶 NADPH 谷氨酸棒杆菌 分离纯化 发酵生产
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达氏鳇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及双低菜粕添加对其表达的影响 被引量：3
12
作者 岳华梅 吴金平 +2 位作者 陈细华 阮瑞 李创举 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第4期35-41,共7页
谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)可通过逆催化谷氨酸脱氨参与氨基酸代谢,也可生产合成氨,参与氮代谢。实验克隆得到达氏鳇(Huso dauricus)谷氨酸脱氢酶基因(gdh)的开放阅读框序列。该序列全长为1 635 bp,编码544个氨基酸。... 谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)可通过逆催化谷氨酸脱氨参与氨基酸代谢,也可生产合成氨,参与氮代谢。实验克隆得到达氏鳇(Huso dauricus)谷氨酸脱氢酶基因(gdh)的开放阅读框序列。该序列全长为1 635 bp,编码544个氨基酸。氨基酸序列多重比对结果显示达氏鳇GDH与其它脊椎动物的序列一致性较高。进一步的系统进化树分析发现,达氏鳇GDH与两栖类、爬行类及哺乳类聚为一支。组织表达分析结果表明,达氏鳇gdh的mRNA在各组织中都有分布,并且在肠中转录水平最高。随后,采用荧光定量PCR分析了饲料中添加双低菜粕对达氏鳇蛋白质代谢相关基因(gdh、氨肽酶N apN、小肽转运载体pepT1)及应激反应相关的热休克蛋白(hsp 90)基因表达的影响。在肝脏中,不同饲料投喂组gdh和hsp90的转录水平没有显著差异。在肠中,菜粕组gdh及apN基因的转录水平显著高于基础饲料组;菜粕组pepT1基因的转录水平也高于基础饲料组,但是没有显著性差异。以上结果表明,植物蛋白原料菜粕添加可引起达氏鳇肠道中蛋白质代谢水平上升,而不引起鱼体的应激反应。 展开更多
关键词 达氏鳇(Huso dauricus) 鱼粉 菜粕 谷氨酸脱氢酶 基因表达
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谷氨酸脱氢酶(GDH)的性质 被引量：3
13
作者 刘兰英 刘宝琦 +6 位作者 曹亚光 杨平 廉红星 苏冬梅 孙立伟 徐坚平 李惟 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 1993年第3期119-121,共3页
考察了GDH催化的最适条件:40℃,pH8.5,磷酸盐缓冲液离子强度为0.25mol/L.酶活性稳定的pH范围为5.5～9.0.甘油对GDH的热变性有明显的保护作用.
关键词 谷氨酸脱氢酶 尿素氮 试剂盒
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花生谷氨酸脱氢酶基因AhGDH1的克隆与生物信息学分析 被引量：5
14
作者 陈湘瑜 徐日荣 +1 位作者 林栩松 唐兆秀 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第3期217-224,共8页
运用电子克隆技术获得花生1个谷氨酸脱氢酶基因cDNA序列,同时设计引物以花生cDNA为模板进行扩增,经测序得到证实,命名为AhGDH1,GenBank登录号:KT933119。采用生物信息学方法,对该基因编码蛋白从氨基酸组成、基本理化性质、亚细胞定位、... 运用电子克隆技术获得花生1个谷氨酸脱氢酶基因cDNA序列,同时设计引物以花生cDNA为模板进行扩增,经测序得到证实,命名为AhGDH1,GenBank登录号:KT933119。采用生物信息学方法,对该基因编码蛋白从氨基酸组成、基本理化性质、亚细胞定位、跨膜结构域、信号肽导肽、二级结构和三级结构等方面进行了预测和分析。结果表明:该基因cDNA序列长度为1 713bp,包含1个1 236bp开放阅读框,编码411个氨基酸;该编码蛋白含有谷氨酸脱氢酶两个典型的保守结构域。同源比对分析显示,该基因编码的氨基酸序列与鹰嘴豆等植物的谷氨酸脱氢酶基因具有高度的相似性,进一步确定该蛋白为谷氨酸脱氢酶。 展开更多
关键词 花生 谷氨酸脱氢酶基因 基因克隆 生物信息学分析
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谷氨酸生产菌T_(6-13)谷氨酸脱氢酶特性研究 被引量：6
15
作者 苏正定 郭勇 彭志英 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 1991年第4期83-88,共6页
