NaCl对水稻谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的胁迫作用 被引量：36

1

作者 林清华 李常健 +3 位作者 彭进 张楚富 Peng Shaobing Bennett John 《武汉植物学研究》 CSCD 2000年第3期206-210,共5页

在 Na Cl的胁迫下 ,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的 Na Cl浓度的升高而降低 ;游离 NH+ 4 在叶中积累 ,在根中未见明显变化。与根相比 ,叶对 Na Cl的胁迫作用更为敏感。叶的 NADH- GOGAT和 NADH- GDH活性... 在 Na Cl的胁迫下 ,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的 Na Cl浓度的升高而降低 ;游离 NH+ 4 在叶中积累 ,在根中未见明显变化。与根相比 ,叶对 Na Cl的胁迫作用更为敏感。叶的 NADH- GOGAT和 NADH- GDH活性在 Na Cl胁迫下降低的程度明显大于根。无论是否有 Na Cl存在 ,根的 NADH- GDH活性明显高于叶。 GS/GDH比值分析提示 ,在对照下 ,根中的 NH+ 4 的同化以 GS- GOGAT途径为主 ;而在 Na Cl胁迫下 ,GS- GOGAT途径明显削弱 ,GDH途径在 NH+ 4 的同化中的作用明显加强。无论是否有 Na Cl的存在 ,叶的 NH+ 4 同化途径都是以 GS- GOGAT为主。 展开更多

关键词 谷氨酸合酶 谷氨酸脱氢酶 水稻 NaCl胁迫作用

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缺失ATP合酶和插入VHb基因对钝齿棒杆菌谷氨酸产量的影响 被引量：2

2

作者 郑方亮 于亮 +2 位作者 牟晓丛 刘鹏 刘宏生 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期131-136,共6页

为了提高钝齿棒杆菌生产谷氨酸的产量,以谷氨酸生产菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)T6-13为出发菌株,利用同源重组技术使其缺失ATP合酶基因(atp)并进一步插入透明颤菌血红蛋白基因(VHb),得到两株重组菌株T6-13-Δatp和T6-13-Δa... 为了提高钝齿棒杆菌生产谷氨酸的产量,以谷氨酸生产菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)T6-13为出发菌株,利用同源重组技术使其缺失ATP合酶基因(atp)并进一步插入透明颤菌血红蛋白基因(VHb),得到两株重组菌株T6-13-Δatp和T6-13-Δatp-tac-VHb,通过检测重组菌株谷氨酸产量及生长情况可以看出,在发酵32 h后,atp基因缺失菌株较出发菌株谷氨酸产出累积量高27.76%,但atp基因缺失导致菌体生长缓慢且无法到达出发菌株稳定期浓度,而插入VHb基因的atp基因缺失菌株的谷氨酸产出累积量较出发菌株高36.91%,且菌体的生长速率及稳定期浓度与出发菌株基本一致。 展开更多

关键词 钝齿棒杆菌 谷氨酸 ATP合酶 透明颤菌血红蛋白

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茶树谷氨酸合酶的提取与活性测定 被引量：10

3

作者 王新超 杨亚军 陈亮 《中国茶叶》 2004年第5期10-11,共2页

关键词 茶树 谷氨酸合酶 提取 氮素 同化

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钙调素拮抗剂E6对大鼠脑一氧化氮合酶活性和突触体谷氨酸释放的影响

4

作者 丁启龙 刘国卿 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期434-437,共4页

目的 探讨钙调素拮抗剂E6的抗脑缺血作用机制。方法 用[3H]-L-Glu（glutamic　acid,Glu）标记大鼠脑突触体,测定突触体的Gln释放量和用一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）试剂盒测定成年大鼠脑匀浆上清中NOS活性。结果　E6促进... 目的 探讨钙调素拮抗剂E6的抗脑缺血作用机制。方法 用[3H]-L-Glu（glutamic　acid,Glu）标记大鼠脑突触体,测定突触体的Gln释放量和用一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）试剂盒测定成年大鼠脑匀浆上清中NOS活性。结果　E6促进Glu释放（与对照组比,10-5mol·L-1组增加81.0％）,但对KCl（50 mmol·L-1）引起的Glu释放有抑制作用,10-5mol·L-1E6的抑制率为23.2％。E6浓度依赖性地抑制NOS活性。钙调素（calmodulin,CaM）（30μg·ml-1）可逆转E6的抑制作用（10-6mol·L-1E6的抑制率为13.7％）,N-硝基-精氨酸（（N-nitro-arginine,L-NNA）（10μmol·L-1）可加强E6的抑命作用（10-6mol·L-1的抑制率为76.5％）。结论 E6是与CaM结合后发挥抑制 NOS活性效应的,E6对Glu 释放的影响可能与其对NOS活性及其对神经细胞内Ca2+影响有关。 展开更多

