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建立doxycycline诱导表达Xaf1的肿瘤细胞株
被引量:
5
1
作者
夏焱
苏浩彬
+4 位作者
马国川
陈纯
郭海霞
方建培
黄绍良
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期528-532,共5页
【目的】为探索XIAP相关因子1(Xaf1)调节肿瘤细胞凋亡的机制,利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Xaf1诱导细胞株。【方法】将pTREHA-Xaf1和pWZL-Hyg质粒用基因转染技术转入稳定表达rtTA的Saos-2细胞中。经过hy...
【目的】为探索XIAP相关因子1(Xaf1)调节肿瘤细胞凋亡的机制,利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Xaf1诱导细胞株。【方法】将pTREHA-Xaf1和pWZL-Hyg质粒用基因转染技术转入稳定表达rtTA的Saos-2细胞中。经过hygromycin的抗性筛选,挑出并扩增表达Xaf1的细胞株。在8例实验组中加入doxycycline,和不加doxycycline的8例对照组比较,重复3次实验用免疫印迹法和免疫荧光显微镜检测doxycycline对Xaf1表达的调控。Xaf1诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示。【结果】在30个抗hygromycin的细胞株中,免疫印迹法筛选出5个明显由doxycycline调控诱导表达Xaf1的细胞株,免疫荧光显微镜检测显示doxycycline诱导Xaf1表达于细胞核内。流式细胞检测Xaf1于8h开始诱导Saos细胞凋亡,凋亡率最高约20%,而且不影响细胞周期。【结论】Xaf1-Saos诱导细胞株是研究Xaf1调节肿瘤细胞凋亡机制的良好细胞模型;Xaf1是一种核蛋白,能独立诱导肿瘤细胞凋亡。
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关键词
Tet-on系统
XIAP相关因子1(Xaf1)
凋亡
肿瘤
诱导细胞株
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职称材料
Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立
被引量:
1
2
作者
张娇
于紫燕
赵江月
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期499-501,506,共4页
目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑...
目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑出doxycycline诱导Msx2-GFP表达且具有较低背景的诱导细胞株M8,将空载体细胞株T9作为阴性对照细胞株。并对2组细胞行二维凝胶电泳(2-DE)及基因表达微阵列进行分析。结果从二维凝胶电泳图谱上获得蛋白质斑点。对照组T9检测到5389个斑点,实验组M8检测到5460个斑点。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。经基因表达微阵列分析发现,与晶状体及白内障疾病相关的差异基因为Col3α1,并在RNA水平进行了验证。结论Msx2基因过表达对Alpha-TN4蛋白质表达谱有影响,其中差异基因Col3α1与晶状体及白内障疾病相关。
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关键词
Msx2
Col3α1
Tet-on系统
晶状体上皮
细胞
诱导细胞株
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职称材料
题名
建立doxycycline诱导表达Xaf1的肿瘤细胞株
被引量:
5
1
作者
夏焱
苏浩彬
马国川
陈纯
郭海霞
方建培
黄绍良
机构
中山大学附属第二医院儿科
广东省体育运动技术学院体育医院
出处
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期528-532,共5页
基金
广东省卫生厅科研基金资助项目(E00d003012)
文摘
【目的】为探索XIAP相关因子1(Xaf1)调节肿瘤细胞凋亡的机制,利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Xaf1诱导细胞株。【方法】将pTREHA-Xaf1和pWZL-Hyg质粒用基因转染技术转入稳定表达rtTA的Saos-2细胞中。经过hygromycin的抗性筛选,挑出并扩增表达Xaf1的细胞株。在8例实验组中加入doxycycline,和不加doxycycline的8例对照组比较,重复3次实验用免疫印迹法和免疫荧光显微镜检测doxycycline对Xaf1表达的调控。Xaf1诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示。【结果】在30个抗hygromycin的细胞株中,免疫印迹法筛选出5个明显由doxycycline调控诱导表达Xaf1的细胞株,免疫荧光显微镜检测显示doxycycline诱导Xaf1表达于细胞核内。流式细胞检测Xaf1于8h开始诱导Saos细胞凋亡,凋亡率最高约20%,而且不影响细胞周期。【结论】Xaf1-Saos诱导细胞株是研究Xaf1调节肿瘤细胞凋亡机制的良好细胞模型;Xaf1是一种核蛋白,能独立诱导肿瘤细胞凋亡。
关键词
Tet-on系统
XIAP相关因子1(Xaf1)
凋亡
肿瘤
诱导细胞株
Keywords
Tet-on system
XIAP associate facter l(Xaf1 )
apoptosis
cancer
inducible cell line
分类号
R730.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立
被引量:
1
2
作者
张娇
于紫燕
赵江月
机构
中国医科大学附属第四医院眼科中国医科大学眼科医院辽宁省晶状体学重点实验室
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期499-501,506,共4页
基金
国家自然科学基金(81371003)
文摘
目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑出doxycycline诱导Msx2-GFP表达且具有较低背景的诱导细胞株M8,将空载体细胞株T9作为阴性对照细胞株。并对2组细胞行二维凝胶电泳(2-DE)及基因表达微阵列进行分析。结果从二维凝胶电泳图谱上获得蛋白质斑点。对照组T9检测到5389个斑点,实验组M8检测到5460个斑点。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。经基因表达微阵列分析发现,与晶状体及白内障疾病相关的差异基因为Col3α1,并在RNA水平进行了验证。结论Msx2基因过表达对Alpha-TN4蛋白质表达谱有影响,其中差异基因Col3α1与晶状体及白内障疾病相关。
关键词
Msx2
Col3α1
Tet-on系统
晶状体上皮
细胞
诱导细胞株
Keywords
Msx2
Col3α1
Tet-on system
lens epithelial cells
induced cell lines
分类号
R776.4 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
建立doxycycline诱导表达Xaf1的肿瘤细胞株
夏焱
苏浩彬
马国川
陈纯
郭海霞
方建培
黄绍良
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立
张娇
于紫燕
赵江月
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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