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红景天对培养人视网膜色素上皮细胞增生和DNA合成的抑制作用 被引量:1
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作者 明月 庞利民 +1 位作者 张晓光 王锐 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期167-169,共3页
目的 研究红景天对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同质量浓度 ( 5 0 0、40 0、3 0 0、2 0 0、10 0、5 0、10 μg/mL)红景天和红景天 2 0 0 μg/mL在不同作用时间 ... 目的 研究红景天对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同质量浓度 ( 5 0 0、40 0、3 0 0、2 0 0、10 0、5 0、10 μg/mL)红景天和红景天 2 0 0 μg/mL在不同作用时间 ( 6~ 12 0h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果 红景天组细胞增生受抑制并出现细胞脱落 ,红景天 40 0 μg/mL具有最强的抑制效应 ,其明显抑制效应在 6h即出现 ,72h达高峰。红景天组A值明显低于对照组 ,RPE细胞生存率下降。结论 红景天可能通过干扰RPE细胞代谢对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。 展开更多
关键词 红景天 视网膜色素上皮细胞增生 DNA合成 抑制作用 细胞培养
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锌盐对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响
2
作者 王智 陈雯 张缨 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期85-87,F003,共4页
目的 探讨硫酸锌盐对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生及Caspase-3表达的影响。方法 采用MTT法检测不同浓度硫酸锌盐对RPE细胞生长的影响,用TUNEL技术检测RPE细胞凋亡,免疫细胞化学染色观察Caspase-... 目的 探讨硫酸锌盐对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生及Caspase-3表达的影响。方法 采用MTT法检测不同浓度硫酸锌盐对RPE细胞生长的影响,用TUNEL技术检测RPE细胞凋亡,免疫细胞化学染色观察Caspase-3表达。结果 锌盐浓度高于0.001μmol/L就可抑制RPE细胞的增生;当锌盐浓度高于10μmol/L后对RPE细胞的增生抑制率与药物剂量成正比。不同浓度锌盐均可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加,且当锌盐浓度高于0.01μmol/L就可诱导RPE细胞凋亡。结论 锌盐可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加,从而可引发RPE细胞的凋亡。因此对于不缺乏锌的年龄相关性黄斑变性(age-related macular degen-eration,ARMD)患者锌剂治疗未必有益。 展开更多
关键词 锌盐 视网膜色素上皮细胞增生 培养的细胞 细胞凋亡
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缺氧对人视网膜色素上皮细胞增生和VEGF表达的影响 被引量:15
3
作者 张鹏 王雨生 +3 位作者 张星 惠延年 胡丹 马吉献 《眼科新进展》 CAS 2004年第1期6-8,共3页
目的 观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelial,RPE)细胞增生和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。 方法将培养的人RPE细胞接种于 2 4孔板 ,分别放入正常和缺氧环境中培养 ,于 ... 目的 观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelial,RPE)细胞增生和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。 方法将培养的人RPE细胞接种于 2 4孔板 ,分别放入正常和缺氧环境中培养 ,于 1、2、3、4、5d后用四甲基偶氮唑蓝 [3 ( 4 ,5 dimethylthiazole 2yl) 2 ,5 diphenyltetrazoliumbromide ,MTT]比色法检测RPE细胞的增生 ,于 6、12、2 4h后用免疫组织化学法检测RPE细胞对VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析。结果 缺氧组的MTT实验吸光度 (A值 )均高于正常组 (P <0 .0 1) ;抗VEGF抗体染色 ,缺氧组明显强于正常组 (P <0 .0 5 )。结论缺氧可促进RPE细胞的增生及其对VEGF的表达 。 展开更多
