辣椒响应逆境胁迫的诱导型启动子研究进展 被引量：2

1

作者 杨柳烟 欧斯扬 +1 位作者 张素勤 耿广东 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2024年第12期1-8,共8页

干旱、涝渍、极端温度以及病虫害等多种逆境胁迫严重影响辣椒的生长,导致辣椒发育不良而减产。启动子包含重要的顺式作用元件,对目的基因的表达调控有重要作用,尤其是植物诱导型启动子,在胁迫条件下会激发抗逆调控机制与激活目的基因表... 干旱、涝渍、极端温度以及病虫害等多种逆境胁迫严重影响辣椒的生长,导致辣椒发育不良而减产。启动子包含重要的顺式作用元件,对目的基因的表达调控有重要作用,尤其是植物诱导型启动子,在胁迫条件下会激发抗逆调控机制与激活目的基因表达,改变植物代谢组分和生理生化反应,增强植物抗逆性。主要对辣椒应答干旱、高温、低温、盐等非生物和生物胁迫诱导型启动子的种类、功能以及与反式作用因子的互作进行综述,以期为进一步研究辣椒基因诱导型启动子提供一定的理论依据和抗逆品种改良提供参考。 展开更多

关键词 辣椒 逆境胁迫 诱导型启动子 功能分析

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一种谷氨酸棒杆菌4-异丙基苯甲酸诱导型启动子的设计与应用

2

作者 毋舒宁 苏永平 +3 位作者 李冬雪 柏映国 刘波 张志伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期108-116,共9页

【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱... 【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱导剂的启动子P_(H10-CuO)。【结果】绿色荧光蛋白作为报告基因的实验结果显示,无诱导剂时,谷氨酸棒杆菌工程菌相对荧光强度较低;以25μg/mL 4-异丙基苯甲酸诱导12 h时,谷氨酸棒杆菌工程菌荧光强度达62000,证明P_(H10-CuO)具有很好的严谨性和诱导表达强度。构建了以启动子P_(H10-CuO)调控recET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒,实现谷氨酸棒杆菌染色体上靶标基因的精准编辑和外源基因插入。【结论】诱导型启动子P_(H10-CuO)具有表达强度高且渗漏表达低的特点,可用于谷氨酸棒杆菌中被其调控基因的时序性表达。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 诱导型启动子 阻遏蛋白CymR 4-异丙基苯甲酸

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逆境诱导型启动子rd29A的克隆及植物表达载体的构建 被引量：4

3

作者 李晶 李杰 +1 位作者 关英芝 朱延明 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期111-114,共4页

根据文献上发表的逆境诱导型启动子rd2 9A序列设计并合成了一对引物 ,通过PCR的方法从拟南芥基因组中扩增到rd2 9A的启动子序列。根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理... 根据文献上发表的逆境诱导型启动子rd2 9A序列设计并合成了一对引物 ,通过PCR的方法从拟南芥基因组中扩增到rd2 9A的启动子序列。根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理的拟南芥总RNA中扩增出DREB1A基因的全长cDNA片段。以植物表达载体pBch为基础 ,构建了由rd2 9A调控的DREB1A基因的植物表达载体pBDR2 9A 。 展开更多

关键词 逆境诱导型启动子 克隆 植物 表达载体

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水稻干旱诱导型启动子Oshox24P的分离与鉴定 被引量：17

4

作者 杨梅 熊立仲 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期525-531,共7页

为了挖掘水稻中的逆境诱导型启动子,挑选了1个受干旱胁迫强烈诱导的水稻内源基因Oshox24,分离出该基因的启动子(命名为Oshox24P),通过酶切连接的方法构建GUS报告基因表达载体并转化到受体材料中花11中,通过对转基因后代在不同逆境胁迫下... 为了挖掘水稻中的逆境诱导型启动子,挑选了1个受干旱胁迫强烈诱导的水稻内源基因Oshox24,分离出该基因的启动子(命名为Oshox24P),通过酶切连接的方法构建GUS报告基因表达载体并转化到受体材料中花11中,通过对转基因后代在不同逆境胁迫下的GUS活性检测,证明该启动子强烈地受到干旱胁迫的诱导,上调表达倍数至十几倍,同时该启动子还受到脱落酸(ABA)的诱导,对高盐和低温胁迫的反应并不明显。结果表明,该启动子属于干旱诱导型启动子,可以用于控制目标基因在水稻中的表达。 展开更多

