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小鼠胚胎干细胞条件培养液培养的人角膜内皮细胞在脱细胞猪角膜基质上单层细胞片的构建
被引量：
1
1
作者
鹿晓燕
王智崇
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期705-709,共5页
背景 目前角膜供体来源短缺,且体外培养的人角膜内皮细胞（HCECs）难以再生和扩增,为临床上角膜移植的开展带来了很大困难,组织工程角膜的构建仍是研究的主要课题.前期研究已证实,小鼠胚胎干细胞条件培养基（ESC-CM）能够促进体外HCECs...
背景 目前角膜供体来源短缺,且体外培养的人角膜内皮细胞（HCECs）难以再生和扩增,为临床上角膜移植的开展带来了很大困难,组织工程角膜的构建仍是研究的主要课题.前期研究已证实,小鼠胚胎干细胞条件培养基（ESC-CM）能够促进体外HCECs的增生,脱细胞猪角膜基质（APCS）是较好的支架材料,但ESC-CM培养的HCECs是否能在APCS上融合成单层细胞鲜见研究. 目的 研究ESC-CM培养的HCECs在APCS上是否能够形成单层细胞. 方法 用小鼠ESC-CM培养液培养小鼠ES-E14细胞,收集培养上清液,离心后按体积比1∶3与人角膜内皮细胞培养液（CEM）混合,制备体积分数25％ ESC-CM液.取穿透角膜移植术后剩余的供体人角巩膜缘组织,采用组织块培养法用ESC-CM对HCECs进行培养和传代,采用逆转录PCR法检测HCECs中Ⅷ型胶原蛋白（ColⅧ）与神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达以鉴定细胞.取猪角膜,利用磷脂酶A2和碳酸氢盐溶液脱细胞法制备APCS,将第2代HCECs混合液按照800/mm2的密度种植于灭菌的APCS上进行培养,于倒置相差显微镜下观察细胞形态,采用苏木精-伊红染色法观察培养细胞的组织结构;采用免疫荧光法检测构建的HCECs单细胞片中闭锁小带蛋白-1（ZO-1）和Na＋-K＋-ATP酶的表达. 结果 体外培养的HCECs呈典型的六角形,内皮特异性标志物ColⅧ和NSE mRNA表达阳性.脱细胞APCS呈白色透明状,苏木精-伊红染色显示APCS中无角膜细胞,但角膜胶原纤维排列规则.第2代HCECs复水后可在APCS上生长并贴附,培养后7d融合成单层细胞片,细胞片上HCECs的细胞密度为（2 694± 143）/mm2.构建的HCECs片中内皮细胞泵功能相关蛋白ZO-1和Na＋-K＋-ATP酶均呈阳性表达,呈红色荧光. 结论 25％ESC-CM可促进HCECs的生长并维持细胞的正常形态,APCS可为HCECs片的构建提供支架和较好的生存微环境.在APCS形成的HCECs单细胞片可表达HCECs泵功能,是角膜移植的良好供体.
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关键词
角膜基质/移植
角膜
内皮细胞
人
组织工程/方法
组织支架
条件培养液
小鼠胚胎干细胞
猪脱细胞
角膜
基
质
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职称材料
题名
小鼠胚胎干细胞条件培养液培养的人角膜内皮细胞在脱细胞猪角膜基质上单层细胞片的构建
被引量：
1
1
作者
鹿晓燕
王智崇
机构
郑州大学第一附属医院眼科
中山大学中山眼科中心、眼科学国家重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期705-709,共5页
文摘
背景 目前角膜供体来源短缺,且体外培养的人角膜内皮细胞（HCECs）难以再生和扩增,为临床上角膜移植的开展带来了很大困难,组织工程角膜的构建仍是研究的主要课题.前期研究已证实,小鼠胚胎干细胞条件培养基（ESC-CM）能够促进体外HCECs的增生,脱细胞猪角膜基质（APCS）是较好的支架材料,但ESC-CM培养的HCECs是否能在APCS上融合成单层细胞鲜见研究. 目的 研究ESC-CM培养的HCECs在APCS上是否能够形成单层细胞. 方法 用小鼠ESC-CM培养液培养小鼠ES-E14细胞,收集培养上清液,离心后按体积比1∶3与人角膜内皮细胞培养液（CEM）混合,制备体积分数25％ ESC-CM液.取穿透角膜移植术后剩余的供体人角巩膜缘组织,采用组织块培养法用ESC-CM对HCECs进行培养和传代,采用逆转录PCR法检测HCECs中Ⅷ型胶原蛋白（ColⅧ）与神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达以鉴定细胞.取猪角膜,利用磷脂酶A2和碳酸氢盐溶液脱细胞法制备APCS,将第2代HCECs混合液按照800/mm2的密度种植于灭菌的APCS上进行培养,于倒置相差显微镜下观察细胞形态,采用苏木精-伊红染色法观察培养细胞的组织结构;采用免疫荧光法检测构建的HCECs单细胞片中闭锁小带蛋白-1（ZO-1）和Na＋-K＋-ATP酶的表达. 结果 体外培养的HCECs呈典型的六角形,内皮特异性标志物ColⅧ和NSE mRNA表达阳性.脱细胞APCS呈白色透明状,苏木精-伊红染色显示APCS中无角膜细胞,但角膜胶原纤维排列规则.第2代HCECs复水后可在APCS上生长并贴附,培养后7d融合成单层细胞片,细胞片上HCECs的细胞密度为（2 694± 143）/mm2.构建的HCECs片中内皮细胞泵功能相关蛋白ZO-1和Na＋-K＋-ATP酶均呈阳性表达,呈红色荧光. 结论 25％ESC-CM可促进HCECs的生长并维持细胞的正常形态,APCS可为HCECs片的构建提供支架和较好的生存微环境.在APCS形成的HCECs单细胞片可表达HCECs泵功能,是角膜移植的良好供体.
关键词
角膜基质/移植
角膜
内皮细胞
人
组织工程/方法
组织支架
条件培养液
小鼠胚胎干细胞
猪脱细胞
角膜
基
质
Keywords
Corneal stroma/transplantation
Endothelial cells,corneal/cytology
Humans
Tissue engineering/methods
Tissue scaffolds
Culture media,conditioned
Embryonic stem cells,mouse
Acellular corneal stroma,porcine
分类号
R779.65 [医药卫生—眼科]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
小鼠胚胎干细胞条件培养液培养的人角膜内皮细胞在脱细胞猪角膜基质上单层细胞片的构建
鹿晓燕
王智崇
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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