关键词 缺氧 视网膜色素上皮细胞 血管内皮生长因子 细胞培养 细胞增生
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表皮生长因子对人视网膜色素上皮细胞增生及移行的影响 被引量:8
4
作者 闫峰 惠延年 +1 位作者 王雨生 郭长梅 《眼科新进展》 CAS 2004年第6期417-421,共5页
目的 观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法 对培养的人 3~ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0... 目的 观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法 对培养的人 3~ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 μg·L-1)及血清对人RPE细胞增生的影响 ;应用RPE细胞损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察EGF及血清对RPE细胞移行的影响。结果 在细胞增生的实验中 :无血清组 ,10~ 10 0 μg·L-1EGF达到最佳刺激浓度 ,其增生率为 81.8% ;5 0mL·L-1血清组 ,1~10 μg·L-1EGF的刺激作用最强达到 12 2 .7% ;无血清组与 5 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,且 5 0mL·L-1血清可明显促进人RPE细胞的增生 (P <0 .0 0 1)。在细胞的移行实验中 :无血清组 ,1~ 10 0 μg·L-1EGF可促进RPE细胞移行 ,但作用较弱 ;10 0mL·L-1血清组中 1~ 10 μg·L-1EGF促移行作用最强达 4 38.9% ;1~ 10 0 μg·L-1EGF的促进基础RPE细胞移行能力 (最强为 36 % )低于 10 0mL·L-1血清诱导的RPE细胞的移行能力 (强度为 14 7% ) ;无血清组与 10 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论 EGF对体外培养的人RPE细胞具有浓度依赖性促增生和移行的作用 ; 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 细胞培养 表皮生长因子 细胞增生 细胞移行
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人参茎叶总皂苷对培养的人胚视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用 被引量:4
5
作者 庞慧民 朱玉琢 +2 位作者 明月 庞利民 拱中华 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期363-365,共3页
目的 :研究人参茎叶总皂苷 ( GSL)对体外培养的视网膜色素上皮细胞 ( RPE)增生的直接抑制作用及机制。方法 :通过活细胞计数法与 MTT比色法分别检测不同浓度 ( 4 0 0、30 0、2 0 0、1 0 0、5 0、1 0 mg· L-1)的 GSL和 GSL 30 0 mg&... 目的 :研究人参茎叶总皂苷 ( GSL)对体外培养的视网膜色素上皮细胞 ( RPE)增生的直接抑制作用及机制。方法 :通过活细胞计数法与 MTT比色法分别检测不同浓度 ( 4 0 0、30 0、2 0 0、1 0 0、5 0、1 0 mg· L-1)的 GSL和 GSL 30 0 mg· L-1在不同作用时间 ( 6、1 2、2 4、36、48、72、96和 1 2 0 h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果 :GSL组细胞增殖受抑并出现细胞脱落 ,GSL 40 0 mg· L-1具有最强的抑制效应 ,明显抑制效应在 6h出现 ,96h达高峰。 GSL组 A值明显低于对照组 ,RPE细胞生存率下降。结论 :GSL可能通过阻滞钙通道、干扰 RPE细胞代谢对 RPE细胞增殖具有剂量 -效应和时间 展开更多
关键词 人参茎叶总皂苷 视网膜色素上皮细胞 细胞培养 增殖性玻璃体视网膜病变 药理学
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结缔组织生长因子对视网膜色素上皮细胞增生和黏附的调节作用 被引量:2
6
作者 郭长梅 惠延年 +3 位作者 王雨生 田艳明 王静波 马吉献 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期215-219,共5页
