携带可诱导共刺激分子基因的重组腺病毒载体构建及其在小鼠间充质干细胞中的表达 被引量：4

1

作者 王利平 包晓辰 +4 位作者 魏玮 陈洁 邵宇 王健民 钱其军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第9期909-914,共6页

目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS... 目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS)基因的重组腺病毒载体,转染小鼠骨髓MSCs,为转基因治疗提供实验基础。方法设计含有EcoRⅠ、SalⅠ酶切位点的引物,PCR扩增ICOS,将扩增产物克隆到穿梭质粒PDC318上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒pPE3-F11B-EGFP在293细胞中同源重组,筛选获得含有ICOS基因的重组腺病毒质粒,行PCR鉴定。重组腺病毒质粒转染293细胞,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度,并转染小鼠MSCs。结果重组腺病毒质粒经鉴定,证实含有ICOS基因,病毒滴度为6.54×109pfu/ml。转染小鼠MSCs,荧光显微镜下可见较多绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测ICOS表达率为90.16%。结论成功构建了携带小鼠ICOS基因的重组腺病毒载体,并获得高滴度的病毒,能高效转染小鼠MSCs,为后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 腺病毒载体 可诱导共刺激分子 间充质干细胞 基因治疗

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稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定 被引量：2

2

作者 丁庆莉 刘梦蕾 +1 位作者 龙宪连 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期254-258,共5页

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,... 目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株。将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照。结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株。3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P<0.05或P<0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%。结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 重组逆转录病毒载体 转染

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日本血吸虫感染可诱导共刺激分子配体基因敲除小鼠CD154和CD40动态变化及对Th1/Th2偏移的影响 被引量：4

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作者 王瑜 夏超明 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期898-904,共7页

目的:探讨可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)-ICOS配体(ICOS ligand,ICOSL)信号通路对感染日本血吸虫小鼠的CD154、CD40表达及Th1/Th2偏移的影响。方法:建立ICOSL基因敲除(ICOSL knockout,ICOSL-KO)小鼠及野生型C57BL/6J... 目的:探讨可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)-ICOS配体(ICOS ligand,ICOSL)信号通路对感染日本血吸虫小鼠的CD154、CD40表达及Th1/Th2偏移的影响。方法:建立ICOSL基因敲除(ICOSL knockout,ICOSL-KO)小鼠及野生型C57BL/6J小鼠感染日本血吸虫疾病模型,于感染前和感染后4、7、12、16、20周,应用流式细胞术、免疫组织化学法分别检测小鼠脾细胞与肝虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞CD154、CD40的水平;应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠脾细胞经可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导72 h后培养的上清液中γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平及小鼠血清中SEA特异性抗体Ig G、Ig G1、Ig G2a的水平;应用HE染色观察小鼠肝虫卵肉芽肿病变动态变化。结果:感染后4、7、12、16、20周,ICOSL-KO小鼠脾细胞CD154、CD40水平与野生型小鼠相比,显著降低[CD154为(18.62±4.76)%vs.(27.91±3.94)%、(22.44±4.67)%vs.(40.86±5.21)%、(25.50±6.81)%vs.(43.81±8.41)%、(20.22±5.28)%vs.(40.95±7.34)%、(17.87±4.59)%vs.(33.16±6.31)%,皆P<0.01;CD40为(19.43±3.26)%vs.(24.37±3.59)%、(23.00±4.47)%vs.(31.80±5.86)%、(24.46±5.01)%vs.(35.85±5.32)%、(23.42±4.69)%vs.(33.30±6.14)%、(22.85±3.78)%vs.(30.88±5.94)%,皆P<0.05]。感染后7、12、16、20周,ICOSL-KO小鼠肝虫卵肉芽肿炎性浸润细胞CD154、CD40水平与野生型小鼠相比,亦显著降低[CD154为(0.319±0.066)vs.(0.488±0.086)、(0.389±0.067)vs.(0.596±0.082)、(0.378±0.064)vs.(0.543±0.072)、(0.348±0.069)vs.(0.523±0.076),皆P<0.01;CD40为(0.398±0.066)vs.(0.546±0.079)、(0.461±0.085)vs.(0.618±0.076)、(0.453±0.087)vs.(0.587±0.074)、(0.449±0.065)vs.(0.565±0.082),皆P<0.05]。感染后,ICOSL-KO小鼠IFN-γ表达显著高于野生型小鼠(P<0.05),而IL-4表达水平则显著低于野生型小鼠(P<0.05),其Th2分化指数亦显著低于野生型小鼠(P<0.01)。ICOSL-KO小鼠血清SEA特异性抗体Ig G、Ig G1、Ig G2a的水平与Ig G1/Ig G2a的比值亦显著低于野生型小鼠(P<0.01),且ICOSL-KO小鼠的肝虫卵肉芽肿体积显著小于野生型小鼠(P<0.01)。结论:ICOS-ICOSL信号通路在血吸虫病免疫病理中起重要调控作用,其对Th1/Th2偏移的影响可能是通过调控CD154-CD40信号通路来实现的。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 CD40配体 TH1/TH2平衡 日本血吸虫 小鼠 基因敲除