关键词 钙调素拮抗剂 E6 大鼠 一氧化氮合酶 突触体 谷氨酸 脑缺血

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神经生长因子在培养的大鼠脑皮质神经细胞抑制谷氨酸引起的一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮释放(英文)

5

作者 吴俊芳 王平 张均田 《中国临床药理学与治疗学杂志》 CSCD 1998年第4期241-245,共5页

目的研究神经生长因子(NGF)对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮(NO)释放和原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达的影响。方法测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用。用荧光分析法测定细胞上清液NO含量 ,用Northernblot杂交法观察cNO... 目的研究神经生长因子(NGF)对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮(NO)释放和原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达的影响。方法测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用。用荧光分析法测定细胞上清液NO含量 ,用Northernblot杂交法观察cNOSmRNA表达。结果谷氨酸(0.5～2.0mmol/L)引起神经元大量死亡 ,NO过量释放。NOS抑制剂L_NAME(100μmol/L)及NGF(100μg/L)显著抑制谷氨酸引起NO释放及细胞死亡。NGF(50,100μg/L)显著降低谷氨酸引起的cNOSmRNA的高表达。结论NO介导了谷氨酸对皮质神经元的毒性 ,NGF通过抑制cNOS活性 。 展开更多

关键词 大鼠 神经细胞 一氧化氮合酶 基因表达 一氧化氮释放 神经生长因子 大脑皮质 细胞培养 谷氨酸

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谷氨酸合酶在灵芝中生物学功能的研究 被引量：6

6

作者 朱静 岳思宁 +3 位作者 陈琛 宋书琪 连玲丹 赵明文 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1073-1079,共7页

[目的]通过对谷氨酸合酶(glutamate synthase,GOGAT)的基因序列进行预测和分析,构建谷氨酸合酶基因的沉默转化子,验证谷氨酸合酶在灵芝吸收、利用氮源、生长及次级代谢中的作用。[方法]利用真菌中已报道的谷氨酸合酶基因,在灵芝基因组... [目的]通过对谷氨酸合酶(glutamate synthase,GOGAT)的基因序列进行预测和分析,构建谷氨酸合酶基因的沉默转化子,验证谷氨酸合酶在灵芝吸收、利用氮源、生长及次级代谢中的作用。[方法]利用真菌中已报道的谷氨酸合酶基因,在灵芝基因组库中分析比对得到灵芝中可能的谷氨酸合酶基因。通过构建进化树和结构域分析及酶活性测定,确定灵芝谷氨酸合酶序列。随后利用RNA干扰技术,将灵芝的GOGAT基因进行沉默,研究GOGAT对灵芝生长及次级代谢的影响。[结果]获得灵芝谷氨酸合酶序列,该酶具有保守的谷氨酸合酶结构域,并且在进化上高度保守。在4种氮源(谷氨酰胺、铵盐、脯氨酸和硝酸盐)条件下检测谷氨酸合酶活性和基因转录水平,野生菌株中的GOGAT比酶活和转录水平在不同氮源条件下没有显著变化。通过RNA干扰方法,获得沉默效率分别为(77.0±1.9)%和(77.5±2.0)%的GOGAT沉默菌株2株。平板试验表明,将GOGAT沉默后,灵芝菌丝的生长受到一定程度的抑制。在硝酸盐培养条件下,相比于野生菌株,GOGAT沉默菌株基本停止生长;而在脯氨酸存在条件下,2株沉默菌株的生长直径分别降低(16.0±1.9)%和(21.0±1.3)%。进一步检测灵芝三萜含量发现,当使用铵盐或脯氨酸作为唯一氮源培养时,相比于对照菌株,GOGAT沉默菌株中的灵芝三萜含量分别降低(32.1±4.5)%和(11.0±1.1)%;而以谷氨酰胺和硝酸盐培养时,各菌株中的灵芝三萜含量没有显著变化。[结论]本研究获得了灵芝中合成谷氨酸的重要酶基因GOGAT,发现其对灵芝的生长及次级代谢十分重要。 展开更多

