目的优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT5)诱骗寡核苷酸(decoyoli-godeoxynucleotide,decoyODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础。...目的优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT5)诱骗寡核苷酸(decoyoli-godeoxynucleotide,decoyODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础。方法设计并合成STAT5decoyODNs、FAM荧光标记的decoyODNs和decoyODNs突变型(M-decoyODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoyODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C3种转染试剂对decoyODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72h时FAM-decoyODNs摄取率和荧光强度,检测decoyODNs的稳定性;MTT实验检测decoyODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoyODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响。结果退火缓冲液(10mmol/LTris,pH8.0,50mmol/LNaCl,1mmol/LEDTA)更有利于decoyODNs双链形成。DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P<0.05,并且DMRIE-C介导decoyODNs转染12、24、72h的转染效率均>98%。MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoyODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P<0.05);RT-PCR结果发现decoyODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P<0.05)。结论建立了decoyODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoyODNs转染K562细胞的效率;decoyODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT5靶基因的转录。展开更多
文摘目的优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT5)诱骗寡核苷酸(decoyoli-godeoxynucleotide,decoyODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础。方法设计并合成STAT5decoyODNs、FAM荧光标记的decoyODNs和decoyODNs突变型(M-decoyODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoyODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C3种转染试剂对decoyODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72h时FAM-decoyODNs摄取率和荧光强度,检测decoyODNs的稳定性;MTT实验检测decoyODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoyODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响。结果退火缓冲液(10mmol/LTris,pH8.0,50mmol/LNaCl,1mmol/LEDTA)更有利于decoyODNs双链形成。DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P<0.05,并且DMRIE-C介导decoyODNs转染12、24、72h的转染效率均>98%。MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoyODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P<0.05);RT-PCR结果发现decoyODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P<0.05)。结论建立了decoyODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoyODNs转染K562细胞的效率;decoyODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT5靶基因的转录。