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可诱导共刺激分子和小鼠免疫球蛋白融合基因的分泌表达及生物学活性 被引量：1

4

作者 王健 张军 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期411-415,共5页

目的：为获得重组可诱导共刺激分子胞外段与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白（ICOS-Ig）并研究其生物学活性，以探讨它作为免疫拮抗剂阻断ICOS／B7RP-1共刺激通路的作用。方法：克隆编码人可诱导共刺激分子（ICOS）胞外片段，与编码小鼠免疫... 目的：为获得重组可诱导共刺激分子胞外段与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白（ICOS-Ig）并研究其生物学活性，以探讨它作为免疫拮抗剂阻断ICOS／B7RP-1共刺激通路的作用。方法：克隆编码人可诱导共刺激分子（ICOS）胞外片段，与编码小鼠免疫球蛋白IgG恒定片段（Ig）的基因融合，构建ICOS-Ig融合基因及其分泌型真核表达载体pSecTag2／Hygro A-ICOS-Ig；构建融合蛋白的稳定真核表达细胞株，用Western blot和ELISA法检测其表达、流式细胞仪（FACS）检测其配体结合活性、混合淋巴细胞反应（MLR）及细胞因子检测测定其生物学活性。结果：核苷酸序列测定显示克隆基因的核苷酸与Genebank序列一致：ELISA和Western blot检测表明转染细胞有分泌型重组蛋白的表达，其含量可达5～25μg／ml；该重组蛋白有配体结合活性，可体外抑制淋巴细胞增殖、减少IL-2、IFN-γ的分泌。结论：重组ICOS-Ig融合基因及其真核表达载体的构建完成并获得高效表达，该重组蛋白具有配体结合活性，可在体外通过抑制ICOS／B7RP-1共刺激通路抑制淋巴细胞增殖及细胞因子分泌。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 pSecTag2/Hygro A 融合蛋白 真核表达

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可诱导共刺激分子在川崎病患儿外周血T淋巴细胞的表达 被引量：1

5

作者 马颐姣 李永柏 +1 位作者 杨军 王国兵 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期749-751,共3页

目的探讨可诱导共刺激分子(ICOS)在川崎病(KD)及KD伴有冠状动脉损害,IVIG非敏感型KD发病机制中的作用。方法应用荧光定量PCR检测48例KD组和30例KD IVIG治疗组ICOSmRNA表达的变化。同时以25例同龄健康儿童和20例急性支气管肺炎患儿作为... 目的探讨可诱导共刺激分子(ICOS)在川崎病(KD)及KD伴有冠状动脉损害,IVIG非敏感型KD发病机制中的作用。方法应用荧光定量PCR检测48例KD组和30例KD IVIG治疗组ICOSmRNA表达的变化。同时以25例同龄健康儿童和20例急性支气管肺炎患儿作为对照。结果 KD组与对照相比,ICOSmRNA表达显著升高(17.97±7.22对8.01±5.15,P<0.01)。其中冠状动脉损害组较无冠状动脉损害组ICOS表达异常升高(29.09±10.55对11.68±5.11,P<0.01)。KD IVIG组与KD组比较,ICOSmRNA表达降低(13.03±5.15对17.97±7.22,P<0.05)。其中IVIG不敏感组与IVIG敏感组比较,ICOS表达显著升高(21.57±6.22对9.85±5.89,P<0.05)。结论 B7/CD28家族分子中正性调节因子ICOS过度表达可能是导致KD免疫失衡的原因之一,正性调节因子过度表达可能与KD冠状动脉损害有关。IVIG治疗在纠正KD淋巴细胞过度活化中发挥作用,同时可能有下调正性调控因子表达的作用。 展开更多

关键词 川崎病 可诱导共刺激分子 B7/CD28家族

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T细胞可诱导共刺激分子配体胞外段基因的克隆与表达 被引量：1

6

作者 汲翔 郭勋 +2 位作者 范丹丹 康巧珍 袁维堂 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2020年第2期233-236,共4页

