小鼠H1foo基因四环素诱导表达系统的构建与表达 被引量：1

1

作者 李建 宁静 +2 位作者 陈西锐 宋成艳 雷安民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期757-762,共6页

卵母细胞特异性连接组蛋白H1foo(Linker histone H1foo)是连接组蛋白H1(Histone 1)在卵母细胞中特异性表达的1个亚型,H1foo在卵母细胞减数分裂和成熟发育过程中起着不可替代的作用,而且H1foo也参与了重编程过程。为了在体细胞中进一步研... 卵母细胞特异性连接组蛋白H1foo(Linker histone H1foo)是连接组蛋白H1(Histone 1)在卵母细胞中特异性表达的1个亚型,H1foo在卵母细胞减数分裂和成熟发育过程中起着不可替代的作用,而且H1foo也参与了重编程过程。为了在体细胞中进一步研究H1foo的功能,本试验通过采用四环素诱导表达载体系统,用PCR的方法扩增了小鼠的H1foo基因和四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子区。用双酶切和连接等方法将上述元件连接到真核表达载体pVenus上,构建了重组质粒pVenus-tet-CMV-H1foo。双酶切和测序结果显示,片段连接正确,且全长测序正确。本试验所构建的四环素诱导的小鼠H1foo真核表达系统有助于人们在体细胞中更好地探讨H1foo在特定时间的作用和功能。 展开更多

关键词 小鼠 H1foo基因 四环素诱导表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

兽疫链球菌ATCC39920可控诱导表达系统的构建及其应用 被引量：2

2

作者 郑小娥 王震 刘浩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期130-136,共7页

旨在构建一种在兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中可用的基因诱导表达系统,并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)诱导表达载体,以编码透明质酸合成酶的has A基因作为报告基... 旨在构建一种在兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中可用的基因诱导表达系统,并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)诱导表达载体,以编码透明质酸合成酶的has A基因作为报告基因,以has A基因功能缺失导致荚膜缺陷的?has A作为宿主菌,观察诱导后荚膜生成情况验证系统的可行性。结果显示,木糖和nisin系统不能诱导has A表达,乳糖系统诱导表达效率低,蔗糖系统可严谨且高效诱导基因表达。以?has A/p LH201菌株实施两步发酵,葡萄糖为唯一糖源时仅用于菌体生长,添加蔗糖诱导产生透明质酸,终产量达到3.4 g/L。成功构建了一种以蔗糖为诱导物的可控-诱导基因表达系统,可用于兽疫链球菌两步发酵。 展开更多

关键词 兽疫链球菌 可控诱导表达系统 可控两步发酵 透明质酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆发状根乙醇诱导表达系统的建立及验证

3

作者 洪冰杰 许鑫 +2 位作者 侯文胜 于丽杰 韩天富 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期217-225,共9页

为在大豆中建立目的基因表达可控的化学诱导表达系统,本研究构建了基于乙醇诱导表达系统(ALCA switch)的GUS和GmFT2a表达载体,利用发状根农杆菌介导的根系转化体系,分别获得转ALCA-mini35S-GUS和ALCA-mini35S-GmFT2a的发状根,通过检测GU... 为在大豆中建立目的基因表达可控的化学诱导表达系统,本研究构建了基于乙醇诱导表达系统(ALCA switch)的GUS和GmFT2a表达载体,利用发状根农杆菌介导的根系转化体系,分别获得转ALCA-mini35S-GUS和ALCA-mini35S-GmFT2a的发状根,通过检测GUS的表达情况和GUS酶活性高低评定该系统在大豆发状根中的诱导效率,并通过检测GmFT2a表达水平加以验证。结果表明,在非诱导条件下,ALCA-mini35S-GUS发状根中未见GUS表达,而在培养基中添加乙醇后组织化学染色效果明显,说明GUS基因表达。乙醇诱导表达的效率与乙醇浓度有关,当乙醇浓度为0.05%、处理60 h时GUS相对表达量达到最高值,处理72 h时GUS酶活性最高;0.05%乙醇处理72 h时,ALCA-mini35S-GmFT2a发状根中GmFT2a相对表达量平均值约为诱导前的150倍,个别样本可达初始值的400倍。综上所述,乙醇诱导表达系统可以在大豆发状根中发挥作用,该系统不仅可用于大豆基因功能研究,而且可为培育外源基因表达可控的转基因大豆品种提供新的技术手段。 展开更多

