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改良视网膜铺片联合免疫荧光染色技术在氧诱导视网膜病变模型中的应用 被引量:2
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作者 李蓉 姚国敏 王小娣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1077-1080,共4页
背景氧诱导视网膜病变(OIR)动物模型的视网膜铺片是缺血性视网膜病变研究的有用工具。OIR大鼠或小鼠的幼鼠视网膜面积小且厚,采用传统方法先剪开视网膜再进行铺片实际操作难度较大,影响了对实验结果的定量分析。目的探讨一种易操作... 背景氧诱导视网膜病变(OIR)动物模型的视网膜铺片是缺血性视网膜病变研究的有用工具。OIR大鼠或小鼠的幼鼠视网膜面积小且厚,采用传统方法先剪开视网膜再进行铺片实际操作难度较大,影响了对实验结果的定量分析。目的探讨一种易操作、稳定性好的鼠视网膜铺片联合免疫荧光染色技术。方法采用随机数字表法将40只出生后〈6h的SD大鼠随机分为OIR模型组和正常对照组,OIR模型组幼鼠与母鼠一起以24h的时间间隔交替在体积分数80%高氧环境或21%常氧环境中喂养14d,正常对照组大鼠在常氧环境中喂养。于喂养至14d时摘除眼球并剥离视网膜,对完整的视网膜先行谷氨酰胺合成酶(GS)-isolectin B4染色,然后展平视网膜铺片并呈放射状切为4瓣,并于荧光显微镜下拍照,应用Adobe Photoshop CS3图像分析软件系统进行图像拼接处理,获得全视网膜血管图像,采用软件测量每张完整视网膜铺片图像中无血管区及整个视网膜的像素值,最后计算无血管区的像素百分比进行无灌注区严重程度分析。结果采用先行视网膜血管免疫荧光染色再放射状切开视网膜的方法可见视网膜结构完整,展开的视网膜铺片平整,视网膜全周均可见锯齿缘结构。视网膜血管呈强的绿色荧光,血管分支清晰可见,而视网膜的背景绿色荧光较弱。正常对照组大鼠视网膜铺片显示其血管基本发育完全,OIR模型组大鼠视网膜铺片可显示中央视盘旁无毛细血管区及周边大片无血管区形成。结论采用先行视网膜血管免疫荧光染色再放射状切开视网膜的方法制备视网膜铺片简便、易行,较传统的视网膜铺片法更容易确保视网膜结构的完整性,有利于OIR模型视网膜血管形态学的观察和分析。 展开更多
关键词 视网膜血管/病理 氧/毒性 新生动物 SD大鼠 氧诱导视网膜病变 视网膜铺片
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脑源性神经营养因子在氧诱导视网膜病变的表达变化 被引量:1
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作者 段海霞 郭凯 王班伟 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-59,共4页
背景早产儿视网膜病变等新生血管性疾病常导致不可逆性视力丧失,其氧化损伤机制研究日益受到关注,特别是脑源性神经营养因子(BDNF)对视网膜神经节细胞(RGCs)是否具有保护作用鲜有研究报道。 目的探讨BDNF在氧诱导视网膜病变(OI... 背景早产儿视网膜病变等新生血管性疾病常导致不可逆性视力丧失,其氧化损伤机制研究日益受到关注,特别是脑源性神经营养因子(BDNF)对视网膜神经节细胞(RGCs)是否具有保护作用鲜有研究报道。 目的探讨BDNF在氧诱导视网膜病变(OIR)模型小鼠视网膜中的表达变化。 方法将30只SPF级C57BL/6J幼鼠完全随机分为OIR组和正常对照组,每组15只,OIR组将日龄为7 d(P7)的幼鼠与哺乳母鼠同时置于体积分数为(75±3)%氧气的环境下喂养5 d,然后返回正常环境中饲养,以建立OIR模型。分别取2个组P17幼鼠各3只处死后分离眼球,制备视网膜切片行苏木精-伊红染色,观察突破内界膜的血管内皮细胞核数目;另各组选取3只幼鼠行异硫氰酸荧光素(FITC-dextran)眶后注射制备视网膜铺片,观察视网膜血管分布。分别于2个组取P13、P15、P17小鼠各3只处死后提取视网膜组织,Western blot法检测2个组幼鼠视网膜组织中BDNF的相对表达量的变化。 结果组织病理学研究显示,正常对照组P17小鼠视网膜内界膜光滑,未见突破内界膜血管内皮细胞核,而OIR同龄小鼠可见大量突破内界膜的血管内皮细胞核和新生血管管腔。正常对照组和OIR组P17小鼠视网膜突破内界膜血管内皮细胞核数分别为(1.70±0.68)个和(45.3±3.13)个,差异有统计学意义(t=86.5,P=0.00)。视网膜铺片显示,正常对照组P17幼鼠视网膜血管走行正常,毛细血管呈网状分布;而OIR组P17小鼠视网膜血管迂曲,毛细血管网状结构消失,可见大量视网膜无灌注区。OIR组P15、P17幼鼠视网膜组织中BDNF相对表达量为263.992±9.451和218.432±9.710,分别高于正常对照组的230.324±7.779和115.846±7.305,差异均有统计学意义(t=14.2、42.3,P〈0.05)。 结论BDNF在小鼠视网膜中的表达变化趋势与OIR模型鼠新生血管形成的变化趋势一致,BDNF表达变化可能与OIR的病理过程有关。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 低氧/并发症 视网膜新生血管/病理 动物模型 近交系C57BL小鼠