目的:克隆T细胞可诱导共刺激分子配体胞外段(ICOSL-N)基因,构建pET22b-ICOSL-N-Ig原核表达载体,实现ICOSL-N与IgG4体外融合表达。方法:设计并合成T细胞ICOSL-N和IgG4基因特异性引物,RT-PCR法从小鼠脾脏中克隆出ICOSL-N,PCR重叠延伸技术... 目的:克隆T细胞可诱导共刺激分子配体胞外段(ICOSL-N)基因,构建pET22b-ICOSL-N-Ig原核表达载体,实现ICOSL-N与IgG4体外融合表达。方法:设计并合成T细胞ICOSL-N和IgG4基因特异性引物,RT-PCR法从小鼠脾脏中克隆出ICOSL-N,PCR重叠延伸技术将ICOSL-N与IgG4基因融合,构建原核表达载体pET22b-ICOSL-N-Ig,转化E.coli BL21(DE3)工程菌,筛选鉴定阳性克隆,IPTG诱导阳性重组子,SDS-PAGE法鉴定融合蛋白ICOSL-N-Ig的表达。结果:融合基因ICOSL-N-Ig的PCR扩增产物大小约1425 bp,符合理论值;原核表达载体pET22b-ICOSL-N-Ig经酶切、PCR和测序鉴定结果符合预期;在诱导后的菌体中检测出大小为53800的蛋白诱导条带,且与目标蛋白的大小一致。结论:成功克隆ICOSL-N基因,实现ICOSL-N在E.coli BL21(DE3)工程菌中与IgG4的融合表达。 展开更多

关键词 T细胞可诱导共刺激分子 可诱导共刺激分子配体

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可诱导共刺激分子诱导骨髓来源不成熟树突状细胞特异性分泌IL-6

7

作者 唐古生 吴君 +1 位作者 丁庆莉 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期220-227,共8页

目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)能否向不成熟DCs传递逆向信号及其性质。方法:以流式细胞仪结合特异性抗体检测DCs表型分子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以RT-PCR检测各组DCs细胞内细胞因子及受体、趋... 目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)能否向不成熟DCs传递逆向信号及其性质。方法:以流式细胞仪结合特异性抗体检测DCs表型分子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以RT-PCR检测各组DCs细胞内细胞因子及受体、趋化因子等mRNA表达水平。结果:ICOSIg或膜锚定ICOS作用于不成熟DCs,均可诱导其高表达MHC-Ⅱ、CD80、CD86和CD83等表型分子;促进DCs特异性分泌IL-6。结论:ICOS作用于不成熟DCs表面的ICOSL可以向DCs细胞传递逆向信号,诱导DCs细胞高分泌IL-6,同时其表面重要的表型分子也上调,可能参与了DCs细胞免疫功能的调节,其信号转导机制可能涉及p38-MAPK通路。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 不成熟树突状细胞 逆向信号 IL-6

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人可诱导共刺激分子胞外片段和小鼠免疫球蛋白Ig融合基因的表达及生物学活性鉴定

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作者 王健 张军 +1 位作者 张燕 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期305-309,共5页

目的:探讨用基因工程方法表达的人可诱导共刺激分子(ICOS)与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白竞争抑制ICOS B7RP1共刺激通路的作用。方法:以RT PCR方法克隆编码人ICOS胞外片段,与编码小鼠免疫球蛋白IgG恒定片段(Ig)的基因融合,构建携带融合基... 目的:探讨用基因工程方法表达的人可诱导共刺激分子(ICOS)与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白竞争抑制ICOS B7RP1共刺激通路的作用。方法:以RT PCR方法克隆编码人ICOS胞外片段,与编码小鼠免疫球蛋白IgG恒定片段(Ig)的基因融合,构建携带融合基因的高效真核表达载体pcDNA4/HisMAX A ICOS Ig。采用脂质体法转染CHO细胞,用Western印迹法检测稳定表达细胞中融合基因的表达,流式细胞术检测重组蛋白的配体结合活性。以适当浓度的重组融合蛋白作为拮抗剂与BALB/c和C57BL小鼠脾单个核细胞进行混合培养,观察重组蛋白在体外抑制淋巴细胞增殖的效果。结果:构建了携带融合基因的高效真核表达载体pcDNA4/HisMAX A ICOS Ig; Western印迹法检测表明转染细胞有重组蛋白的表达;流式细胞术分析显示重组蛋白有配体表达细胞的结合活性;该重组融合蛋白作为拮抗剂可体外抑制混合淋巴细胞增殖。结论:构建并成功表达了ICOS Ig融合基因高效真核表达载体;该重组蛋白具有配体结合活性,可在体外通过抑制ICOS B7RP 1共刺激通路抑制淋巴细胞增殖。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 龟疫球蛋白 融合基因 基因表达