关键词 大豆 乙醇诱导表达系统 GmFT2a 表达调控

在线阅读 下载PDF 职称材料

大肠杆菌Nissle 1917类T7表达系统的构建及应用

4

作者 郑烨 邓睿哲 +3 位作者 杨富荏 林艺娜 王辉 叶健文 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 北大核心 2025年第2期151-162,共12页

目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统... 目的:在大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)中构建类T7 RNA聚合酶的强诱导表达系统,实现目标蛋白的高效表达。方法:在EcN中构建不同诱导表达调控系统,并进行“剂量-响应”表征测试,筛选出低渗漏、高表达的诱导系统;通过构建基因组整合表达类T7 RNA聚合酶(T7-like RNA polymerase,MmP1)的菌株LM01,并测试其启动子突变文库,优化其表达强度及动态输出范围;利用MmP1诱导系统表达超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),验证其蛋白表达能力。结果:在EcN中成功构建并表征了多个诱导系统,其中以MmP1为RNA聚合酶的类T7诱导表达系统的饱和诱导输出强度最优,最大动态调控范围高达909倍;将MmP1聚合酶表达模块整合至EcN基因组后,其饱和响应表达输出提高达66.8%;P MmP1启动子突变文库的构建提供了涵盖65~1097倍动态范围的宽范围可诱导表达可能性;MmP1系统在SOD蛋白可溶性表达测试中产量最高,达到435.7 mg/L,为香草酸诱导系统产量的4.02倍,且酶活性最高达到391.3 U/mL。结论:类T7(MmP1)诱导系统在EcN中可成功构建,并具有高饱和表达、低本底渗漏、动态范围可控等特性,有助于实现蛋白的高效表达合成。 展开更多

关键词 大肠杆菌Nissle 1917 诱导表达系统 类T7表达系统 蛋白表达 合成生物学

在线阅读 下载PDF 职称材料

Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统 被引量：1

5

作者 龚小卫 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期420-424,共5页

Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基... Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用 。 展开更多

关键词 诱导性基因表达系统 基因调控 基因治疗 Tetro-Tet 逆转录病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

诱导型eIF3g人工microRNA表达载体的构建及应用 被引量：4

6

作者 褚丽莎 韩娜 +1 位作者 宋向阳 曹江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期135-138,共4页

目的:构建可用四环素调控的针对人eIF3g的人工microRNA表达载体,用于抑制肿瘤细胞中eIF3g的表达。方法:利用网络资源设计针对人eIF3g的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至四环素调控表达系统的pRevTRE2载体上,得到pRev... 目的:构建可用四环素调控的针对人eIF3g的人工microRNA表达载体,用于抑制肿瘤细胞中eIF3g的表达。方法:利用网络资源设计针对人eIF3g的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至四环素调控表达系统的pRevTRE2载体上,得到pRevTRE2-eIF3g-microRNA。将四环素调控表达系统的Tet-off质粒转染K562细胞获得稳定转染克隆后,再利用带有报告基因GFP的pRevTRE2-GFP转染选择调控能力较好的K562/Tet-off细胞株,将pRevTRE2-eIF3g-microRNA转染K562/Tet-off细胞,Westernblot检测eIF3g的表达,以研究eIF3g人工microRNA的作用效果。结果:DNA测序结果显示,针对人eIF3g的人工microRNA的克隆正确。pRevTRE2-GFP转染结果表明所选择的K562/Tet-off细胞株有较好的诱导功能。Westernblot结果显示,转染pRevTRE2-eIF3g-microRNA的K562/Tet-off细胞可用四环素调控eIF3g人工microRNA的表达从而抑制K562细胞中eIF3g的表达。结论:成功构建了可用四环素调控的eIF3g人工mi-croRNA表达载体,能有效调控K562细胞中eIF3g的表达。 展开更多