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改良的氧诱导小鼠视网膜病变模型及其评价 被引量:2
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作者 刘爱华 孙靖 张红 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1108-1112,共5页
背景视网膜新生血管是多种视网膜血管病变的共同病理改变,探讨其发病机制对临床治疗有重要意义。氧诱导视网膜病变(OIR)模型是研究视网膜新生血管性疾病常用的动物模型,但在实际造模过程中存在动物死亡率高、成模率低且不稳定等缺... 背景视网膜新生血管是多种视网膜血管病变的共同病理改变,探讨其发病机制对临床治疗有重要意义。氧诱导视网膜病变(OIR)模型是研究视网膜新生血管性疾病常用的动物模型,但在实际造模过程中存在动物死亡率高、成模率低且不稳定等缺点。目的对传统的OIR造模方法进行改良,建立方法简单、模型稳定、成模率高的小鼠OIR模型。方法将80只SPF级1周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组和OIR组,每组40只。正常对照组新生鼠与哺乳母鼠共同在正常空气环境下饲养,OIR组小鼠于出生后2天(P2)每2窝合笼饲养至鼠龄P7时。将2窝P7小鼠与1只母鼠放人含体积分数80%氧的氧氮混合气体的氧箱中饲养5d,然后放回至正常空气环境中饲养,另1母鼠在正常室内空气中饲养,每日更换放人氧箱的母鼠,评价指标包括成模率、母鼠死亡率和幼鼠成活率。OIR组和正常对照组分别取P12、P14、P17、P21小鼠各10只。5只小鼠行心脏异硫氰酸葡聚糖(FITC)荧光素与质量分数4%多聚甲醛的PBS混合液灌注,制备视网膜铺片,评估各组小鼠视网膜血管分布。5只小鼠双眼行组织病理学检查,计算视网膜中突破内界膜的血管内皮细胞核数目。结果正常对照组母鼠和幼鼠成活率为100%。OIR组2只母鼠出氧箱后死亡,幼鼠生长情况良好,母鼠成活率为85.7%,幼鼠成活率为100%;所有OIR组小鼠均出现视网膜新生血管,造模成功率为100%。视网膜铺片显示,正常对照组P14小鼠视网膜血管由视盘向四周均匀分布,视网膜血管发育基本成熟。OIR组P12小鼠视网膜后极部出现无灌注区;P14小鼠视网膜后极部可见大片无灌注区,周边部出现新生血管;P17小鼠视网膜血管区与无血管区交界处可见大量新生血管形成和荧光素渗漏;P21小鼠视网膜周边部可见少量无灌注区,新生血管明显减少。正常对照组各鼠龄小鼠视网膜内界膜连续、平整,仅少数切片中出现突破内界膜的血管内皮细胞核;OIR组P12小鼠少量血管内皮细胞突破内界膜,P17小鼠血管内皮细胞核数达到高峰,P21小鼠仅见少数突破内界膜的血管内皮细胞核。OIR组P14、P17、P21小鼠视网膜突破内界膜的内皮细胞核数分别为(11.44±2.01)、(31.24±1.50)和(9.23±1.12)/切片,明显高于正常对照组相应鼠龄小鼠的(0.27±0.14)、(0.30±0.11)和(0.32±0.16)/切片,差异均有统计学意义(t=47.90、61.30、40.70,均P〈0.05)。结论采用母鼠交换、80%的氧氮混合气体环境喂养及幼鼠合笼喂养建立OIR模型的方法操作简单,造模期间母鼠死亡率低,能构建出稳定、典型的小鼠视网膜新生血管模型。 展开更多
关键词 视网膜新生血管/病理 视网膜病变/氧诱导 氧/毒性 动物模型 血管生成 近交系 C57BL/6J小鼠
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重视光相干断层扫描血流成像的临床应用及其图像的判读 被引量:10
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作者 魏文斌 曾司彦 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期865-870,共6页
光相干断层扫描血流成像(OCTA)是在OCT的基础上发展而来的眼病诊断新技术,也是目前眼科影像学检查中发展最快速的检查方法之一。目前,对眼底血管性疾病的主要检查方法包括荧光素眼底血管造影(FFA)和吲哚青绿血管造影(ICGA),具... 光相干断层扫描血流成像(OCTA)是在OCT的基础上发展而来的眼病诊断新技术,也是目前眼科影像学检查中发展最快速的检查方法之一。目前,对眼底血管性疾病的主要检查方法包括荧光素眼底血管造影(FFA)和吲哚青绿血管造影(ICGA),具有对血管异常动态显现的特点,能对异常血管形态和病变特征提供有用的诊断信息,但其为有创的检查方法,且无法对病变进行分层分析。与FFA和ICGA相比,OCTA除了具备无创、快速、高分辨率的特点外,还具有无创性对血流显影的能力,其不受血管渗漏和视网膜出血的影响,能够提供三维测量的病变图像,并能实现病变的定量检测和分层检测,目前已用于多种眼科疾病的诊断和病情监测。OCTA技术的临床应用丰富了眼科影像学对疾病的诊疗信息及发病机制的探索结果。OCTA的检测过程和正确判读是基于对其原理和眼部待测组织解剖知识的理解和掌握,因此理解其原理及临床应用是临床眼科医师的必修课程。 展开更多
关键词 光相干断层扫描 视网膜疾病/诊断 视网膜血管/病理 荧光素血管造影 光相干断层扫描血流成像
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