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可诱导共刺激分子参与自发性高血压大鼠肠系膜血管内皮-间质转化及硬化

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作者 都昌乐 王瑜 +3 位作者 付计锋 曹冬黎 梅仁彪 张奇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期308-316,共9页

目的 探究可诱导共刺激分子(ICOS)与自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜血管内皮-间质转化(EndMT)及硬化的相关性。方法4周龄SHR大鼠(观察组)及同品系WKY大鼠(对照组)各20只,各组再随机分为4组,5只/组。无创血压测量仪动态监测各组大鼠血压情... 目的 探究可诱导共刺激分子(ICOS)与自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜血管内皮-间质转化(EndMT)及硬化的相关性。方法4周龄SHR大鼠(观察组)及同品系WKY大鼠(对照组)各20只,各组再随机分为4组,5只/组。无创血压测量仪动态监测各组大鼠血压情况,并于4、6、10、30周龄进行实验。采用流式细胞术检测大鼠脾脏CD4+T细胞的ICOS表达频数;RT-PCR法检测大鼠肠系膜中ICOS、VE-cad、α-SMA、Col3 m RNA表达;免疫组化技术检测大鼠肠系膜血管VE-cad、α-SMA、Col3及淋巴组织中ICOS、IL-17A、TGF-β的分布情况;ELISA法检测大鼠血浆中IL-17A、TGF-β含量水平;Masson染色观察大鼠肠系膜血管形态变化;Spearman和Pearson相关分析评价ICOS与VE-cad、α-SMA、Col3及胶原容积分数的相关性。结果 SHR大鼠自6周龄开始,与对照组相比收缩压增高(P<0.05);CD4+T细胞ICOS的表达频数高于同期对照组(P<0.05);肠系膜组织中ICOS、α-SMA、Col3、IL-17A和TGF-β的mRNA及蛋白表达相较于对照组均升高(P<0.05),VE-cad mRNA及蛋白则在10周龄时表达下降(P<0.05);自6周龄始SHR大鼠血浆中IL-17A、TGF-β含量水平提升(P<0.05);肠系膜血管硬化程度不断加剧(P<0.05);肠系膜组织中ICOS mRNA及蛋白表达水平与α-SMA、Col3表达水平和血管硬化程度自6周龄始均呈正相关(P<0.05),与VE-cad表达水平自10周龄始呈负相关(P<0.05)。结论 ICOS可能通过介导相关免疫反应在高血压肠系膜血管EndMT及硬化过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 高血压 内皮-间质转化 血管硬化

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可诱导共刺激分子介导的Th17细胞极化对自发性高血压大鼠肾纤维化的影响 被引量：4

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作者 王瑜 王博士 +3 位作者 惠旭 乔君 李委振 孙楠 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期534-540,共7页

目的探讨可诱导共刺激分子(ICOS)介导的Th17细胞极化在原发性高血压肾损害中的作用。方法 4周龄的自发性高血压大鼠(SHR)随机分为SHR-C组及SHR-I组,分别用0.01 mol/L磷酸缓冲盐溶液(PBS)、ICOS阻断型单克隆抗体干预2周。采用无创尾动脉... 目的探讨可诱导共刺激分子(ICOS)介导的Th17细胞极化在原发性高血压肾损害中的作用。方法 4周龄的自发性高血压大鼠(SHR)随机分为SHR-C组及SHR-I组,分别用0.01 mol/L磷酸缓冲盐溶液(PBS)、ICOS阻断型单克隆抗体干预2周。采用无创尾动脉血压测量仪动态监测大鼠的血压。采用流式细胞技术分析大鼠脾淋巴细胞中Th17细胞的频数变化。RT-PCR法动态检测大鼠肾脏中IL-17A m RNA的表达水平。采用免疫组化技术及ELISA法动态检测大鼠肾脏及血浆中IL-17A和TGF-β1的表达水平。采用Masson染色检测大鼠肾脏病理改变情况。结果 SHR-C组大鼠从第10周始血压显著高于同期的SHR-I组大鼠(P<0.05或P<0.01)。从6周始SHR-C组的大鼠Th17细胞频数显著高于同期SHR-I组(P<0.05)。SHR-C组的大鼠肾脏中IL-17A m RNA表达亦显著高于同期SHR-I组(P<0.05),且其血浆和肾脏中IL-17A、TGF-β1的表达显著高于同期SHR-I组(P<0.05)。与SHR-C组相比,SHR-I组的大鼠肾脏纤维化程度降低,在30周两者差异具有显著性(P<0.05)。结论由ICOS介导的Th17细胞极化在高血压导致的肾纤维化中起重要作用。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 TH17细胞 自发性高血压大鼠 肾纤维化