关键词 灵芝 谷氨酸合酶 基因沉默 氮源 菌丝生长 灵芝三萜合成

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敲除aceA和gogat及过表达gltA对谷氨酸棒状杆菌GKGD合成α-酮戊二酸的影响 被引量：3

7

作者 薛宁 李智祥 +7 位作者 战俊杰 赵磊 梁云龙 冯甲 刘涛 徐庆阳 张成林 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1-7,共7页

α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)在生命活动中具有重要的作用,被广泛应用于食品、医药等领域。以α-KG生产菌谷氨酸棒状杆菌GKGD为出发菌株,敲除其异柠檬酸裂解酶编码基因ace A以增加异柠檬酸供应,获得GKGD-1,摇瓶发酵条件下其α-K... α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)在生命活动中具有重要的作用,被广泛应用于食品、医药等领域。以α-KG生产菌谷氨酸棒状杆菌GKGD为出发菌株,敲除其异柠檬酸裂解酶编码基因ace A以增加异柠檬酸供应,获得GKGD-1,摇瓶发酵条件下其α-KG产量和转化率分别提高14.72%和9.76%;敲除谷氨酸合酶编码基因gogat以降低L-谷氨酸生成量,获得GKGD-2,其α-KG产量和转化率分别提高7.39%和5.43%,L-谷氨酸生成量降低52.87%;过表达柠檬酸合酶编码基因glt A以进一步增加前体物供应,获得GKGD-3,其α-KG产量提高35.9%;于7.5 L发酵罐经30 h发酵,GKGD-3α-KG产量达49.5 g/L,较出发菌株提高36.4%,L-谷氨酸生成量降低50%。敲除ace A和gogat并过表达glt A可显著提高α-KG产量并降低L-谷氨酸生成量。 展开更多

关键词 Α-酮戊二酸 三一谷氨酸 谷氨酸合酶 异柠檬酸裂解酶 柠檬酸合酶

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视神经挫伤对大鼠视网膜谷氨酰胺合酶和兴奋性氨基酸转运蛋白-2表达的影响 被引量：3

8

作者 黄正如 陈海英 +3 位作者 徐明 陆炯 叶凯 管怀进 《眼科新进展》 CAS 2008年第9期657-660,共4页

目的通过谷氨酰胺合酶(glutamine synthetase,GS)、兴奋性氨基酸转运蛋白-2(GLT-1)表达的改变,研究视神经挫伤后视网膜谷氨酸代谢变化的机制。方法建立大鼠右眼视神经挫伤模型48只。术后1d、7d、14d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷... 目的通过谷氨酰胺合酶(glutamine synthetase,GS)、兴奋性氨基酸转运蛋白-2(GLT-1)表达的改变,研究视神经挫伤后视网膜谷氨酸代谢变化的机制。方法建立大鼠右眼视神经挫伤模型48只。术后1d、7d、14d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷氨酸浓度;通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GS、GLT-1的表达。结果视神经挫伤后1d、7d、14d,大鼠玻璃体谷氨酸浓度升高,与对侧眼比较差异具有统计学意义(P=0.0011、P=0.0000、P=0.0000)。视神经挫伤后1d,GS高表达(P=0.0054);挫伤后7d,GS表达与对侧眼比较差异无统计学意义(P=0.1379);挫伤后14d,GS低表达(P=0.0333)。视神经挫伤后1d、7d,GLT-1的表达与对照组的差异无统计学意义(P=0.1985、0.6537);但挫伤后14d,GLT-1低表达(P=0.0403)。结论视神经挫伤后玻璃体谷氨酸浓度升高,与视网膜GS、GLT-1的表达降低有关。 展开更多

关键词 视神经挫伤 谷氨酸 谷氨酰胺合酶 兴奋性氨基酸转运蛋白-2

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理性代谢工程改造促进谷氨酸棒杆菌高效合成L-谷氨酰胺 被引量：4

9

作者 乔郅钠 吕青兰 +3 位作者 李翔飞 王晴 徐美娟 饶志明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期65-74,共10页

