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角化细胞生长因子的获得及植物表达载体的构建 被引量:2
1
作者 邵寒娟 林涛 +1 位作者 苏勇波 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期124-127,共4页
从鼠肺中提取RNA,设计相应的引物,经RT PCR扩增出角化细胞生长因子cDNA序列;插入pMD18 T载体,经DNA测序证实为KGF基因.将KGF基因经酶切后连接于植物CaMV35S启动子和NOS终止子之间,单酶切插入pBI1301植物双元表达载体,转化大肠杆菌,阳性... 从鼠肺中提取RNA,设计相应的引物,经RT PCR扩增出角化细胞生长因子cDNA序列;插入pMD18 T载体,经DNA测序证实为KGF基因.将KGF基因经酶切后连接于植物CaMV35S启动子和NOS终止子之间,单酶切插入pBI1301植物双元表达载体,转化大肠杆菌,阳性克隆提取质粒后转化农杆菌EHA105,实现KGF植物表达载体的构建,为KGF的进一步研究奠定基础. 展开更多
关键词 角化细胞生长因子 基因克隆 植物表达载体 KGF基因 有丝分裂剂
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人非小细胞肺癌中KGF mRNA的表达及意义 被引量:1
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作者 笪冀平 杨玲 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期332-335,共4页
目的研究人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)mR-NA的表达,及其在NSCLC发生过程中肿瘤细胞与间质细胞间的相互作用。方法采用原位杂交和免疫组化法检测KGF mR-NA与Ki-67... 目的研究人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)mR-NA的表达,及其在NSCLC发生过程中肿瘤细胞与间质细胞间的相互作用。方法采用原位杂交和免疫组化法检测KGF mR-NA与Ki-67在50例NSCLC的表达,并与正常组织对照。结果KGF mRNA的表达除在NSCLC某些实质细胞内观察到外,主要见于NSCLC的纤维母细胞和血管平滑肌细胞胞质。肿瘤组织KGF mRNA表达的阳性率86%明显高于正常肺组织的24%(P<0·05)。有淋巴结转移者比无淋巴结转移者的表达更强,且与肺癌的分化相关,分化程度越低,KGF mRNA表达越强。在50例肺癌中Ki-67表达的分布与KGF mRNA相似。结论NSCLC存在KGF mRNA高表达。KGF可通过旁分泌、自分泌两种方式发挥作用。KGF可能与NSCLC的发生有一定的相关性。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞肺癌 角化细胞生长因子 原位杂交 KI-67
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急性呼吸窘迫综合征患儿气道吸出物中HGF、KGF和IL-1β水平的研究 被引量:3
3
作者 张隆 蔡小芳 孙继民 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期850-852,共3页
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)、角化细胞生长因子(KGF)和白细胞介素-1β(IL-1β)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)发生、发展中的作用。方法用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测25例ARDS患儿(ARDS组)及23例同期ICU收治的危重非ARDS患儿(对照组)气... 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)、角化细胞生长因子(KGF)和白细胞介素-1β(IL-1β)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)发生、发展中的作用。方法用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测25例ARDS患儿(ARDS组)及23例同期ICU收治的危重非ARDS患儿(对照组)气道吸出物(TA)中HGF、KGF和IL-1β的浓度,并对所有患儿进行肺损伤评分(LIS)。结果ARDS组TA中HGF、KGF和IL-1β含量较对照组显著增高(P<0.01);两组中死亡患儿(死亡组)TA中HGF、KGF和IL-1β水平显著高于存活患儿(存活组)(P<0.01);LIS评分与TA中HGF、KGF和IL-1β水平呈显著正相关(P<0.01)。结论HGF、KGF和IL-1β参与了ARDS发病过程,早期测定肺内HGF、KGF和IL-1β水平可判断ARDS患儿肺损伤严重程度和预后。 展开更多
关键词 急性呼吸窘迫综合征 细胞生长因子 角化细胞生长因子 细胞介素-1Β 气道吸出物
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EudragitS-100对蛋白折叠的促进作用 被引量:1
4
作者 黄志锋 杨树林 +2 位作者 张翼 冯文科 李校堃 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期273-278,共6页
目的:以重组人角化细胞生长因子(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)为模型,研究一种对pH较为敏感的多聚化合物聚丙烯酸树脂EudragitS-100对蛋白折叠的促进作用及其作用机制。方法:直接将变性蛋白加入到含有不同... 目的:以重组人角化细胞生长因子(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)为模型,研究一种对pH较为敏感的多聚化合物聚丙烯酸树脂EudragitS-100对蛋白折叠的促进作用及其作用机制。方法:直接将变性蛋白加入到含有不同浓度Eudragit的蛋白复性缓冲液中,采用MTT法、荧光分光光度法、圆二色光谱法以及高效液相色谱法来比较分析不同浓度EudragitS-100对变性rhKGF-2的复性促进作用。结果:在Eudragit S-100作用下,rhKGF-2的复性产率比普通稀释复性法显著增高且最高达到71%。研究表明Eudragit S-100的促进蛋白折叠的作用是基于Eudragit S-100与rh-KGF-2发生了特异性的结合反应。另外,本研究还发现蛋白复性缓冲液中尿素的浓度对蛋白的复性也存在较大影响。结论:Eudragit S-100能显著提高以rhKGF-2为代表的蛋白的正确折叠和复性收率。 展开更多
关键词 聚丙烯酸树脂Eudragit S-100 重组人角化细胞生长因子-2(rhKGF-2) 蛋白折叠
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携带KGF基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 被引量:1
5
作者 贾庆华 哈小琴 +1 位作者 吕同德 刘春杰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期64-67,共4页
目的:构建携带角化细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的腺病毒载体并观察其在细胞中的表达。方法:通过PCR从pcDNA3-KGFpIRES2-EGFP-KGF质粒中扩增出目的片段KGF,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-KGF。... 目的:构建携带角化细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的腺病毒载体并观察其在细胞中的表达。方法:通过PCR从pcDNA3-KGFpIRES2-EGFP-KGF质粒中扩增出目的片段KGF,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-KGF。经酶切及测序鉴定后,再将KGF定向克隆至重组腺病毒骨架载体pAdxsi,构建携带KGF的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-KGF)。酶切鉴定正确后,转染人胚肾细胞系HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、生产及纯化,半数组织感染量法(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定重组腺病毒滴度。用重组腺病毒及空病毒Ad-null(作为阴性对照)转染人肺腺癌细胞A549,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达,ELISA鉴定KGF的表达。结果:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,纯化后病毒滴度达1.6×1010 pfu/ml。Ad-KGF转染A549细胞后24 h在荧光显微镜下即可观察到绿色荧光蛋白,48 h表达更强,ELISA实验证实细胞表达KGF。结论:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,为下一步研究KGF用于肺纤维化治疗研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 角化细胞生长因子 腺病毒 构建 表达
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