关键词 水稻 启动子 诱导型启动子 干旱 GUS报告基因

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拟南芥冷诱导型启动子CBF3驱动IPT基因在烟*草中的表达 被引量：2

5

作者 郭新勇 程晨 +1 位作者 张选 祝建波 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期123-131,共9页

用PCR的方法获得拟南芥冷诱导型启动子CBF3和农杆菌Ti质粒上的IPT基因,构建由启动子CBF3驱动IPT植物表达载体,并经农杆菌介导将基因整合到烟草的基因组中,利用Kan筛选、PCR和RT-PCR检测,最终获得转基因的植株。通过对烟草的植物学性状... 用PCR的方法获得拟南芥冷诱导型启动子CBF3和农杆菌Ti质粒上的IPT基因,构建由启动子CBF3驱动IPT植物表达载体,并经农杆菌介导将基因整合到烟草的基因组中,利用Kan筛选、PCR和RT-PCR检测,最终获得转基因的植株。通过对烟草的植物学性状和农艺学性状的分析发现,随着启动子CBF3驱动的IPT基因在烟草中的表达,使得植株性状发生很大的改变,如株型变为塔型,株高增高,节距增长,且有很多的分枝和侧芽,叶片明显增多,表现出短窄且平滑的性状,茎围、腰叶长和腰叶宽都减小许多,相应的最大叶面积、顶叶面积和叶质量也都下降,但叶的密度却有所增加。 展开更多

关键词 异戊烯基转移酶基因(IPT) 烟草 冷诱导型启动子 表型

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根结线虫诱导型启动子RKNIP的克隆及序列分析 被引量：1

6

作者 霍雨猛 王伟 +4 位作者 徐苑芳 何启伟 金国良 侯丽霞 赵双宜 《山东农业科学》 2009年第4期5-8,15,共5页

通过对烟草根特异性基因TobRB7调控序列的分析,构建了受根结线虫诱导的特异性表达启动子RKNIP的克隆载体,其中RKNIP500已于GenBank注册,注册号为DQ486886。模序分析表明,RKNIP500具有双向启动子的功能,而RKNIP300不具有启动子的功能,但... 通过对烟草根特异性基因TobRB7调控序列的分析,构建了受根结线虫诱导的特异性表达启动子RKNIP的克隆载体,其中RKNIP500已于GenBank注册,注册号为DQ486886。模序分析表明,RKNIP500具有双向启动子的功能,而RKNIP300不具有启动子的功能,但存在大量与启动子功能相关的元件,特别是存在25个根特异性表达的元件。 展开更多

关键词 根结线虫 诱导型启动子 RKNIP

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植物诱导型启动子研究进展 被引量：10

7

作者 孙芳芳 宋洪元 《南方园艺》 2014年第2期51-56,共6页

启动子是控制目的基因表达的关键元件,而诱导型启动子的出现为精确、灵活调控外源基因在植物中的表达提供了可能,目前已经成为植物基因工程研究和开发的热点之一。该文主要就环境胁迫诱导型、光诱导型、激素诱导型等各种常见的诱导启动... 启动子是控制目的基因表达的关键元件,而诱导型启动子的出现为精确、灵活调控外源基因在植物中的表达提供了可能,目前已经成为植物基因工程研究和开发的热点之一。该文主要就环境胁迫诱导型、光诱导型、激素诱导型等各种常见的诱导启动子的特点进行了综述,并对诱导型启动子的未来研究和应用方向进行了展望。 展开更多

关键词 诱导型启动子 作用元件 基因表达调控

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玉米逆境诱导型启动子克隆及其植物表达载体构建 被引量：5

8

作者 刘晓敏 张莉弘 +3 位作者 刘金亮 魏毅 潘洪玉 张世宏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期86-90,共5页

设计特异引物,利用PCR方法从玉米(Zea mays)基因组DNA中克隆低温和盐相应蛋白(low temperature andsalt responsive protein,LS)基因上游1 735 bp,命名为Lsp。利用在线启动子预测工具PlantCARE分析表明,序列中含有TATA-box和CAAT-box等... 设计特异引物,利用PCR方法从玉米(Zea mays)基因组DNA中克隆低温和盐相应蛋白(low temperature andsalt responsive protein,LS)基因上游1 735 bp,命名为Lsp。利用在线启动子预测工具PlantCARE分析表明,序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还包含各种胁迫响应元件。以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,将克隆得到的启动子片段与GUS报告基因融合构建了重组表达载体pCAM-Lsp,并用反复冻融法将其导入农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法转化烟草,GUS组织化学染色显示出Lsp驱动GUS基因表达。结果表明,该Lsp启动子片段具备一定的启动活性,为探明玉米逆境胁迫启动子表达调控序列及其调控机制的研究奠定基础。 展开更多

