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人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测
被引量：
5
1
作者
朱帮福
卢兹凡
+3 位作者
陈苏民
蒲勤
路凡
陈南春
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期70-74,共5页
为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PC...
为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定 .收集重组病毒的转染上清 ,肝素亲和层析纯化目的蛋白 .SDS PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白 .体外培养MC3T3 E1细胞 ,经目的蛋白刺激后 ,检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 .并将目的蛋白进行小鼠体内肌肉包埋实验 ,检测其异位诱骨活性 .结果显示 ,肝素亲和层析可以收集 1个高的洗脱峰 .SDS PAGE显示 ,非还原型样本为 32kD的二聚体蛋白带和少量 16kD单体蛋白带 ;还原型样本仅有相应大小的单体蛋白带 ,纯度达 80 % .Western印迹在相应位置呈阳性染色 .此蛋白刺激小鼠成纤维细胞 4 8h后 ,胞内ALP的活性增高 ,经rhBMP3作用后的细胞MTT染色减弱 .在小鼠股部肌肉内包埋蛋白样品 2～ 3周 ,组织学检测有成骨组织生成 .说明hBMP3在此套系统中获得了表达 .表达产物在体外可以刺激成骨细胞的分化 ,却抑制细胞的增殖 .
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关键词
杆状病毒
人
骨
形成蛋白3
表达
纯化
诱骨活性
检测
在线阅读
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职称材料
重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性
被引量：
15
2
作者
崔有宏
陈苏民
+2 位作者
刘新平
陈南春
薛泳涛
《生物化学杂志》
CSCD
1997年第5期513-519,共7页
以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３...
以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３成熟肽和一部分前肽．表达产物以包涵体的形式存在，用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的洗涤液和５ｍｏｌ／Ｌ以下脲溶液连续洗涤，可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白－３Ｃ端肽．经复性处理成可溶性蛋白，植入小鼠肌肉内，第１４ｄ组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成，第２１ｄ可见成骨细胞和骨基质形成．将ｒｈＢＭＰ－３Ｃ与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验，２１ｄ组织切片上可见硬质骨形成．结果表明：大肠杆菌表达的ｈＢＭＰ－３Ｃ经复性后具有诱骨活性，糖基化并非ＢＭＰ－３活性所必需．
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关键词
人
骨
形成蛋白
3羧基多肽
基因表达
诱骨活性
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职称材料
BMP植入后的诱骨活性与免疫应答
3
作者
余清
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1997年第A02期17-19,共3页
ＢＭＰ是一类具有诱骨活性的蛋白质。目前，有关ＢＭＰ诱骨性能的研究已取得可喜进展。因此，通过植入ＢＭＰ治疗骨不连及骨缺损已不是梦想。但ＢＭＰ植入体内后引起的免疫应答往往成为其临床应用的障碍。本文综述了植入不同ＢＭＰ后。
关键词
BMP
移植
免疫应答
诱骨活性
在线阅读
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职称材料
题名
人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测
被引量：
5
1
作者
朱帮福
卢兹凡
陈苏民
蒲勤
路凡
陈南春
机构
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期70-74,共5页
基金
全军医药卫生科研基金重点课题 (No .96Z0 45 )
文摘
为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定 .收集重组病毒的转染上清 ,肝素亲和层析纯化目的蛋白 .SDS PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白 .体外培养MC3T3 E1细胞 ,经目的蛋白刺激后 ,检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 .并将目的蛋白进行小鼠体内肌肉包埋实验 ,检测其异位诱骨活性 .结果显示 ,肝素亲和层析可以收集 1个高的洗脱峰 .SDS PAGE显示 ,非还原型样本为 32kD的二聚体蛋白带和少量 16kD单体蛋白带 ;还原型样本仅有相应大小的单体蛋白带 ,纯度达 80 % .Western印迹在相应位置呈阳性染色 .此蛋白刺激小鼠成纤维细胞 4 8h后 ,胞内ALP的活性增高 ,经rhBMP3作用后的细胞MTT染色减弱 .在小鼠股部肌肉内包埋蛋白样品 2～ 3周 ,组织学检测有成骨组织生成 .说明hBMP3在此套系统中获得了表达 .表达产物在体外可以刺激成骨细胞的分化 ,却抑制细胞的增殖 .
关键词
杆状病毒
人
骨
形成蛋白3
表达
纯化
诱骨活性
检测
Keywords
baculovirus, bone morphogenetic protein, expression and purification,bone\|inducing assay
分类号
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
R336 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性
被引量：
15
2
作者
崔有宏
陈苏民
刘新平
陈南春
薛泳涛
机构
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1997年第5期513-519,共7页
基金
国家"八五"重点攻关
全军"八五"协作攻关
文摘
以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３成熟肽和一部分前肽．表达产物以包涵体的形式存在，用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的洗涤液和５ｍｏｌ／Ｌ以下脲溶液连续洗涤，可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白－３Ｃ端肽．经复性处理成可溶性蛋白，植入小鼠肌肉内，第１４ｄ组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成，第２１ｄ可见成骨细胞和骨基质形成．将ｒｈＢＭＰ－３Ｃ与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验，２１ｄ组织切片上可见硬质骨形成．结果表明：大肠杆菌表达的ｈＢＭＰ－３Ｃ经复性后具有诱骨活性，糖基化并非ＢＭＰ－３活性所必需．
关键词
人
骨
形成蛋白
3羧基多肽
基因表达
诱骨活性
Keywords
Human bone morphogenetic protein 3(hBMP 3),Recombinant DNA,Gene expression,Bone inducing activity
分类号
Q510.2 [生物学—生物化学]
Q593.9 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
BMP植入后的诱骨活性与免疫应答
3
作者
余清
机构
第四军医大学生物化学及分子生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1997年第A02期17-19,共3页
文摘
ＢＭＰ是一类具有诱骨活性的蛋白质。目前，有关ＢＭＰ诱骨性能的研究已取得可喜进展。因此，通过植入ＢＭＰ治疗骨不连及骨缺损已不是梦想。但ＢＭＰ植入体内后引起的免疫应答往往成为其临床应用的障碍。本文综述了植入不同ＢＭＰ后。
关键词
BMP
移植
免疫应答
诱骨活性
分类号
R392.4 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测
朱帮福
卢兹凡
陈苏民
蒲勤
路凡
陈南春
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性
崔有宏
陈苏民
刘新平
陈南春
薛泳涛
《生物化学杂志》
CSCD
1997
15
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
BMP植入后的诱骨活性与免疫应答
余清
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1997
0
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职称材料
已选择
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