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可诱导共刺激分子与自身免疫性葡萄膜炎

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作者 杨乐(综述) 邢琳(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期682-686,共5页

可诱导共刺激分子（ICOS）是共刺激分子CD28超家族的一员，大量表达于活化后的T细胞表面，与相应配体（ICOSL）结合后产生共刺激信号，促进活化后的T细胞增生、分化以及细胞因子的产生。临床研究和实验研究均表明，ICOS在多种自身免疫... 可诱导共刺激分子（ICOS）是共刺激分子CD28超家族的一员，大量表达于活化后的T细胞表面，与相应配体（ICOSL）结合后产生共刺激信号，促进活化后的T细胞增生、分化以及细胞因子的产生。临床研究和实验研究均表明，ICOS在多种自身免疫性疾病中发挥重要作用，在自身免疫性葡萄膜炎（AIU）和Behcet病的发病和转归过程中，ICOS／ICOSL共刺激通路通过调节T淋巴细胞的效应因子影响病变的严重程度。因此进一步研究ICOS／ICOSL共刺激通路在AIU中的作用机制对于寻找新的AIU治疗途径有重要意义。就ICOS的基本概念、ICOS／ICOSL共刺激通路与效应细胞的关系及其在AIU治疗中的展望进行综述。 展开更多

关键词 自身免疫性葡萄膜炎 可诱导共刺激分子 辅助性T细胞 调节性T细胞

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大鼠角膜移植后颌下淋巴结中可诱导共刺激分子的表达

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作者 陈晓敏 张明昌 胡燕华 《眼科新进展》 CAS 2008年第8期569-572,577,共5页

目的探讨可诱导的共刺激分子(inducible costimulatory,ICOS)在大鼠角膜移植后颌下淋巴结(submandibular lymph nodes,SMLN)中的表达和意义。方法采用RT-PCR、蛋白免疫印迹分析检测大鼠角膜移植后SMLN中ICOS mRNA和蛋白的表达;免疫组织... 目的探讨可诱导的共刺激分子(inducible costimulatory,ICOS)在大鼠角膜移植后颌下淋巴结(submandibular lymph nodes,SMLN)中的表达和意义。方法采用RT-PCR、蛋白免疫印迹分析检测大鼠角膜移植后SMLN中ICOS mRNA和蛋白的表达;免疫组织化学法检测ICOS蛋白在SMLN中的表达部位。结果ICOS在正常的SMLN中无表达;同种异体角膜移植组术后SMLN中的ICOS mRNA转录及蛋白的表达从第1天起即呈明显上升趋势,第7天达到高峰,分别从第5天和第3天开始,同一时间点上的表达水平在同种异体移植组明显高于自体移植组,自体移植组和异体移植组术后第5天、7天、14天SMLN中ICOS mRNA的相对表达量分别为0.2419和0.4907、0.2022和0.7348、0.1339和0.3190;术后第3天、7天、14天ICOS蛋白的相对表达量分别为0.2308和0.3957、0.1028和0.8366、0.0476和0.3966,差异有显著统计学意义(P<0.01);免疫组织化学显示同种异体角膜移植术后ICOS阳性表达见于SMLN的副皮质区,位于细胞胞浆中,表现为胞浆和胞膜呈棕黄色。结论同种异体角膜移植术后ICOS在SMLN中表达较对照组明显升高,可能在同种异体角膜术后的排斥反应中起到重要作用。 展开更多

关键词 颌下淋巴结 同种异体移植 自体移植 可诱导的共刺激分子

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诱导性共刺激分子靶点用于小鼠佐剂诱导型关节炎模型的可行性

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作者 汪嘉晨 邵帅铭 +2 位作者 荆承玮 陈枫涛 闫峰 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2024年第7期986-991,共6页