关键词 玉米 诱导型启动子 序列分析 植物表达载体 转化

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高等植物胁迫诱导型启动子的研究进展 被引量：23

9

作者 文添龙 刘雪梅 +1 位作者 冀亚萍 俞嘉宁 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期206-214,共9页

逆境胁迫严重影响植物生长发育,降低作物产量。目前在植物抗逆基因工程中,大多使用组成型启动子驱动目的基因表达,组成型启动子的表达虽然能提高转基因植株的抗逆性,但持续过量地表达转化的外源基因有时会阻碍植物的生长且降低其产量。... 逆境胁迫严重影响植物生长发育,降低作物产量。目前在植物抗逆基因工程中,大多使用组成型启动子驱动目的基因表达,组成型启动子的表达虽然能提高转基因植株的抗逆性,但持续过量地表达转化的外源基因有时会阻碍植物的生长且降低其产量。因此,诱导型启动子的研究具有重要的应用价值。该文对近年来植物在逆境胁迫处理下,一些诱导型启动子的种类和功能,可能具有的顺式作用元件,反式作用因子及其研究方法进行了综述。 展开更多

关键词 启动子 诱导型启动子 胁迫诱导 转基因植物

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糖诱导型启动子调控ALD6基因表达降低黄酒中的高级醇生成量 被引量：3

10

作者 康新玥 魏敏 +5 位作者 江森 王欢 郭学武 肖冬光 武晓乐 陈叶福 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第23期17-24,共8页

高级醇是影响中国黄酒风味和饮用品质的重要因素之一,适量高级醇可赋予黄酒醇柔、协调的口感,但高级醇过高会导致酒体产生杂醇味,且有强烈的致醉性。在酿酒酵母中,过表达ALD6基因可以显著降低高级醇的生成量,但是过多乙酸的生成会抑制... 高级醇是影响中国黄酒风味和饮用品质的重要因素之一,适量高级醇可赋予黄酒醇柔、协调的口感,但高级醇过高会导致酒体产生杂醇味,且有强烈的致醉性。在酿酒酵母中,过表达ALD6基因可以显著降低高级醇的生成量,但是过多乙酸的生成会抑制细胞的生长和代谢。由于黄酒发酵是双边发酵,可以通过筛选合适的糖诱导型启动子调控ALD6的表达,在降低高级醇生成量的同时减弱其对细胞生长的抑制作用。该研究选取了6个HXT系列的糖诱导型启动子P_(hxt1)、P_(hxt2)、P_(hxt3)、P_(hxt4)、P_(hxt5)和P_(hxt7)调控乙醛脱氢酶基因ALD6的表达,黄酒发酵结果显示,相较于出发菌株a17,各诱导型重组菌株总高级醇生成量分别下降22.29%、19.26%、42.56%、37.84%、16.72%和30.74%。对比组成型重组菌株a-P_(pgk1)-A和诱导型重组菌株a-P_(hxt3)-A发现,二者相较于出发菌株a17均可显著降低总高级醇的生成,但与a-P_(pgk1)-A相比,a-P_(hxt3)-A的生长及发酵性能与a17基本一致,在降低高级醇生成量的同时减弱了过表达ALD6产生乙酸对发酵的不利影响。 展开更多

关键词 高级醇 糖诱导型启动子(P hxts) 乙醛脱氢酶 黄酒 酿酒酵母

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诱导型启动子在植物基因工程中的研究进展 被引量：8

11

作者 杨瑞娟 白建荣 +1 位作者 李锐 常利芳 《山西农业科学》 2018年第2期292-298,共7页

诱导型启动子不仅能使目的基因的表达产物在特定时期积累,避免植物能量的不必要浪费,而且可以避免基因过表达对植物造成的毒害,以及因此造成的植物减产甚至死亡。综述了高等植物诱导型启动子在植物基因工程中的最新研究进展,以期使人们... 诱导型启动子不仅能使目的基因的表达产物在特定时期积累,避免植物能量的不必要浪费,而且可以避免基因过表达对植物造成的毒害,以及因此造成的植物减产甚至死亡。综述了高等植物诱导型启动子在植物基因工程中的最新研究进展,以期使人们更加深入地了解高等植物基因表达调控机制,为植物基因工程及作物改良研究提供具有应用价值的启动子元件。 展开更多