L-谷氨酰胺(L-glutamine,L-Gln)是人体液中含量最丰富的一种半必需氨基酸,具有多种营养和药理功能,被广泛应用于医药、食品添加剂、营养保健品、饲料等领域。目前,微生物发酵法是生产L-Gln的主要方法,发酵产酸效率低、副产物多、菌种性... L-谷氨酰胺(L-glutamine,L-Gln)是人体液中含量最丰富的一种半必需氨基酸,具有多种营养和药理功能,被广泛应用于医药、食品添加剂、营养保健品、饲料等领域。目前,微生物发酵法是生产L-Gln的主要方法,发酵产酸效率低、副产物多、菌种性能欠缺等问题严重限制了其工业化应用。为解决这一问题,作者以实验室前期构建的L-Gln生产菌株CGQ03为出发菌株,通过强化谷氨酸脱氢酶表达及辅因子NADPH供应促进前体L-谷氨酸合成、增强辅因子ATP胞内含量、过表达溶氧相关蛋白VHb提高细胞携氧能力、增强关键酶谷氨酰胺合成酶催化活性及发酵工艺优化等策略提高了L-Gln产量。最终的基因工程菌CGQ08/pDXW10-glnASc-gdhCg在5 L发酵罐上补料分批发酵66 h,L-Gln的产量最高达(94.5±1.8)g/L,糖酸转化率为34.8%,生产强度为1.43 g/(L·h)。本研究为L-Gln及其相关化合物的工业化生产提供了借鉴。 展开更多

关键词 L-谷氨酰胺 谷氨酸棒杆菌 谷氨酰胺合酶 NADPH供应 ATP供应 发酵工艺优化

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非对称性二甲基精氨酸保护PC12细胞拮抗谷氨酸兴奋性毒性的损伤作用 被引量：6

10

作者 唐小卿 赵静 +6 位作者 杨春涛 申新田 范黎黎 郭瑞鲜 杨战利 陈培熹 冯鉴强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期248-253,共6页

目的:探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂-非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对谷氨酸(Glu)兴奋性毒性损伤PC12细胞的影响及其机制。方法:用不同浓度的谷氨酸处理PC12细胞,建立谷氨酸兴奋性神经毒性损伤细胞的实验模型;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色... 目的:探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂-非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对谷氨酸(Glu)兴奋性毒性损伤PC12细胞的影响及其机制。方法:用不同浓度的谷氨酸处理PC12细胞,建立谷氨酸兴奋性神经毒性损伤细胞的实验模型;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)释放试验评价细胞的损伤程度;双氢罗丹明123(DHR)染色后流式细胞仪(FCM)检测细胞内活性氧(ROS)水平;应用试剂盒及分光光度计测定NOS活性和NO水平。结果:谷氨酸(1-6mmol/L)处理PC12细胞24h,可呈剂量依赖性地降低PC12细胞的存活率;在谷氨酸作用PC12细胞前30min给予ADMA,可明显地抑制谷氨酸引起的细胞存活率降低及LDH释放增加,减少谷氨酸引起的细胞内ROS堆积,抑制谷氨酸过度激活NOS和增加NO的生成。结论:ADMA能显著地减弱谷氨酸对PC12细胞的兴奋性毒性损伤作用;其作用机制可能与抑制NOS活性,减少NO生成,进而减轻细胞内ROS的堆积有关。 展开更多

关键词 非对称性二甲基精氨酸 谷氨酸 活性氧 一氧化氮合酶 兴奋性毒性 PC12细胞

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糖尿病鼠脑中β-淀粉样蛋白和谷氨酸转运体的改变及其机制 被引量：2

11

作者 曲忠森 田青 +4 位作者 周新文 王小川 王群 张蕲 王建枝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期708-711,共4页

目的探讨糖尿病大鼠皮层神经元β淀粉样蛋白(Aβ)以及谷氨酸转运体的功能变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,并检测正常对照组、糖尿病(DM)模型组、DM+NaCl组、DM+LiCl组糖原合酶激酶-3(GSK-3)的活性、谷氨酸转运... 目的探讨糖尿病大鼠皮层神经元β淀粉样蛋白(Aβ)以及谷氨酸转运体的功能变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,并检测正常对照组、糖尿病(DM)模型组、DM+NaCl组、DM+LiCl组糖原合酶激酶-3(GSK-3)的活性、谷氨酸转运体功能及Aβ水平。结果DM组与对照组相比,GSK-3活性(P<0.05)和Aβ40生成(P<0.01)显著增加,谷氨酸转运体的功能显著减弱(P<0.05);GSK-3的抑制剂LiCl能显著降低糖尿病鼠Aβ40水平(P<0.01)和改善谷氨酸转运体的功能(P<0.05)。结论糖尿病大鼠皮层Aβ40生成增加、谷氨酸转运体的功能降低、GSK-3升高在这一病理改变过程中起着重要作用。 展开更多