关键词 eIF3g MICRORNA 四环素诱导表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

四环素诱导的猪黑素皮质激素受体-4基因真核表达载体的构建 被引量：3

7

作者 解宇 汪亮 +2 位作者 张冬杰 刘娣 孙亚蒙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第1期13-16,共4页

猪黑素皮质激素受体-4(melanocortin-4receptor,MC4R)基因是影响猪生长肥育的主效基因之一,为了进一步研究MC4R基因的生物学功能,制备高成活率转基因猪,通过采用条件性诱导表达载体系统,PCR方法扩增了猪MC4R基因完整编码区,四环素诱导... 猪黑素皮质激素受体-4(melanocortin-4receptor,MC4R)基因是影响猪生长肥育的主效基因之一,为了进一步研究MC4R基因的生物学功能,制备高成活率转基因猪,通过采用条件性诱导表达载体系统,PCR方法扩增了猪MC4R基因完整编码区,四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子调控区与转录调节元件。采用双酶切和连接等方法将上述元件连接到pcD-NA3.1(+)上,构建了重组质粒pcDNA3.1(+)-rtTA-PTight-MC4R。经双酶切和测序鉴定,结果显示片段正向连接且片段全长测序正确。试验成功构建了四环素诱导的pcDNA3.1(+)-rtTA-PTight-MC4R真核表达载体,并能在时间特异性方面调控MC4R基因的表达。 展开更多

关键词 猪 MC4R基因 四环素诱导表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

四环素诱导的YAP1敲减系统的建立及其对胃癌细胞功能的影响 被引量：1

8

作者 王贺 刘俊 +5 位作者 黄硕 丁晓琛 乔一桓 姜勋亮 闫静川 李纪鹏 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期690-695,共6页

目的建立一种四环素(tetracycline,DOX)诱导的基因敲减系统,并利用此系统研究YAP1对胃癌细胞功能的影响。方法构建pLKO.1-tetON-YAP1敲减的慢病毒载体,酶切和测序方法检测载体构建成功与否;慢病毒感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,建立DO... 目的建立一种四环素(tetracycline,DOX)诱导的基因敲减系统,并利用此系统研究YAP1对胃癌细胞功能的影响。方法构建pLKO.1-tetON-YAP1敲减的慢病毒载体,酶切和测序方法检测载体构建成功与否;慢病毒感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,建立DOX诱导的YAP1敲减的胃癌细胞系;RT-PCR检测YAP1 mRNA相对表达量,Western blotting检测YAP1蛋白水平变化;平板克隆实验检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移的情况。结果构建四环素诱导的YAP1敲减的病毒质粒,酶切鉴定结果显示,在6000 bp和3000 bp处各有一条带,测序结果与设计的shRNA序列一致。包装慢病毒并感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,DOX诱导组中,感染pLKO.1-tetON-YAP1的病毒的细胞中YAP1 mRNA的相对表达量和蛋白水平明显下调;而未诱导组则无明显变化。平板克隆形成实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组克隆形成数明显降低;未诱导组无明显变化。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组表达后细胞迁移能力受到抑制,未诱导组无明显变化。结论成功建立了四环素诱导的慢病毒系统,利用此系统敲减胃癌细胞YAP1基因,胃癌细胞增殖和迁移能力受到抑制。 展开更多

关键词 四环素诱导表达系统 SHRNA 胃癌 YAP1基因 增殖 迁移

在线阅读 下载PDF 职称材料

光诱导RNAi系统的构建及优化

9

作者 王建华 王雪 +2 位作者 杜增民 赵玉政 杨弋 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期28-33,共6页

利用光诱导基因表达系统,构建光诱导RNAi系统,并对系统转染比例、转录因子的表达量和shRNAmir表达载体的核心启动子进行优化。通过构建不同启动子的光敏转录因子GAVPO表达载体和不同核心启动子的shRNAmir表达载体,分析它们对报告基因的... 利用光诱导基因表达系统,构建光诱导RNAi系统,并对系统转染比例、转录因子的表达量和shRNAmir表达载体的核心启动子进行优化。通过构建不同启动子的光敏转录因子GAVPO表达载体和不同核心启动子的shRNAmir表达载体,分析它们对报告基因的干扰效果的影响。结果表明,GAVPO的表达量对报告基因沉默效果和shRNAmir的背景表达水平至关重要。低表达量的GAVPO能够实现对报告基因的微调控,报告基因的表达量下降到约60%;而高表达量的GAVPO能够高效抑制报告基因表达,报告基因的表达量下降到34%。 展开更多

