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去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
1
作者
常英英
梁立雄
+4 位作者
高亚南
王颜波
丁昌俊
苏晓华
张冰玉
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第5期717-723,共7页
植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子,参与基因的表达调控,与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因,采用"酶切—连接"的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ...
植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子,参与基因的表达调控,与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因,采用"酶切—连接"的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-ROS1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明:17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-ROS1中目的基因的表达,17-β-雌二醇最佳诱导浓度为50~100μmol·L^(-1);随着诱导时间的延长,目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高。该诱导表达载体的构建为研究植物抗逆胁迫过程中的表观遗传机制奠定了基础。
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关键词
pER8-ROS1
17-Β-雌二醇
化学
诱导表达载体
瞬时
表达
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职称材料
联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
2
作者
钟胜
段瑞军
+2 位作者
郭建春
胡新文
符少萍
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第1期52-54,共3页
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3...
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。
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关键词
CBF3冷
诱导表达载体
CBF3和AtGolS3双基因
表达
载体
拟南芥转化
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职称材料
乳酸乳球菌高效电转化方法的建立
被引量：
8
3
作者
任大勇
李昌
+5 位作者
秦艳青
杜寿文
郭欢欢
刘宏锋
洛阳
金宁一
《中国兽药杂志》
2012年第1期5-9,共5页
以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactis NZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影...
以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactis NZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明:在固定电阻200Ω、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2 mm规格的电击杯,加入浓度为1.2μg/μL的质粒,在电场强度和脉冲时间分别为10 kV/cm和5 ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2 h后涂板计数,转化效率最高可以达到2.6×104 CFU/μg DNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。
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关键词
乳酸乳球菌
电转化
转化效率
感受态细胞
诱导
型
表达
载体
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职称材料
题名
去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
1
作者
常英英
梁立雄
高亚南
王颜波
丁昌俊
苏晓华
张冰玉
机构
中国林业科学研究院林业研究所/林木遗传育种国家重点实验室/国家林业局林木培育重点实验室
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第5期717-723,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)(2013AA102703)
林木遗传育种国家重点实验室基本科研业务费专项资金(TGB2013010)
文摘
植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子,参与基因的表达调控,与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因,采用"酶切—连接"的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-ROS1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明:17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-ROS1中目的基因的表达,17-β-雌二醇最佳诱导浓度为50~100μmol·L^(-1);随着诱导时间的延长,目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高。该诱导表达载体的构建为研究植物抗逆胁迫过程中的表观遗传机制奠定了基础。
关键词
pER8-ROS1
17-Β-雌二醇
化学
诱导表达载体
瞬时
表达
Keywords
pER8-ROS1
17-β-estradiol
chemical-inducible expression vector
transient expression
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
2
作者
钟胜
段瑞军
郭建春
胡新文
符少萍
机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第1期52-54,共3页
文摘
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。
关键词
CBF3冷
诱导表达载体
CBF3和AtGolS3双基因
表达
载体
拟南芥转化
Keywords
Cold-induced expression vector CBF3
Double-gene expression vector of CBF3 and AtGolS3
Transformation of Arabidopsis thaliana
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
乳酸乳球菌高效电转化方法的建立
被引量：
8
3
作者
任大勇
李昌
秦艳青
杜寿文
郭欢欢
刘宏锋
洛阳
金宁一
机构
吉林农业大学食品科学与工程学院
军事医学科学院军事兽医研究所
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《中国兽药杂志》
2012年第1期5-9,共5页
基金
国家自然科学基金(81001342)
吉林省自然科学基金项目(201015116)
+1 种基金
吉林省高新技术产业发展项目(2010)
长春市科技特派员行动计划(09KT04)
文摘
以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactis NZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明:在固定电阻200Ω、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2 mm规格的电击杯,加入浓度为1.2μg/μL的质粒,在电场强度和脉冲时间分别为10 kV/cm和5 ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2 h后涂板计数,转化效率最高可以达到2.6×104 CFU/μg DNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。
关键词
乳酸乳球菌
电转化
转化效率
感受态细胞
诱导
型
表达
载体
Keywords
Lactococcus lactis
electroporation
electroporation efficiency
competent cells
inducible expression plasmid
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
常英英
梁立雄
高亚南
王颜波
丁昌俊
苏晓华
张冰玉
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2016
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
钟胜
段瑞军
郭建春
胡新文
符少萍
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
乳酸乳球菌高效电转化方法的建立
任大勇
李昌
秦艳青
杜寿文
郭欢欢
刘宏锋
洛阳
金宁一
《中国兽药杂志》
2012
8
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职称材料
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