关键词 糖尿病 氯化锂 糖原合酶激酶-3 Β-淀粉样蛋白 谷氨酸转运体

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诱导型一氧化氮信号通路在代谢型谷氨酸受体2/3介导的脑缺血耐受中的作用(英文) 被引量：3

12

作者 冯荣芳 胡玉燕 +3 位作者 李文斌 羡晓辉 刘惠卿 赵红岗 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期268-274,共7页

目的:阐明诱导型一氧化氮(NO)信号通路在代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR2/3)参与海马脑缺血预处理(CIP)保护机制中的作用。方法:本实验采用免疫组化,观察脑室应用mGluR2/3阻断剂α-甲基-(4 -四唑基-苯)甘氨酸(MTPG)对CIP诱导的iNOS表达的影... 目的:阐明诱导型一氧化氮(NO)信号通路在代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR2/3)参与海马脑缺血预处理(CIP)保护机制中的作用。方法:本实验采用免疫组化,观察脑室应用mGluR2/3阻断剂α-甲基-(4 -四唑基-苯)甘氨酸(MTPG)对CIP诱导的iNOS表达的影响。36只永久凝闭椎动脉的SD大鼠随机分为sham、CIP、损伤性缺血、CIP +损伤性缺血、MTPG+CIP和MTPG+CIP +损伤性缺血6组,每组6只。各组大鼠均在术后或末次缺血再灌后,常温饲养5 d取材观察。结果:Sham组胞浆有较弱的iNOS表达。CIP组和CIP +损伤性缺血组NOS表达与sham组相比明显增加。在CIP前20 min脑室注射mGluR2/3阻断剂MTPG,可阻断CIP引起的iNOS表达增加,但对神经元的形态无影响。而MTPG+CIP +损伤性缺血组中,iNOS的表达较MTPG+CIP组明显增加,同时锥体神经元的轮廓、形态出现明显的损伤性改变。结论:CIP能够引起一定程度的iNOS表达增加,而MTPG能阻断CIP引起的iNOS的表达增加,同时又能阻断CIP抗后续损伤性缺血的作用,提示iNOS信号通路在mGluR2/3介导的脑缺血耐受过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 脑缺血预处理 一氧化氮 一氧化氮合酶 受体 谷氨酸 d一甲基一(4一四唑基一苯)甘氨酸 大鼠

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复方灯盏花滴丸对海马神经元一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

13

作者 王丽君 宛蕾 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第4期355-357,共3页

目的研究复方灯盏花滴丸(FDD)对谷氨酸致大鼠原代海马神经元的NO和一氧化氮合酶的影响。方法取SD大鼠32只,每8只分别用生理盐水、尼莫地平、FDD高、低剂量灌胃,85h后,取每只大鼠股动脉血,制成5%的含药血清。另取新生24h SD乳鼠大脑原代... 目的研究复方灯盏花滴丸(FDD)对谷氨酸致大鼠原代海马神经元的NO和一氧化氮合酶的影响。方法取SD大鼠32只,每8只分别用生理盐水、尼莫地平、FDD高、低剂量灌胃,85h后,取每只大鼠股动脉血,制成5%的含药血清。另取新生24h SD乳鼠大脑原代培养海马神经元并鉴定后,随机分为对照组、尼莫地平组、FDD高、低剂量组和模型组,前4组分别加入上述配制对应的药物血清,模型组不加含药血清。以谷氨酸制成损伤模型。采用MTT法测定细胞存活率,酶法检测细胞释放NO量,细胞内总一氧化氮合酶(tNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性。结果与对照组比较,模型组细胞存活率下降,NO、tNOS和iNOS活性增加(P<0.01),与模型组比较,FDD高、低剂量组均能明显增加细胞存活率、减少NO释放、降低tNOS活性和iNOS活性(P<0.05,P<0.01)。结论 FDD对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元损伤有保护作用,其作用机制可能与降低一氧化氮合酶的活性、尤其iNOS活性及减少NO释放有关。 展开更多

关键词 海马 一氧化氮 一氧化氯合酶 谷氨酸 复方灯盏花滴丸

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不同来源S-腺苷甲硫氨酸合酶在大肠杆菌中的表达及催化应用 被引量：1

14

作者 Hero Nmeri Godspower 乔郅钠 +1 位作者 徐美娟 饶志明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期26-33,共8页