本文对谷氨酸生产菌Te_(-13)谷氨酸脱氢酶的辅酶专一性、热稳定性、最适温度、最适pH、动力学参数和发酵过程中酶活力变化进行了研究。结果表明该酶属胞内酶,以NADP^+为专一性辅酶,脱氨反应的最适pH为9.5,酶的最适温度为35～40℃,酶的... 本文对谷氨酸生产菌Te_(-13)谷氨酸脱氢酶的辅酶专一性、热稳定性、最适温度、最适pH、动力学参数和发酵过程中酶活力变化进行了研究。结果表明该酶属胞内酶,以NADP^+为专一性辅酶,脱氨反应的最适pH为9.5,酶的最适温度为35～40℃,酶的热稳定性试验表明50℃保温10分钟,残留活力为50%,60℃保温10分钟残留活力为4%,70℃下则完全丧失活力,对L—谷氨酸和NADP^+动力学参数分别为2.13×10.2mol/L和6.58×10^(-5)mol/L,AMP、ADP对脱氨反应有激活作用,ATP无影响。 展开更多
关键词 谷氨酸脱氢酶 脱氢酶 棒状杆菌属
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恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶融合蛋白复性及纯化的研究 被引量：3
16
作者 李妍 宁云山 +2 位作者 郝文波 李莉 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第12期1273-1276,共4页
目的建立恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)融合蛋白质的复性和纯化方法。方法将含有恶性疟原虫GDH全长基因的融合蛋白表达质粒GDH/ pGEX-4T-1转化到宿主菌BL21,该GDH/GST融合蛋白在IPTG的诱导下获得高水平的表达,经SDS-PAGE分析表达产物主... 目的建立恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)融合蛋白质的复性和纯化方法。方法将含有恶性疟原虫GDH全长基因的融合蛋白表达质粒GDH/ pGEX-4T-1转化到宿主菌BL21,该GDH/GST融合蛋白在IPTG的诱导下获得高水平的表达,经SDS-PAGE分析表达产物主要为不溶性的包涵体。经超声酶解法、离心、变性剂/去污剂洗涤后获得包涵体。包涵体经8 mol/L尿素变性后分别采用分子筛柱层析、透析和稀释3种方法复性,并通过浊度分析、非还原SDS-PAGE等方法比较、优化复性方法和条件。复性后的GDH/GST融合蛋白经过不同柱层析方法进行纯化。结果经SDS-PAGE分析表明,GDH/GST融合蛋白表达量可占到菌体总蛋白的25%左右;浊度分析表明:稀释复性法优于其它两种方法,同时20 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA、pH8.5及GSSG/GSH=1∶10为该融合蛋白稀释复性的最佳条件,其复性回收率可达90%以上。复性产物采用二步阴离子交换层析可获得较好的纯化效果。结论通过稀释复性,二步阴离子交换层析可获得高纯度、具有天然空间构象的重组GDH/GST融合蛋白。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 谷氨酸脱氢酶 融合蛋白 复性 纯化 包涵体
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纳豆芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及其生物信息学分析 被引量：2
17
作者 屈玉玲 孟永宏 +3 位作者 张宸 任媛媛 董桂茹 陈卫锋 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期82-86,共5页
克隆表达Bacillus subtilis natto HSF 1410谷氨酸脱氢酶(GDH),测定其酶活性,并阐述其体内功能。将gdhA基因克隆入pET28a质粒在E.coli BL21(DE3)中表达,用生物信息学方法探究其蛋白结构、结构域特点。经测定Bacillus subtilis natto GD... 克隆表达Bacillus subtilis natto HSF 1410谷氨酸脱氢酶(GDH),测定其酶活性,并阐述其体内功能。将gdhA基因克隆入pET28a质粒在E.coli BL21(DE3)中表达,用生物信息学方法探究其蛋白结构、结构域特点。经测定Bacillus subtilis natto GDH同时具有NADP^+和NAD^+依赖活性,酶活比活力分别为3.140U/mg蛋白和0.251 4U/mg蛋白。生物信息学分析结果表明gdhA基因包含一个长度为1 275bp的开放阅读框,编码424个氨基酸,蛋白分子量为47.05kDa,理论等电点为5.58,不含跨膜区域,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。其三级结构表明,该蛋白在45—174位氨基酸残基形成二聚化结构域,191—424位氨基酸残基形成NAD(P)结合位域。B.subtilis natto HSF 1410与E.coli中gdhA的二聚化结构域、NAD(P)结合位域的氨基酸相似度分别为29.23%、29.27%,显著高于B.subtilis 168中gdhA的氨基酸相似度;与B.subtilis 168中gdhA蛋白空间结构相比,B.subtilis natto HSF 1410与E.coli中gdhA在空间结构上更为相似,在体内主要负责促α-酮戊二酸转化成谷氨酸。 展开更多
