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角毛壳菌木聚糖酶基因xyn24在毕赤酵母中的高效表达及产酶的固定化研究
被引量：
2
1
作者
王艳君
杨谦
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期29-35,共7页
以生防真菌角毛壳菌(Chaetomium cupreum)菌丝体时期的基因文库为基础,筛选得到编码木聚糖酶基因的片段,经拼接及RT-PCR扩增得到全长690bp的编码β-1,4-木聚糖酶基因序列,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达的木聚...
以生防真菌角毛壳菌(Chaetomium cupreum)菌丝体时期的基因文库为基础,筛选得到编码木聚糖酶基因的片段,经拼接及RT-PCR扩增得到全长690bp的编码β-1,4-木聚糖酶基因序列,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达的木聚糖酶重组载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,表达蛋白分泌到培养基中,分子质量约为19.4 ku;以水溶性壳聚糖为底物测得酶活为2.72 U/mL。SDS及金属离子Mn2+对酶活性具有较强的激活作用;转化子经10代传代培养后酶活性稳定。通过制备的壳聚糖微球对木聚糖酶进行了固定化研究,并与游离酶的性质进行了比较。结果表明:固定化酶的最适pH范围与游离酶相比向酸性方向偏移;固定化酶的最适反应温度、酸碱稳定性及热稳定性均有所提高。
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关键词
角毛壳菌
木聚糖酶
毕赤酵母
固定化
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职称材料
以抗生素抗性为选择标记的毛壳菌种间原生质体融合
被引量：
1
2
作者
谭悠久
谭红
+1 位作者
周金燕
赵明
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期36-41,共6页
以抗生素抗性为选择标记进行角毛壳菌和球毛壳菌种间原生质体融合。角毛壳菌CH21－I－402菌株对潮霉素有抗性、对G418敏感，球毛壳菌CH08对潮霉素和G418敏感。根癌农杆菌介导的新霉素磷酸转移酶基因转化球毛壳菌，得到成功转化新霉素磷...
以抗生素抗性为选择标记进行角毛壳菌和球毛壳菌种间原生质体融合。角毛壳菌CH21－I－402菌株对潮霉素有抗性、对G418敏感，球毛壳菌CH08对潮霉素和G418敏感。根癌农杆菌介导的新霉素磷酸转移酶基因转化球毛壳菌，得到成功转化新霉素磷酸转移酶基因的球毛壳菌菌株，转化子对G418抗性提高3～4倍，对潮霉素仍然比较敏感。以耐潮霉素、不耐G418的角毛壳菌和不耐潮霉素、耐G418的球毛壳菌为出发菌株，以PEG6000为助融剂进行原生质体融合，用G418和潮霉素抗性进行筛选，获得再生菌株。经AFLP分析表明：再生菌株PF1、PF26为融合菌株，融合菌株菌落形态均与亲本存在明显差异。
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关键词
角毛壳菌
球
毛
壳
菌
抗生素抗性
原生质体融合
扩增片段长度多态性
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职称材料
题名
角毛壳菌木聚糖酶基因xyn24在毕赤酵母中的高效表达及产酶的固定化研究
被引量：
2
1
作者
王艳君
杨谦
机构
福建师范大学福清分校生化系
哈尔滨工业大学生命科学与工程系
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期29-35,共7页
基金
福建省自然科学基金项目(2010J05056)
福建省教育厅科技项目(JB10201)
文摘
以生防真菌角毛壳菌(Chaetomium cupreum)菌丝体时期的基因文库为基础,筛选得到编码木聚糖酶基因的片段,经拼接及RT-PCR扩增得到全长690bp的编码β-1,4-木聚糖酶基因序列,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达的木聚糖酶重组载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,表达蛋白分泌到培养基中,分子质量约为19.4 ku;以水溶性壳聚糖为底物测得酶活为2.72 U/mL。SDS及金属离子Mn2+对酶活性具有较强的激活作用;转化子经10代传代培养后酶活性稳定。通过制备的壳聚糖微球对木聚糖酶进行了固定化研究,并与游离酶的性质进行了比较。结果表明:固定化酶的最适pH范围与游离酶相比向酸性方向偏移;固定化酶的最适反应温度、酸碱稳定性及热稳定性均有所提高。
关键词
角毛壳菌
木聚糖酶
毕赤酵母
固定化
Keywords
Chaetomium cupreum, xynalase, Pichia pastoris, immobilized
分类号
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
以抗生素抗性为选择标记的毛壳菌种间原生质体融合
被引量：
1
2
作者
谭悠久
谭红
周金燕
赵明
机构
中国科学院成都生物研究所
中国科学院研究生院
出处
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期36-41,共6页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2006AA10A213)
中国科学院重要方向资助项目(KSCX2-YW-G016)
文摘
以抗生素抗性为选择标记进行角毛壳菌和球毛壳菌种间原生质体融合。角毛壳菌CH21－I－402菌株对潮霉素有抗性、对G418敏感，球毛壳菌CH08对潮霉素和G418敏感。根癌农杆菌介导的新霉素磷酸转移酶基因转化球毛壳菌，得到成功转化新霉素磷酸转移酶基因的球毛壳菌菌株，转化子对G418抗性提高3～4倍，对潮霉素仍然比较敏感。以耐潮霉素、不耐G418的角毛壳菌和不耐潮霉素、耐G418的球毛壳菌为出发菌株，以PEG6000为助融剂进行原生质体融合，用G418和潮霉素抗性进行筛选，获得再生菌株。经AFLP分析表明：再生菌株PF1、PF26为融合菌株，融合菌株菌落形态均与亲本存在明显差异。
关键词
角毛壳菌
球
毛
壳
菌
抗生素抗性
原生质体融合
扩增片段长度多态性
Keywords
Chaetomium cupreum
C. globosum
antibiotic resistance
protoplasts fusion
amplified fragment length polymorphism
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
角毛壳菌木聚糖酶基因xyn24在毕赤酵母中的高效表达及产酶的固定化研究
王艳君
杨谦
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
以抗生素抗性为选择标记的毛壳菌种间原生质体融合
谭悠久
谭红
周金燕
赵明
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
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条
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参考文献
引证文献
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