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是一种重要的代谢中间体,对机体代谢活动的正常运行起重要作用,它是由底物L-甲硫氨酸和ATP在SAM合酶催化下生成的,目前主要应用于医药行业。该研究首先以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus和谷氨酸... S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是一种重要的代谢中间体,对机体代谢活动的正常运行起重要作用,它是由底物L-甲硫氨酸和ATP在SAM合酶催化下生成的,目前主要应用于医药行业。该研究首先以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus和谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum基因组为模板扩增出SAM合酶编码基因BcmetK和CgmetK,以pETDueT1质粒为载体,以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为底盘细胞,构建了SAM合成菌株E.coli BL21/pETDuet1-BcmetK和E.coli BL21/pETDuet1-CgmetK。其次,针对SAM合成菌株全细胞催化合成体系条件进行了优化,重组大肠杆菌E.coli BL21/pETDuet1-BcmetK在最优条件[L-甲硫氨酸浓度50 mmol/L、ATP浓度50 mmol/L、1.2%(体积分数)的OD_(600)值约9.0的细胞悬浮液、600 mmol/L pTSoNa、50 mmol/L MgSO_(4)、100 mmol/L K_(2)SO_(4)、45℃、pH 8.0]下,连续转化5 h,获得了464 mg/L的SAM。重组大肠杆菌E.coli BL21/pETDuet1-CgmetK在最优条件[L-甲硫氨酸浓度50 mmol/L、ATP浓度40 mmol/L、0.8%(体积分数)的OD_(600)值约9.0的细胞悬浮液、800 mmol/L pTSoNa、50 mmol/L MgSO 4、100 mmol/L K_(2)SO 4、45℃、pH 8.5]下,连续转化5 h,获得了528 mg/L的SAM,可见,谷氨酸棒杆菌来源的SAM合酶催化能力优于蜡状芽孢杆菌来源的,更有利于SAM的合成。该研究成功构建了SAM合成菌株,虽然产量水平不高,但为SAM的可持续生物合成提供了重要借鉴。 展开更多

关键词 蜡状芽孢杆菌 谷氨酸棒杆菌 大肠杆菌 S-腺苷甲硫氨酸合酶 S-腺苷甲硫氨酸 全细胞催化

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不同形态氮素对专用型小麦花后氮代谢关键酶活性及籽粒蛋白质含量的影响 被引量：178

15

作者 王小纯 熊淑萍 +2 位作者 马新明 张娟娟 王志强 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期802-807,共6页

采用盆栽方法研究了氮素形态对不同专用型小麦开花后氮素同化关键酶活性及籽粒蛋白质含量的影响。结果表明:不同专用型小麦氮素同化关键酶硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸合酶对氮素形态的反应不同。强筋小麦豫麦34施用酰胺态氮对... 采用盆栽方法研究了氮素形态对不同专用型小麦开花后氮素同化关键酶活性及籽粒蛋白质含量的影响。结果表明:不同专用型小麦氮素同化关键酶硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸合酶对氮素形态的反应不同。强筋小麦豫麦34施用酰胺态氮对旗叶硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性、籽粒谷氨酰胺合成酶和谷氨酸合酶活性具有明显的促进作用,最终籽粒蛋白质含量较高;中筋小麦豫麦4 9在施用铵态氮时,3种氮素同化关键酶活性均有较大增强,籽粒蛋白质含量最高;弱筋小麦豫麦5 0硝酸还原酶活性以铵态氮处理最高,而籽粒和旗叶谷氨酰胺合成酶和谷氨酸合酶活性在酰胺态氮处理下明显增强,酰胺态氮对籽粒中蛋白质含量的增加具有明显的促进作用。相关性分析表明,籽粒蛋白质含量与旗叶GS活性和籽粒GOGAT活性呈显著或极显著正相关,与旗叶NR活性和GS活性。 展开更多

关键词 氮素形态 专用小麦 硝酸还原酶 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸合酶 蛋白质含量

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茶树叶绿素合成相关基因克隆及在白叶1号不同白化阶段的表达分析 被引量：19

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作者 马春雷 姚明哲 +3 位作者 王新超 金基强 马建强 陈亮 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期240-250,共11页