目的观察诱导性共刺激分子(ICOS)靶点用于小鼠佐剂诱导型关节炎(AIA)模型的可行性。方法选取20只BALB/c小鼠,于右后爪分别注射等剂量完全弗氏佐剂(AIA组,n=10)或磷酸盐缓冲液(对照组,n=10),之后经尾静脉分别注射ICOS-IRD680 mAb探针(AIA... 目的观察诱导性共刺激分子(ICOS)靶点用于小鼠佐剂诱导型关节炎(AIA)模型的可行性。方法选取20只BALB/c小鼠,于右后爪分别注射等剂量完全弗氏佐剂(AIA组,n=10)或磷酸盐缓冲液(对照组,n=10),之后经尾静脉分别注射ICOS-IRD680 mAb探针(AIA组)或IgG-IRD680 mAb探针对照组,比较24及48 h后2组近红外荧光成像右爪与左爪荧光强度比值;提取小鼠总RNA行转录组测序,筛选并分析差异表达基因。针对对照组提取脾脏原代T细胞并分选磁珠阴性T细胞,以佛波酯/离子霉素刺激、诱导活化T细胞形成,检测其表面ICOS蛋白表达水平,并进行安全性评价。结果相比对照组,AIA组ICOS基因表达显著上调、T细胞占比增高,FoxP3+调节性T细胞、CD8+T细胞及CD4+T细胞中ICOS分布较多。对照组分选磁珠阴性T细胞前、后CD3+T细胞纯度分别为65.31%和90.14%;其中,ICOS蛋白阳性小鼠CD4+T细胞在活化前、后占比分别为7.14%及31.20%,且活化CD4+T细胞ICOS蛋白平均荧光强度(586±25)显著高于未活化者(161±31)(t=25.390,P<0.001)。注射探针后24及48 h,AIA组右爪/左爪荧光强度比值均高于对照组(t=34.600、P<0.001;t=23.380、P<0.001)。相比对照组,AIA组小鼠心、肝、肾组织未见明显病理改变,且组间血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肌酐无明显差异(P均>0.05)。结论ICOS靶点用于小鼠AIA模型安全、可行。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 光学成像 诱导性共刺激分子

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诱导性共刺激分子表达与原因不明复发性流产的相关性研究 被引量：3

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作者 魏嘉 赵爱民 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期642-645,共4页

目的探讨诱导性共刺激分子(ICOS)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法采集10例诊断为难免流产的URSA患者(URSA组)和10例正常早孕妇女(正常对照组)的部分蜕膜组织和外周血,采用流式细胞术检测蜕膜组织和外周血CD3+和CD4+T细胞... 目的探讨诱导性共刺激分子(ICOS)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法采集10例诊断为难免流产的URSA患者(URSA组)和10例正常早孕妇女(正常对照组)的部分蜕膜组织和外周血,采用流式细胞术检测蜕膜组织和外周血CD3+和CD4+T细胞中ICOS的表达;Real-Time PCR检测蜕膜组织中ICOS mRNA的表达情况。结果 URSA组蜕膜组织中ICOS+CD3+T淋巴细胞亚群所占百分比为(0.612±0.693)%,显著高于正常对照组的(0.056±0.103)%,差异有统计学意义(P<0.001)。URSA组外周血ICOS+CD4+T淋巴细胞亚群所占百分比为(1.943±0.762)%,显著高于正常对照组的(0.221±0.127)%,差异有统计学意义(P<0.001)。URSA组蜕膜组织中ICOS mRNA的相对表达量较正常对照组显著升高[(9.875±1.464)vs(2.701±1.737)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论蜕膜组织中ICOS的表达异常与URSA的发病具有密切关系。 展开更多

关键词 诱导性共刺激分子 原因不明复发性流产 蜕膜 外周血

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ICOS和PD1共刺激分子的免疫学作用 被引量：2

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作者 丁涵露 吴雄飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期83-85,共3页

关键词 ICOS PD-1 可诱导共刺激分子 免疫学 致敏 免疫干预 T淋巴细胞 程序性死亡 信号途径 受体介导

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阻断诱导型共刺激分子信号通路对小鼠急性移植物抗宿主病的影响

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作者 王继承 朱其聪 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期56-60,共5页