关键词 诱导型启动子 植物基因工程 调控机制

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植物诱导型启动子及相关顺式作用元件研究进展 被引量：37

12

作者 李濯雪 陈信波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期8-15,共8页

启动子是基因表达调控的重要元件,而启动子能正确调控基因的表达需要核心启动子以及上下游的顺式作用元件协同作用。诱导型启动子的应用减少了外源基因表达时产生的大量异源蛋白等代谢产物的积累和植物能量的浪费。综合近几年关于诱导... 启动子是基因表达调控的重要元件,而启动子能正确调控基因的表达需要核心启动子以及上下游的顺式作用元件协同作用。诱导型启动子的应用减少了外源基因表达时产生的大量异源蛋白等代谢产物的积累和植物能量的浪费。综合近几年关于诱导型启动子的研究,从其启动子的结构及功能、分类、应用及相关顺式作用元件等方面进行概述,提出了在研究过程中存在的问题及展望。 展开更多

关键词 启动子 顺式作用元件 诱导型启动子

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一个水稻褐飞虱为害诱导型启动子的克隆 被引量：1

13

作者 关丽梅 马伟华 +1 位作者 林拥军 陈浩 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期19-25,共7页

目前组成型启动子在基因工程中的应用最为广泛,然而驱动外源基因在各组织中持续恒定地表达可能引起植物发育迟缓等问题。诱导型启动子能够在特定条件下实现目的基因定时优势表达,最大限度减少由于非必需蛋白在转基因植物内的积累对其造... 目前组成型启动子在基因工程中的应用最为广泛,然而驱动外源基因在各组织中持续恒定地表达可能引起植物发育迟缓等问题。诱导型启动子能够在特定条件下实现目的基因定时优势表达,最大限度减少由于非必需蛋白在转基因植物内的积累对其造成的伤害。依据基因芯片数据并通过定量RT-PCR验证,找到了一个受水稻褐飞虱(Nilaparavata lugens)为害诱导表达基因(LOC_Os01g73940)。用PCR技术从籼稻品种‘TN1’的基因组中获得Os01g73940上游1 953bp的启动子片段,命名为BPHIP。将BPHIP连接到带有β-glucuronidase(GUS)报告基因的植物表达载体上,通过农杆菌介导转化水稻品种‘中花11’。通过GUS组织化学染色法及定量RT-PCR检测证明,BPHIP是一个受褐飞虱为害和茉莉酸处理诱导上调的启动子。利用此类启动子在基因工程中可以减少对水稻生理方面产生的副作用,对抗虫转基因水稻具有良好的应用价值。 展开更多

关键词 水稻 诱导型启动子 褐飞虱 抗虫 基因工程

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逆境诱导型启动子Mvnhx1缺失片段植物表达载体构建

14

作者 任燕萍 王益虹 +1 位作者 朱少青 王萍 《湖南农业科学》 2018年第6期5-9,共5页

Mvnhx1启动子是一种与盐胁迫和干旱胁迫相关的逆境诱导型启动子。为了更好地研究顺式作用元件对Mvnhx1启动子功能特点的影响,研究根据启动子序列上与耐盐和耐旱相关的顺式作用元件分布位置不同设计引物,利用5'端缺失技术获得11个不... Mvnhx1启动子是一种与盐胁迫和干旱胁迫相关的逆境诱导型启动子。为了更好地研究顺式作用元件对Mvnhx1启动子功能特点的影响,研究根据启动子序列上与耐盐和耐旱相关的顺式作用元件分布位置不同设计引物,利用5'端缺失技术获得11个不同长度的Mvnhx1启动子缺失片段,分别构建不同缺失片段与报告基因GUS融合的植物表达载体。PCR扩增结果显示,成功克隆获得11个长度分别为1 135、1 027、974、967、858、727、726、564、366、352和210 bp的片段。酶切鉴定显示,成功构建了由Mvnhx1启动子11个不同长度缺失片段调控的带GUS基因的植物表达载体。 展开更多

关键词 诱导型启动子 Mvnhx1 缺失片段 植物表达载体

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植物诱导型启动子 Prd29A 的顺式元件分析及应用研究进展 被引量：1

