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Ta6-SFT在烟草中的逆境诱导型表达及抗旱性被引量：5: 1; 作者李淑洁李静雯张正英《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期994-1001,共8页; 分别构建CaMV35S启动子驱动的Ta6-SFT组成型植物表达载体和rd29A启动子驱动的逆境诱导型表达载体。利用农杆菌介导法分别导入烟草中,获得转基因株系,Southern杂交和Northern点杂交确定Ta6-SFT整合进转基因株系基因组中,并正常转录。以... 展开更多; 关键词 Ta6-SFT 果聚糖干旱胁迫逆境诱导型表达组成型表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究被引量：1: 2; 作者赵艳娜邱荣 +1 位作者沈南唐元家《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期297-301,共5页; 目的·结合Dox诱导型单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)表达载体和Cas9转基因小鼠,构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究。方法·根据四环素诱导表达系统原理,基因合成U6-TetO-sgRNA和EF1α-T2A-Puro-BFP-... 展开更多; 关键词诱导型CRISPR/Cas9系统 Dox诱导型sgRNA表达载体造血干细胞基因编辑巨噬细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

虎皮鱼热激蛋白PtHsp70基因序列与低温表达分析被引量：6: 3; 作者刘丽丽王晓雯 +3 位作者朱建亚张蓉朱华田照辉《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期774-782,共9页; 通过同源克隆和cDNA末端快速克隆技术扩增获得狭温热带鱼类虎皮鱼热激蛋白70(PtHsp70)基因的cDNA序列,BLAST比对分析基因序列同源性,预测其编码氨基酸序列和结构,实时荧光定量PCR技术分析虎皮鱼PtHsp70基因组织特异性表达谱和低温胁迫下... 展开更多; 关键词狭温热带鱼 PtHsp70 诱导型表达组织特异性表达低温胁迫; 在线阅读下载PDF 职称材料

蓝花楹JaCBF1转录因子片段的序列分析及耐寒性功能验证被引量：6: 4; 作者周静张炜 +2 位作者李大明张锡九陈其兵《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第4期414-419,共6页; CBF类转录因子是调控植物冷害应答反应的关键因子。从蓝花楹中克隆到一个457 bp CBF类基因片段,序列分析表明其编码142氨基酸的片段,并与多个物种CBF1基因序列高度同源,且具有CBF家族的AP2核心结构域,因此将其命名为JaCBF1。原核表达的... 展开更多; 关键词蓝花楹 CBF 转录因子诱导型表达耐寒性功能; 在线阅读下载PDF 职称材料

乳酸乳球菌高效电转化方法的建立被引量：8: 5; 作者任大勇李昌 +5 位作者秦艳青杜寿文郭欢欢刘宏锋洛阳金宁一《中国兽药杂志》 2012年第1期5-9,共5页; 以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactis NZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影... 展开更多; 关键词乳酸乳球菌电转化转化效率感受态细胞诱导型表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Ta6-SFT在烟草中的逆境诱导型表达及抗旱性被引量：5: 1; 作者李淑洁李静雯张正英; 机构甘肃省农业科学院生物技术研究所甘肃省农业科学院科研管理处; 出处《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期994-1001,共8页; 基金甘肃省科技支撑计划(1011NKCA073) 甘肃省农业科学院科技创新专项(2009GAAS17) 甘肃省国际科技合作计划(1104WCGA188)资助; 文摘分别构建CaMV35S启动子驱动的Ta6-SFT组成型植物表达载体和rd29A启动子驱动的逆境诱导型表达载体。利用农杆菌介导法分别导入烟草中,获得转基因株系,Southern杂交和Northern点杂交确定Ta6-SFT整合进转基因株系基因组中,并正常转录。以非转基因株系作对照,对2种转基因烟草株系进行干旱胁迫处理,采用半定量RT-PCR分析Ta6-SFT在转基因株系中的表达,同时测定胁迫0 d和18 d果聚糖含量及部分农艺性状。结果表明,含有rd29A启动子的逆境诱导型株系中Ta6-SFT相对表达量比在含CaMV35S启动子的组成型株系中高,而且积累更多的果聚糖;从株高、1/2株高处茎粗、叶面积数据来看,逆境诱导型转基因株系的生长势优于组成型株系,对干旱表现强的耐性。