目的：观察以诱导型共刺激分子（inducible costimulator，ICOS）融合蛋白阻断ICOS-B7H途径对小鼠急性移植物抗宿主病（acute graft-versus—host disease，aGVHD）的作用。方法：建立以C57BL／6鼠为供体、致死剂量照射的BALB／c鼠为受... 目的：观察以诱导型共刺激分子（inducible costimulator，ICOS）融合蛋白阻断ICOS-B7H途径对小鼠急性移植物抗宿主病（acute graft-versus—host disease，aGVHD）的作用。方法：建立以C57BL／6鼠为供体、致死剂量照射的BALB／c鼠为受体的aGVHD模型，分别在移植0、2、4、8d后腹腔注射100Ixg的ICOS-Ig，以注射同剂量的人Ig（h—Is）作为对照。观察小鼠体重、生存率及临床GVHD症状的改变；移植4d后取小鼠脾脏单个核细胞，流式细胞术检测H一2Kd—CD4＋及H-2Kd—CD8＋细胞的CFSE强度，确定供体T淋巴细胞的增殖率；移植10d后采用Annexin—V及PI试剂盒检测供体H-2Kd—CD4及H-2Kd—CD8＋细胞的凋亡率。结果：ICOS-Ig干预可有效减轻小鼠aGVHD的严重程度，ICOS—Ig组小鼠的生存时间比h-Ig组显著延长[（20．0±3．1）vs（10．0±2．1）d，P=0．0217，n=14]，其肠道黏膜病变及肝脏汇管区淋巴细胞浸润明显减少。移植3d后，ICOS-Ig组和h·Ig组小鼠的CD4＋CFSE-和CD8＋CFSE-细胞群比例无明显差异[（98．88±0．76）％铘（99．71±0．27）％，（98．62±0．63）％椰（99．53±0．51）％，P〉0．05]；ICOS—Ig增加了体内异基因CD8＋T淋巴细胞的凋亡率[（15．7±9．59）％掷（25．92±5．66）％，P=0．032]，不影响异基因CD4＋T细胞的凋亡率[（15．72±7．34）％vs（22．78±6．94）％，P=0．078]。结论：阻断ICOS—B7H通路可促进活化的T淋巴细胞凋亡，减轻造血干细胞移植治疗血液肿瘤中发生的aGVHD的严重程度。 展开更多

关键词 诱导型共刺激分子 移植物抗宿主病 CD4+T淋巴细胞 CD8+T淋巴细胞 凋亡 血液肿瘤

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ICOS共刺激通路参与角膜移植免疫排斥反应的研究 被引量：6

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作者 袁伟 陆晓和 +3 位作者 宫玉波 周瑾 杨旭冉 汤明芳 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第4期275-278,共4页

目的研究可诱导共刺激分子(ICOS)共刺激通路与角膜移植急性免疫排斥反应的关系。方法建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型,分别于术后7d、14d取植片进行病理学观察,采用RT-PCR法检测植片组织ICOS mRNA的表达情况,免疫组织化学法检测植片... 目的研究可诱导共刺激分子(ICOS)共刺激通路与角膜移植急性免疫排斥反应的关系。方法建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型,分别于术后7d、14d取植片进行病理学观察,采用RT-PCR法检测植片组织ICOS mRNA的表达情况,免疫组织化学法检测植片组织淋巴细胞ICOS蛋白水平;同时采用流式细胞术检测外周血CD3+ICOS+T/CD3+T的表达情况。均以正常大鼠作为正常对照。结果正常大鼠角膜组织未检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,移植术后植片组织可以检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,且术后14d高于术后7d(P=0.000);与正常大鼠外周血CD3+ICOS+T/CD3+T的表达相比术后表达皆升高(方差齐性,P=0.156),且术后14d外周血CD3+ICOS+T/CD3+T的表达高于术后7d的表达(P=0.000)。结论共刺激分子ICOS与角膜移植急性免疫排斥反应密切相关。 展开更多

关键词 角膜移植 排斥反应 可诱导共刺激分子

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ICOS/ICOSL逆向信号诱导成熟过程中树突状细胞特异性分泌TGF-β1 被引量：1

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作者 唐古生 张薇薇 +1 位作者 吴君 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期502-506,510,共6页

目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)能否向成熟过程中树突状细胞(DCs)传递逆向信号及其对DCs功能的影响。方法:取小鼠骨髓细胞,体外诱导培养、纯化第5天不成熟DCs,以ICOSIg或对照IgG加LPS或CpG处理后,流式细胞仪检测DCs表型分子、吞噬功... 目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)能否向成熟过程中树突状细胞(DCs)传递逆向信号及其对DCs功能的影响。方法:取小鼠骨髓细胞,体外诱导培养、纯化第5天不成熟DCs,以ICOSIg或对照IgG加LPS或CpG处理后,流式细胞仪检测DCs表型分子、吞噬功能及胞内细胞因子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以[3H]-TdR掺入法探讨DCs抗原递呈功能。结果:与IgG对照组相比,ICOSIg联合LPS或CpG处理组DCs分泌TGF-β1的表达明显升高;ICOSIg作用于成熟过程中DCs,其吞噬功能与对照IgG相比近似或略有增强,但其抗原递呈功能受到部分抑制,可引起T细胞中IL-2、IL-10明显升高。结论:ICOS作用于成熟过程中的DCs后,促进DCs特异性分泌TGF-β1、部分抑制了DCs的抗原递呈功能,其机制可能是诱导了产IL-10 CD4+T细胞的生成;这种反向信号在不同机制诱导DCs成熟的过程中均可能存在。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 成熟树突状细胞 反向信号 TGF-Β1