15

作者 田港 韦丁一 许本波 《安徽农学通报》 2020年第24期32-36,共5页

植物在生长发育过程中会遭受各种生物和非生物胁迫,对植物生长发育造成巨大的影响。植物基因工程中组成型启动子应用存在种种弊端,因此对植物新型诱导型启动子的开发应用成为了植物基因工程的研究热点。该文从拟南芥中PAtrd29A启动子序... 植物在生长发育过程中会遭受各种生物和非生物胁迫,对植物生长发育造成巨大的影响。植物基因工程中组成型启动子应用存在种种弊端,因此对植物新型诱导型启动子的开发应用成为了植物基因工程的研究热点。该文从拟南芥中PAtrd29A启动子序列结构以及应用出发,概述了该启动子的胁迫诱导激活功能以及其给植物育种带来的影响,开发应用这类新型诱导型启动子是植物抵抗生长过程中非生物胁迫的有效措施。 展开更多

关键词 诱导型启动子 顺式元件 非生物胁迫

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玉米低磷胁迫诱导型强启动子P_(1502)-ZmPHR1的克隆与表达分析 被引量：2

16

作者 杨瑞娟 白建荣 +4 位作者 闫蕾 苏亮 王秀红 李锐 张丛卓 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1000-1009,共10页

玉米ZmPHR1基因是转录因子MYB-CC家族成员,过量表达该基因可促进低磷环境中植物对磷的吸收并改善植物的生长。本研究从磷高效利用型玉米自交系478中获得了ZmPHR1基因的5'上游序列P_(2205)-ZmPHR1,序列长度2205 bp。将P_(2205)-ZmPHR... 玉米ZmPHR1基因是转录因子MYB-CC家族成员,过量表达该基因可促进低磷环境中植物对磷的吸收并改善植物的生长。本研究从磷高效利用型玉米自交系478中获得了ZmPHR1基因的5'上游序列P_(2205)-ZmPHR1,序列长度2205 bp。将P_(2205)-ZmPHR1及它的4种5'端缺失启动子片段与报告基因GUS连接后转化拟南芥。GUS组织化学染色与GUS定量分析结果表明,在0~1502 bp的片段范围内,随着片段长度的增加,它对外界低磷环境的响应逐步增加,在-1502 bp时,响应时间短,表达活性高,持续时间长;超过1502 bp其活性不但没有增高,反而变为下降或无变化。推测0至-972 bp为启动子功能区段,-972 bp至-1502 bp为启动功能增强区段。转P_(1502)-ZmPHR1拟南芥的实时定量PCR结果显示,P_(1502)-ZmPHR1既受外界信号的刺激,也受体内基因产物的影响,有反馈调节的作用,是一个受低磷胁迫诱导的强诱导型启动子,它诱导基因表达的功能受体内外磷浓度的调节。该研究为在低磷环境改良作物提供了理想的启动子和应用依据。 展开更多

关键词 玉米 低磷胁迫 强诱导型启动子 P1502-ZmPHR1

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诱导型和组成型启动子对酿酒酵母合成紫杉二烯的影响 被引量：3

17

作者 闫慧芳 丁明珠 元英进 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期4167-4174,共8页

近年来利用合成生物学手段生产萜类化合物逐渐成为一种趋势。诱导型和组成型启动子调控萜类的生产各有利弊,而启动子类型的选择需要根据特定体系和产物来进行具体分析。本工作针对紫杉醇关键前体紫杉二烯的合成,分别研究了酵母细胞中诱... 近年来利用合成生物学手段生产萜类化合物逐渐成为一种趋势。诱导型和组成型启动子调控萜类的生产各有利弊,而启动子类型的选择需要根据特定体系和产物来进行具体分析。本工作针对紫杉醇关键前体紫杉二烯的合成,分别研究了酵母细胞中诱导型启动子和组成型启动子的调控。首先通过过表达酵母内源截短的羟甲戊二酰辅酶A基因(thmgr)和法尼基焦磷酸合酶基因(erg20),实现了对酵母内源模块的调控。随后向改造后的底盘细胞中整合入诱导性启动子调控的外源紫杉二烯合成模块,得到了紫杉二烯产量为5.2mg·L-1的人工酵母。而换用组成型启动子tdh3p调控时,产量达到11.5mg·L-1,说明对于这个体系组成型启动子更为适合。通过简单的发酵条件优化,该菌株产量提升了70%,达到19.5mg·L-1。组成型启动子调控的菌株可以利用葡萄糖作为碳源,因而更利于后续大规模发酵。 展开更多

关键词 紫杉二烯 酵母底盘 功能模块 诱导型启动子 组成型启动子

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病原物诱导型植物启动子的研究方法

18

作者 马睿 陈华民 +2 位作者 吴茂森 吴祖建 何晨阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期32-37,共6页