高等植物叶绿素的生物合成对其正常光合作用起关键作用。本文根据前期芯片杂交结果,采用RT-PCR和RACE技术克隆了3个茶树叶绿素合成相关基因,分别为谷氨酸-t RNA还原酶基因(Cs Glu TR)、叶绿素合酶基因(Cs Chl S)、叶绿素酸醋氧化酶基因(... 高等植物叶绿素的生物合成对其正常光合作用起关键作用。本文根据前期芯片杂交结果,采用RT-PCR和RACE技术克隆了3个茶树叶绿素合成相关基因,分别为谷氨酸-t RNA还原酶基因(Cs Glu TR)、叶绿素合酶基因(Cs Chl S)、叶绿素酸醋氧化酶基因(Cs CAO),对应的Gen Bank的登录号分别为HQ660371、HQ660370、HQ660369。序列分析表明,Cs Glu TR基因全长2165 bp,开放阅读框长1665 bp,编码554个氨基酸,推测的蛋白分子量约为60.6k D,理论等电点为8.78;Cs Chl S基因全长1463 bp,其中开放阅读框长1125 bp,编码374个氨基酸,推测的蛋白分子量约为40.5 k D,理论等电点为8.58;Cs CAO基因全长2146 bp,其中开放阅读框长1611 bp,编码536个氨基酸,推测的蛋白分子量约为60.8 k D,理论等电点为8.03。比对分析表明,3个基因编码的氨基酸序列与其他植物中同源基因的相似性均在70%以上。利用荧光定量PCR技术检测3个基因在不同白化阶段的表达,表明Cs Chl S和Cs CAO基因具有明显的表达协同性,它们在叶片中的表达量与叶片的颜色变化高度同步;而Cs Glu TR在白化叶片和正常叶片中的表达差异相对较小,同时在新生芽叶转绿过程中最先恢复正常表达水平。说明在白化叶片中,叶绿素的合成机制受到较大影响,叶绿素合成受阻导致的叶片内色素类物质含量降低或消失是叶片白化的直接原因。 展开更多

关键词 茶树 谷氨酸-t RNA还原酶 叶绿素合酶 叶绿素酸醋氧化酶 基因克隆 表达分析

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盐碱胁迫对甜菜氮代谢相关酶活性及产量和含糖率的影响 被引量：27

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作者 刘洋 李彩凤 +6 位作者 洪鑫 徐颖 郭剑 陈明 于洋 王玉波 马凤鸣 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期397-404,共8页

利用KWS0143和ACERO为试验材料,比较盐碱(碳酸钠)胁迫对2个甜菜品种氮代谢关键酶活性及产量和含糖率的影响,旨在进一步明确甜菜对盐碱胁迫的适应性。通过桶栽试验,设5个处理,分别是碳酸钠占土壤质量百分比0、0.5%、1%、1.5%和2%,对应的... 利用KWS0143和ACERO为试验材料,比较盐碱(碳酸钠)胁迫对2个甜菜品种氮代谢关键酶活性及产量和含糖率的影响,旨在进一步明确甜菜对盐碱胁迫的适应性。通过桶栽试验,设5个处理,分别是碳酸钠占土壤质量百分比0、0.5%、1%、1.5%和2%,对应的土壤溶液p H值分别为7.14、8.92、9.45、10.19、10.56。研究盐碱胁迫对甜菜叶片硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸合酶(GOGAT)活性及产量和含糖率的影响。结果表明,盐碱胁迫使甜菜叶片的硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)及谷氨酸合酶(GOGAT)活性均下降,且随着盐碱胁迫程度的增大,下降幅度增大。两品种比较,ACERO的酶活性高于KWS0143,且ACREO的块根产量和含糖率下降的幅度低于KWS0143,ACREO比KWS0143具有较强的耐盐碱能力。该研究为进一步提高盐碱胁迫下甜菜对氮素的吸收利用效率理论依据。 展开更多

关键词 甜菜 盐碱胁迫 硝酸还原酶 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸合酶

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壳聚糖对不结球白菜叶片氮代谢关键酶的调节作用 被引量：9

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作者 陈惠萍 徐朗莱 《热带作物学报》 CSCD 2003年第4期62-66,共5页

研究了壳聚糖(chitosan)对氮代谢关键酶[谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸合酶(GOGAT)和谷氨酸脱氢酶(GDH)]和可溶性蛋白质含量的影响。结果表明:0.8mg·mL^(-1)壳聚糖溶液喷洒不结球白菜叶片后,GS对NH_4^+的K_M值增大,而GDH对NH_4^+的K_... 研究了壳聚糖(chitosan)对氮代谢关键酶[谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸合酶(GOGAT)和谷氨酸脱氢酶(GDH)]和可溶性蛋白质含量的影响。结果表明:0.8mg·mL^(-1)壳聚糖溶液喷洒不结球白菜叶片后,GS对NH_4^+的K_M值增大,而GDH对NH_4^+的K_M值变小;在酶活性检测中,GS比活性受到了抑制,而GDH比活性则被提高,GOGAT比活性则表现为先上升后下降;削弱了不结球白菜叶片中的氨同化过程的GS-GOGAT途径,加强了GDH途径;同时,提高了叶片可溶性蛋白含量。 展开更多