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白塞病患者外周血CD4^+和CD8^+ T细胞上ICOS与CD28共表达水平及与疾病的关系 被引量：1

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作者 樊超 陈宏翔 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期718-721,共4页

目的研究白塞病(Behcet’s disease,BD)患者外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞上ICOS(inducible costimulatory molecule,ICOS)与CD28共表达水平及与疾病的关系。方法采用流式细胞术检测BD患者(n=22),包括BD活动期(active BD,ABD)患者(n=14)... 目的研究白塞病(Behcet’s disease,BD)患者外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞上ICOS(inducible costimulatory molecule,ICOS)与CD28共表达水平及与疾病的关系。方法采用流式细胞术检测BD患者(n=22),包括BD活动期(active BD,ABD)患者(n=14)和BD稳定期(stable BD,SBD)患者(n=8),以及健康体检者(n=22)外周血CD4^+T细胞及CD8^+T细胞上ICOS与CD28共表达水平。结果 ABD患者外周血CD28^+ICOS^+CD4^+T细胞的比例较正常对照明显上升[(34.72±12.87)%vs.(25.36±8.24)%,P<0.05],CD28^+ICOS^+CD8^+T细胞的比例与正常对照相比无明显改变[(9.32±4.57)%vs.(7.24±3.36)%,P>0.05];ABD患者外周血CD28^-ICOS^+CD4^+T细胞的比例较正常对照明显升高[(2.54±1.63)%vs.(0.76±0.25)%,P<0.05];ABD患者CD28^-ICOS^+CD8^+T细胞的比例较正常对照也明显升高[(8.79±3.41)%vs.(3.04±1.25)%,P<0.05]。结论 ICOS在BD患者外周血T细胞亚群中表达水平的增高在一定程度上独立于CD28分子,提示患者体内仅表达ICOS分子的细胞同样也可能在发病过程中发挥重要作用,为BD的治疗提供了相应的理论依据。 展开更多

关键词 白塞病 可诱导共刺激分子 细胞表面分子

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ICOS在健康人外周血调节性T细胞上的生物学特征初探 被引量：5

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作者 程莎 高基民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1753-1757,共5页

目的:研究ICOS在健康人外周血Treg离体培养中的作用,了解m TOR对离体培养Treg ICOS表达的调控。方法:MACS分选Treg后经anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激后第3、7天流式检测Treg表面ICOS表达情况;anti-CD3+anti-CD28抗体或anti-CD3+ICOSL-Fc刺... 目的:研究ICOS在健康人外周血Treg离体培养中的作用,了解m TOR对离体培养Treg ICOS表达的调控。方法:MACS分选Treg后经anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激后第3、7天流式检测Treg表面ICOS表达情况;anti-CD3+anti-CD28抗体或anti-CD3+ICOSL-Fc刺激3 d,流式检测Treg ICOS表达情况;雷帕霉素处理离体培养Treg,流式分析其对Treg ICOS表达作用。CFSE标记人PBMC细胞,并与离体培养Treg混合培养,流式检测Treg的接触抑制活性。结果:anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激Treg 3 d,ICOS+Treg中活、死细胞的比例分别为(92.00±2.69)%和(2.20±0.56)%,在ICOS-Treg中比例为(90.30±3.53)%和(1.77±0.78)%,两者无显著差异;培养第7天,ICOS+Treg细胞比例从第3天(40.20±1.83)%降至(11.60±1.10)%;anti-CD3+ICOSL-FC刺激Treg 3 d后,ICOS MFI为(403.30±74.42),anti-CD3+anti-CD28刺激组为(2 410.0±746.4),anti-CD3+ICOSL-FC刺激后Treg ICOS表达相比anti-CD3+anti-CD28组显著下降;雷帕霉素处理离体培养Treg细胞3 d后,ICOS表达下调。此外,雷帕霉素处理的离体培养Treg均能有效抑制PBMC中Tcon的分裂增殖。结论:ICOS表达高低对人外周血Treg存活率影响无显著差异,m TOR信号并非调控人Treg离体培养ICOS表达的唯一因素,CD28协同信号对调控离体培养人Treg。表达比ICOSL信号更为重要,雷帕霉素处理的离体培养人Treg仍具有细胞接触抑制活性。 展开更多

关键词 人调节性T细胞 雷帕霉素 可诱导共刺激分子 可诱导共刺激分子配体

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