植物启动子是控制基因转录的DNA序列之一,按其表达方法可分为组成型(或非特异性)表达和诱导型(或特异性)表达启动子两种类型。当受到病原物侵染时,植物通常通过诱导型启动子中的W-box、RAV1 AAT和WRKY等元件/位点、调控下游基因的表达,... 植物启动子是控制基因转录的DNA序列之一,按其表达方法可分为组成型(或非特异性)表达和诱导型(或特异性)表达启动子两种类型。当受到病原物侵染时,植物通常通过诱导型启动子中的W-box、RAV1 AAT和WRKY等元件/位点、调控下游基因的表达,作出相应的应答反应。近年来,通过计算机预测与试验测定方法的有效结合,发掘和鉴定出了一些病原物诱导型启动子,并进行了调控功能的解析。此外,在通过转基因方法改良植物抗病性的途径中,利用病原物诱导型启动子可以实现对抗病功能相关基因表达的精准控制,避免由组成型启动子持续驱动基因表达、对植株本身带来的负效应。结合本室对水稻启动子OsBTF3-p的研究结果,重点对近年来国内外有关病原物诱导型启动子及其调控元件/位点的研究方法和应用进展作一综述。 展开更多

关键词 诱导型启动子 调控元件 转基因途径

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噬菌体展示技术筛选诱导型NOS基因启动子DNA结合蛋白的研究 被引量：2

19

作者 郭风劲 成军 +3 位作者 钟彦伟 刘妍 张黎颖 宋方洲 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期290-292,共3页

目的筛选诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子DNA结合蛋白,探索iNOS基因的表达调控机制。方法应用生物信息学方法确定iNOS基因启动子序列,以PCR扩增iNOS基因启动子DNA片段,构建真核报告载体pCAT3iNOSp,并转染HepG2细胞系,用ELISA法检测... 目的筛选诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子DNA结合蛋白,探索iNOS基因的表达调控机制。方法应用生物信息学方法确定iNOS基因启动子序列,以PCR扩增iNOS基因启动子DNA片段,构建真核报告载体pCAT3iNOSp,并转染HepG2细胞系,用ELISA法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性以明确所得到的DNA片段具有启动子活性;以iNOS基因启动子片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附洗脱扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和蛋白质同源性生物信息学搜索。结果pCAT3iNOSp瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3Basic空载体的4.2倍,说明所得到的DNA片段具有启动子活性;噬菌体经富集后,筛选出12个阳性克隆,成功获得了iNOS基因启动子的DNA结合蛋白编码序列。结论所构建的iNOS基因启动子具有顺式激活下游基因表达的作用;筛选得到的iNOS启动子DNA结合蛋白对于研究iNOS基因的转录调节机制具有重要意义。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 诱导型一氧化氮合酶启动子DNA结合蛋白质类

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水稻稻瘟病菌诱导表达启动子OsQ16p的克隆与功能分析 被引量：6

20

作者 王光 吴智丹 +2 位作者 张磊 刘凤权 邵敏 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期980-987,共8页

qRT-PCR分析表明,日本晴OsQ16基因受稻瘟病菌诱导表达。利用PCR技术从日本晴基因组中克隆了该基因编码区5′端上游1229bp的启动子序列,命名为OsQ16p。用其取代pBI121中gus基因上游的CaMV35S启动子,构建重组表达载体pBIQ16p,经农杆菌介... qRT-PCR分析表明,日本晴OsQ16基因受稻瘟病菌诱导表达。利用PCR技术从日本晴基因组中克隆了该基因编码区5′端上游1229bp的启动子序列,命名为OsQ16p。用其取代pBI121中gus基因上游的CaMV35S启动子,构建重组表达载体pBIQ16p,经农杆菌介导转化日本晴,获得转基因植株。GUS组织化学染色和qRT-PCR分析表明:gus基因在抗性愈伤组织和阳性转基因植株中均能表达;转基因植株在接种稻瘟病菌后12h,GUS表达量是处理前的2.7倍;抗病相关信号分子水杨酸(salicylic acid,SA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)喷施转基因植株叶面后12h,GUS表达量分别为处理前的3.1倍和3.5倍。以上结果表明,OsQ16p启动子具有启动活性,并明显受稻瘟病菌、MeJA和SA诱导表达。 展开更多

关键词 转基因水稻 诱导型启动子 OsQ16p GUS 稻瘟病菌

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