关键词 RNAI 光诱导基因表达系统 shRNAmir 萤火虫荧光素酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

Tet-off调控bcr/abl基因表达的细胞系293pT2-P210的建立

10

作者 黄文荣 鲁茁壮 +5 位作者 王立生 王华 段海峰 李庆芳 高春记 达万明 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期224-228,共5页

慢性髓系白血病(CML)是一种以髓系细胞受累为主的克隆性疾病。目前认为CML的主要分子发病基础为:位于9q34的abl基因与位于22q11的bcr基因相互易位形成bcr/abl融合基因,并编码具有很强蛋白酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白,该蛋白通... 慢性髓系白血病(CML)是一种以髓系细胞受累为主的克隆性疾病。目前认为CML的主要分子发病基础为:位于9q34的abl基因与位于22q11的bcr基因相互易位形成bcr/abl融合基因,并编码具有很强蛋白酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白,该蛋白通过多种信号通路抑制细胞凋亡而导致细胞转化。本研究为构建能由Tet-off诱导表达系统调控bcr/abl融合基因表达的细胞系,为深入研究bcr/abl融合基因功能及其调控机制提供一种有价值的细胞模型。将bcr/abl融合基因亚克隆到pTRE2hyg载体构建重组质粒pT2-P210,同时将Tet-off质粒转染293细胞并筛选出单克隆,然后进一步转染pTRE2hyg-LUC质粒,通过荧光素酶活性检测选出能有效诱导目的基因表达的293Tet-off细胞,然后将重组质粒pT2-P210转染到293Tet-off细胞中。结果表明:筛选出了bcr/abl融合基因能被强力霉素有效调控的293pT2-P210单克隆细胞。结论:本研究筛选的293pT2-P210细胞为bcr/abl基因表达能被Tet-off诱导表达系统调控的细胞系,它们适用于bcr/abl融合基因功能及其信号调控机制的深入研究。 展开更多

关键词 BCR/ABL融合基因 Tet-off诱导表达系统 293pT2-P210细胞系 293细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用pTet-Off系统研究NAIF1对食管癌细胞系EC9706生物学行为的影响

11

作者 罗清 钟佳玲 +4 位作者 赵玫 马怡茗 刘健 王佳 黄常志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期162-165,共4页

目的:利用pTet-off可诱导表达系统将NAIF1重组质粒导入食管癌EC9706中进行生物学行为影响研究。方法:构建pTRE2-NAIF1质粒,与PTK-Hyg质粒共转染入可诱导表达细胞系TF93(由EC9706构建而得),经筛选并鉴定获得稳定可诱导表达克隆。以此克... 目的:利用pTet-off可诱导表达系统将NAIF1重组质粒导入食管癌EC9706中进行生物学行为影响研究。方法:构建pTRE2-NAIF1质粒,与PTK-Hyg质粒共转染入可诱导表达细胞系TF93(由EC9706构建而得),经筛选并鉴定获得稳定可诱导表达克隆。以此克隆采用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术(FCM)检测细胞周期、Transwell小室法检测细胞迁移和检测细胞黏附能力的改变。结果:经筛选并鉴定获得了稳定的可诱导表达TF93-pTRE2-NAIF1克隆。NAIF1在体外可以抑制EC9706细胞增殖、导致G0/G1期细胞阻滞、抑制其迁移和黏附能力。结论:NAIF1能抑制食管癌细胞系EC9706的恶性生物学行为,为食管癌的基因治疗提供了可能的新靶点。 展开更多

关键词 NAIF1 食管癌 EC9706 pTet-Off可诱导表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

稳定整合pTet-on载体小鼠胚胎干细胞株的建立 被引量：2

12

作者 张梅英 李华 +8 位作者 董婉维 杨葳 秦英 汪瑛 周生来 于洋 王惟 王太一 王禄增 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第3期161-166,F0011,共7页