因此,在转基因植物中逆境诱导型表达Ta6-SFT基因将发挥更好的抗逆功能。; 关键词 Ta6-SFT 果聚糖干旱胁迫逆境诱导型表达组成型表达; Keywords Ta6-SFT Fructan Drought stress Inducible expression at adverse environment Constitutive expression; 分类号 S572 [农业科学—烟草工业]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究被引量：1: 2; 作者赵艳娜邱荣沈南唐元家; 机构上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科中国科学院上海营养与健康研究所; 出处《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期297-301,共5页; 基金国家自然科学基金(81871287,31630021) 上海交通大学医学院高水平地方高校创新团队(SSMU-ZDCX20180100)。; 文摘目的·结合Dox诱导型单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)表达载体和Cas9转基因小鼠,构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究。方法·根据四环素诱导表达系统原理,基因合成U6-TetO-sgRNA和EF1α-T2A-Puro-BFP-T2ATetR片段。通过同源重组将2个片段组装进反转录病毒载体骨架,获得Dox诱导型sgRNA反转录病毒载体。为了验证系统有效性,分离Cas9转基因小鼠骨髓细胞并诱导其向巨噬细胞方向分化。设计对照(non-targeting control,NC)组和实验组(靶向F4/80)的sgRNA,利用反转录病毒感染细胞,分化条件设置添加Dox组(Dox^(+))和不添加Dox组(Dox^(-))。通过流式细胞术和T7核酸内切酶Ⅰ(T7 endonucleaseⅠ,T7EⅠ)实验检测基因敲除效果。结果·①成功构建Dox诱导型sgRNA反转录病毒表达载体和Cas9转基因小鼠。②流式结果显示,在NC Dox^(-)组、NCDox^(+)组和F4/80 Dox^(-)组中,几乎无F4/80阴性细胞群体;而在F4/80 Dox^(+)组中,F4/80阴性细胞群体高达50%。③T7EⅠ结果显示,在F4/80 Dox^(-)组中,DNA条带完整,而在F4/80 Dox^(+)组中发生基因突变,DNA条带被切开。结论·结合Dox诱导型sgRNA表达载体和Cas9转基因小鼠,成功构建诱导型CRISPR/Cas9系统。利用该系统成功在小鼠免疫细胞中实现可诱导性基因敲除。; 关键词诱导型CRISPR/Cas9系统 Dox诱导型sgRNA表达载体造血干细胞基因编辑巨噬细胞; Keywords inducible CRISPR/Cas9 system Dox-inducible sgRNA expression vector hematopoietic stem cell gene editing macrophage; 分类号 R394.4 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名虎皮鱼热激蛋白PtHsp70基因序列与低温表达分析被引量：6: 3; 作者刘丽丽王晓雯朱建亚张蓉朱华田照辉; 机构北京市水产科学研究所渔业生物技术北京市重点实验室; 出处《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期774-782,共9页; 基金国家大宗淡水鱼类产业技术体系项目(CARS-45-31) 北京市自然科学基金资助项目(6194032) +2 种基金 (北京市财政)观赏水族养殖关键技术研究项目; 文摘通过同源克隆和cDNA末端快速克隆技术扩增获得狭温热带鱼类虎皮鱼热激蛋白70(PtHsp70)基因的cDNA序列,BLAST比对分析基因序列同源性,预测其编码氨基酸序列和结构,实时荧光定量PCR技术分析虎皮鱼PtHsp70基因组织特异性表达谱和低温胁迫下PtHsp70基因的表达模式。研究结果表明,PtHsp70基因cDNA序列全长2317 bp,其中5′非编码区120 bp,3′非编码区266 bp,编码区1932 bp,对应的开放阅读框为121~2052 bp,预测编码643个氨基酸。PtHsp70基因mRNA在成年虎皮鱼不同组织中表达水平依次为肝脏>肌肉>鳃>脑,其中肝脏PtHsp70基因本底表达水平显著高于其他组织(P<0.01),表明其在肝脏中具有重要的生物学功能。而随温度降低,肝脏PtHsp70基因表达水平呈先降后升的趋势,表明肝脏PtHsp70基因参与虎皮鱼应对低温胁迫的过程;随温度降低,虎皮鱼脑、鳃和肌肉组织PtHsp70基因mRNA水平显著上调(P<0.01),说明低温胁迫诱导PtHsp70基因mRNA表达。