关键词 壳聚糖 氮代谢关键酶 可溶性蛋白质 不结球白菜叶片 酶活性 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸合酶 谷氨酸脱氢酶 GS GoGAT GDH

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氮代谢相关酶的研究进展 被引量：23

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作者 徐洪超 商靖 +2 位作者 刘铭荟 张飞 李玥莹 《安徽农业科学》 CAS 2022年第4期17-20,共4页

氮代谢是植物体内的基本生理代谢过程之一,包括氮素同化、积累和蛋白质合成等过程,与植物的生长发育、产量和品质的联系非常密切。氮代谢的生理过程在酶的催化下完成,与氮代谢的生理过程密切相关的酶有:硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶、转... 氮代谢是植物体内的基本生理代谢过程之一,包括氮素同化、积累和蛋白质合成等过程,与植物的生长发育、产量和品质的联系非常密切。氮代谢的生理过程在酶的催化下完成,与氮代谢的生理过程密切相关的酶有:硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶、转氨酶(谷氨酸草酰乙酸转氨酶、谷氨酸丙酮酸转氨酶)、谷氨酸合酶、谷氨酸脱氢酶等关键酶。这5种酶在植物氮代谢过程中具有重要的作用,简要介绍这几种酶的基本结构与特性、对作物生长发育的调控等,为进一步探究氮代谢研究机制提供有益的参考。 展开更多

关键词 硝酸还原酶 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸合酶 转氨酶 谷氨酸脱氢酶

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gltC基因缺失对单增李斯特菌10403S抗酸应激能力的影响 被引量：2

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作者 杨雨婷 韩旭 +4 位作者 肖金华 方小伟 梁雄燕 刘晶 方春 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3077-3085,共9页

【目的】构建单增李斯特菌gltC基因缺失株,并阐明gltC基因对单增李斯特菌抗酸应激能力的影响。【方法】通过对单增李斯特菌参考菌株10403S进行添加或不添加外源性谷氨酸在致死性酸性条件的抗酸应激试验,测定谷氨酸对菌株抗酸应激存活能... 【目的】构建单增李斯特菌gltC基因缺失株,并阐明gltC基因对单增李斯特菌抗酸应激能力的影响。【方法】通过对单增李斯特菌参考菌株10403S进行添加或不添加外源性谷氨酸在致死性酸性条件的抗酸应激试验,测定谷氨酸对菌株抗酸应激存活能力的影响;利用同源重组方法构建单增李斯特菌gltC基因缺失株;通过生长曲线测定gltC基因缺失对菌株生长能力的影响;通过酸应激存活试验测定gltC基因缺失对单增李斯特菌酸应激能力的影响;通过Western blotting测定gltC基因缺失对GadD2蛋白表达水平的影响;通过构建携带gltBD启动子区域gfp报告质粒,测定在酸性和中性条件下gltC基因缺失对gltBD启动子区域转录水平的影响。【结果】酸应激结果显示,添加外源谷氨酸可极显著提高菌株10403S在pH 2.5酸性条件下的存活能力(P<0.01)。PCR结果显示,缺失株10403SΔgltC构建成功。生长曲线结果显示,gltC基因缺失不影响单增李斯特菌的生长能力。酸应激结果显示,在pH 2.5致死性酸性环境下缺失株10403SΔgltC生长能力弱于亲本株10403S(P<0.01)。Western blotting结果显示,gltC基因缺失不影响GadD2蛋白表达水平(P>0.05)。PCR结果显示,携带gltBD启动子区域的gfp报告质粒构建成功。GFP荧光分析结果显示,gltC基因缺失后在酸性和中性条件下均会极显著降低gltBD启动子区域转录水平(P<0.01)。【结论】gltC基因缺失不影响单增李斯特菌正常生长,缺失株10403SΔgltC表现出抗酸应激能力下降,且会降低gltBD启动子区域转录水平,但不影响GadD2蛋白表达水平。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 谷氨酸合酶调控因子 gltC基因 抗酸应激 报告基因

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