目的建立稳定整合Tet-on基因的ES-D3细胞系,用于人胰岛素基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中诱导表达调控的研究。方法通过电穿孔转染的方法,将pTet-on质粒导入ES-D3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染的ES-D3细胞进行压力筛选,用PC... 目的建立稳定整合Tet-on基因的ES-D3细胞系,用于人胰岛素基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中诱导表达调控的研究。方法通过电穿孔转染的方法,将pTet-on质粒导入ES-D3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染的ES-D3细胞进行压力筛选,用PCR和Southern blot方法进行DNA整合鉴定,并用瞬时转染荧光素酶报告基因(pTRE-Luc)对筛选的Tet-on阳性克隆株的功能进行鉴定。结果经400μg/mL的G418压力筛选后,获得了11个细胞克隆株,特异性核苷酸引物检测细胞基因组DNA,有9个ES-D3细胞株可以扩增出相应的核苷酸片段,部分Tet-on阳性ES-D3株Southern blot鉴定结果表明Tet-on基因片段已整合入ES-D3细胞基因组DNA,荧光素酶报告基因功能鉴定获得1株诱导表达倍率为21.31的ES-D3细胞株,且Tet-on基因阳性ES-D3细胞的形态和生长速度与正常ES-D3细胞没有差异。结论通过电穿孔转染的方法成功地获得1株诱导表达倍率为21.31的高表达ES-D3细胞株,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中转染和诱导表达打下了基础。 展开更多

关键词 四环素诱导表达系统 电穿孔 ES-D3 细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

SCL-tTA/BCR-ABL转基因慢性髓系白血病小鼠模型的建立及鉴定 被引量：3

13

作者 林燕 付伟 梁英民 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期24-29,共6页

目的:建立能由Tet-off调控的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)动物模型,为深入研究CML的发病机制、寻找治疗新方法提供实验工具。方法:通过撤除饮水中的DOX以诱导SCL-tTA/BCR-ABL双转基因小鼠的BCR-ABL在造血干/祖细胞的表... 目的:建立能由Tet-off调控的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)动物模型,为深入研究CML的发病机制、寻找治疗新方法提供实验工具。方法:通过撤除饮水中的DOX以诱导SCL-tTA/BCR-ABL双转基因小鼠的BCR-ABL在造血干/祖细胞的表达;鉴定小鼠基因型正确后检测小鼠外周血象及脾脏指数,并利用流式细胞术观察小鼠骨髓、脾脏及外周血中各系细胞的分布水平。结果:BCR-ABL实验组小鼠血象中可检测到粒细胞增多,脾脏指数明显升高;且这些双转基因小鼠的骨髓、脾脏及外周血中均可检测到髓系细胞(Gr-1^+Mac-1^+)扩增,以及T系细胞(CD3^+)、B系细胞(B220^+)的减少。结论:通过Tet-off诱导表达系统成功诱导双转基因小鼠BCR-ABL的表达,成功建立了类似于人类CM L慢性期的疾病模型。 展开更多

关键词 慢性髓系白血病 SCL-tTA/BCR-ABL双转基因 动物模型 Tet-off诱导表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

条件转基因技术研究的新进展

14

作者 李荣 张茹 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第3期17-19,25,共4页

转基因技术是近 2 0年发展起来的在体内研究基因功能的分子生物学方法之一 ,近年来在原有技术的基础上 ,取得了许多新进展。综述条件转基因技术研究的新进展。阐明转基因的诱导表达系统和条件基因剔除系统的原理、操作过程以及这两系统... 转基因技术是近 2 0年发展起来的在体内研究基因功能的分子生物学方法之一 ,近年来在原有技术的基础上 ,取得了许多新进展。综述条件转基因技术研究的新进展。阐明转基因的诱导表达系统和条件基因剔除系统的原理、操作过程以及这两系统各自的优缺点。 展开更多

关键词 转基因技术 诱导表达系统 条件基因剔除 基因功能 操作过程

在线阅读 下载PDF 职称材料