关键词 纳豆芽孢杆菌 谷氨酸脱氢酶 CDNA 克隆 生物信息学分析
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大肠杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆及功能分析 被引量：3
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作者 李文滨 周失 李永光 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期53-58,共6页
谷氨酸脱氢酶是生物体内最主要的氧化脱氨基酶类,为进一步研究其功能,将大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中克隆得到的谷氨酸脱氢酶基因gdhA插入pCAMBIA3301质粒载体上,替换bar基因,构建植物表达载体pCAMBIA3301-gdhA。用该质粒转化... 谷氨酸脱氢酶是生物体内最主要的氧化脱氨基酶类,为进一步研究其功能,将大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中克隆得到的谷氨酸脱氢酶基因gdhA插入pCAMBIA3301质粒载体上,替换bar基因,构建植物表达载体pCAMBIA3301-gdhA。用该质粒转化烟草(Nicotiana tobaccum)havana425,成功得到转基因植株。对盆栽烟草干旱胁迫,同时取T1代转基因后代叶片使其自然失水7 h。结果表明,与野生型相比,转基因烟草表现出较强的抗旱性,叶片保水力较强。草铵膦试验表明,gdhA基因可显著提高烟草抗除草剂性能。 展开更多
关键词 谷氨酸脱氢酶基因 烟草 抗旱 草铵膦
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几种肝胆疾病血清中谷氨酸脱氢酶和AST活性变化的研究 被引量：5
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作者 高玲 孙艳虹 王勇强 《实用医学杂志》 CAS 2004年第2期201-202,共2页
目的 :测定不同肝胆疾病患者血清中谷氨酶脱氢酶 (GLDH )和AST的活性变化 ,比较两者对不同肝胆疾病的诊断价值。方法 :收集 43例健康者和 69例不同肝胆疾病患者的血清标本 ,按临床诊断分为 5组 ,同时测定GLDH和AST的活性 ,用SPSS统计软... 目的 :测定不同肝胆疾病患者血清中谷氨酶脱氢酶 (GLDH )和AST的活性变化 ,比较两者对不同肝胆疾病的诊断价值。方法 :收集 43例健康者和 69例不同肝胆疾病患者的血清标本 ,按临床诊断分为 5组 ,同时测定GLDH和AST的活性 ,用SPSS统计软件进行统计分析。结果 :不同肝胆疾病患者血清中AST和GLDH活性都明显升高 ,与健康对照组相比差异均有非常显著性 (P <0 0 1) ;同一疾病组中AST和GLDH活性变化程度也不一致 ,GLDH的平均升高倍数均高于AST ;对二指标进行相关性分析显示 :肝癌、胆结石患者血清中两酶的变化有非常明显相关性 (P <0 0 1) ,而肝硬化及其他肝胆疾病患者血清中两酶的变化无相关性 (P >0 0 5 )。结论 :在肝细胞严重损害累及线粒体的疾病中 ,GLDH的升高幅度往往比AST高 ,特异性较AST好 。 展开更多
关键词 肝胆疾病 血清 谷氨酸脱氢酶 AST 活性变化
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恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定 被引量：2
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作者 李林海 李明 +2 位作者 吴英松 王萍 田泽维 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第10期883-887,共5页
目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制... 目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,并用琼脂双向扩散法检测效价,ELISA、Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果获到了重组表达的抗原蛋白,表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1∶16。结论恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 疟原虫 恶性 谷氨酸脱氢酶 免疫活性
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