本研究克隆并鉴定了PtHsp70基因序列和组织表达谱,分析了低温胁迫下PtHsp70基因表达模式,研究结果显示,狭温热带鱼类虎皮鱼的PtHsp70基因具有组织特异性和温度诱导型表达特征。研究发现,PtHsp70基因在响应低温胁迫过程中具有重要作用,具有作为虎皮鱼低温胁迫分子标志物的潜能。; 关键词狭温热带鱼 PtHsp70 诱导型表达组织特异性表达低温胁迫; Keywords tropical stenothermal fish PtHsp70 inducible expression tissue-specific expression cold stress; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名蓝花楹JaCBF1转录因子片段的序列分析及耐寒性功能验证被引量：6: 4; 作者周静张炜李大明张锡九陈其兵; 机构四川农业大学风景园林学院四川师范大学生命科学学院四川省林业科学研究院; 出处《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第4期414-419,共6页; 基金四川省国际合作与交流项目(2012HH0039); 文摘 CBF类转录因子是调控植物冷害应答反应的关键因子。从蓝花楹中克隆到一个457 bp CBF类基因片段,序列分析表明其编码142氨基酸的片段,并与多个物种CBF1基因序列高度同源,且具有CBF家族的AP2核心结构域,因此将其命名为JaCBF1。原核表达的结果显示此基因片段编码16 kDa的蛋白,表达分析结果显示JaCBF1于低温条件下在蓝花楹根、茎、叶中有差异性转录。Southern杂交结果揭示JaCBF1在蓝花楹基因组中存在至少2个拷贝。通过脓杆菌介导方法将JaCBF1异源转录到拟南芥中,荧光共聚焦显微照相结果显示其编码的蛋白质定位于细胞核,冷处理实验发现转基因拟南芥植株的耐冷性得到了显著提高,表明此新片段具有CBF类植物耐冷因子的典型功能。; 关键词蓝花楹 CBF 转录因子诱导型表达耐寒性功能; Keywords Jacaranda acutifolia CBF transcription factor induced expression chilling resistance; 分类号 S718.46 [农业科学—林学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名乳酸乳球菌高效电转化方法的建立被引量：8: 5; 作者任大勇李昌秦艳青杜寿文郭欢欢刘宏锋洛阳金宁一; 机构吉林农业大学食品科学与工程学院军事医学科学院军事兽医研究所吉林大学畜牧兽医学院; 出处《中国兽药杂志》 2012年第1期5-9,共5页; 基金国家自然科学基金(81001342) 吉林省自然科学基金项目(201015116) +1 种基金长春市科技特派员行动计划(09KT04); 文摘以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactis NZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明:在固定电阻200Ω、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2 mm规格的电击杯,加入浓度为1.2μg/μL的质粒,在电场强度和脉冲时间分别为10 kV/cm和5 ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2 h后涂板计数,转化效率最高可以达到2.6×104 CFU/μg DNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。; 关键词乳酸乳球菌电转化转化效率感受态细胞诱导型表达载体; Keywords Lactococcus lactis electroporation electroporation efficiency competent cells inducible expression plasmid; 分类号 S852.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	Ta6-SFT在烟草中的逆境诱导型表达及抗旱性	李淑洁李静雯张正英	《作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究	赵艳娜邱荣沈南唐元家	《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	虎皮鱼热激蛋白PtHsp70基因序列与低温表达分析	刘丽丽王晓雯朱建亚张蓉朱华田照辉	《水产科学》 CAS CSCD 北大核心	2019	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	蓝花楹JaCBF1转录因子片段的序列分析及耐寒性功能验证	周静张炜李大明张锡九陈其兵	《林业科学研究》 CSCD 北大核心	2013	6	在线阅读下载PDF 职称材料
5	乳酸乳球菌高效电转化方法的建立	任大勇李昌秦艳青杜寿文郭欢欢刘宏锋洛阳金宁一	《中国兽药杂志》	2012	8	在线阅读下载PDF 职称材料