目的观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生和黏附的影响。方法用CTGF蛋白、多聚赖氨酸(PLL)和胶原分别包被培养板,观察CTGF促进RPE细胞黏附的作用;用四唑盐(MTT)比色试验和流式细胞仪(FCM)测定RPE细胞增生... 目的观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生和黏附的影响。方法用CTGF蛋白、多聚赖氨酸(PLL)和胶原分别包被培养板,观察CTGF促进RPE细胞黏附的作用;用四唑盐(MTT)比色试验和流式细胞仪(FCM)测定RPE细胞增生反应。结果10-30 mg/L的CTGF蛋白提高RPE细胞的贴壁黏附能力,与未包被的对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);30 mg/L CTGF促进RPE细胞黏附的能力与0.1 g/L胶原的作用一致,但略低于0.1 g/L PLL的作用。MTT实验显示CTGF刺激RPE细胞生长,CTGF作用24 h刺激RPE细胞增生的能力最强。FCM测定细胞周期结果显示S期百分比随着CTGF浓度增加而逐渐增加,无血清培养的对照组S期百分比为(7.5±0.4)%,60μg/LCTGF刺激24 h后,S期百分比上升至(16.1±2.0)%。结论CTGF可以促进RPE细胞的黏附和增生,在增生性玻璃体视网膜病变等眼内增生性疾病中可能有重要意义。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 视网膜色素上皮细胞 细胞黏附 细胞增生
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自噬抑制剂3-MA对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用 被引量:8
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作者 侯文文 石焕琦 +1 位作者 张真 张晓梅 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期5-9,共5页
背景糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的并发症之一,视网膜色素上皮(RPE)细胞作为视网膜重要的组成细胞在DR的发生和发展中至关重要。目的探讨自噬抑制剂3-MA对高糖培养的人RPE细胞(hRPECs)增生的影响。方法将体外培养的hRPECs... 背景糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的并发症之一,视网膜色素上皮(RPE)细胞作为视网膜重要的组成细胞在DR的发生和发展中至关重要。目的探讨自噬抑制剂3-MA对高糖培养的人RPE细胞(hRPECs)增生的影响。方法将体外培养的hRPECs分为对照组、高糖组和3-MA+高糖组,对照组细胞用含5mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养基进行培养,高糖组采用含30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养基进行培养,干预组细胞先在DMEM/F12培养基中添加10mmol/L的3-MA处理1h后,再添加30mmol/L葡萄糖溶液进行培养。将培养的细胞以1×10^5/孔的密度接种于24孔细胞培养板中,待细胞80%融合后用含体积分数0.5%胎牛血清的培养基继续孵育24h,使细胞周期同步化。倒置光学显微镜和透射电子显微镜下观察各组jRPECs的形态及超微结构;采用CCK-8法检测各组hRPECs的增生率;采用Western blot法检测各组hRPECs中自噬相关基因微管相关蛋白轻链3B(LC3B)蛋白的表达。结果对照组细胞生长状态良好,细胞排列整齐;高糖组细胞体积稍增大,细胞数量明显多于对照组,而3-MA+高糖组细胞形态不规则,排列紊乱。透射电子显微镜下可见对照组细胞核呈圆形或卵圆形,亚细胞器形态均正常,未发现自噬小体;高糖组细胞中可见自噬溶酶体,而3-MA+高糖组可见自噬小体。对照组、高糖组、3-MA+高糖组细胞的增生率分别为(100.0±2.0)%、(116.9±5.2)%和(103.7±4.7)%,总体比较差异有统计学意义(F=13.526,P=0.006),高糖组的细胞增生率明显高于对照组和3-MA+高糖组,差异均有统计学意义(均P〈0.05),3-MA+高糖组与对照组间细胞增生率的差异无统计学意义(P〉0.05)。与对照组比较,高糖组细胞中LC3B—Ⅰ蛋白表达减弱,LC3B-Ⅱ蛋白表达增强,而3-MA+高糖组细胞中LC3B—Ⅰ和LC3B—Ⅱ蛋白的表达强度与对照组接近。对照组、高糖组、3-MA+高糖组细胞中LC3B—Ⅱ/LC3B—Ⅰ值分别为0.131±0.065、2.504±0.097和0.274±0.007,组间总体比较差异有统计学意义(F=1694.676,P=0.000),高糖组细胞中LC3B—Ⅱ/LC3B—Ⅰ值明显高于对照组和3-MA+高糖组,差异均有统计学意义(均P〈0.05),3-MA+高糖组与对照组间细胞中LC3B—Ⅱ/LC3B—Ⅰ值的差异无统计学意义(P〉0.05)。结论高糖可激活自噬过程并促进hRPECs增生,而自噬抑制剂3-MA在一定程度上抑制自噬进程,从而发挥抑制细胞增生的作用。 展开更多
关键词 自噬/药物作用 葡萄糖/药理 视网膜色素上皮细胞/药物作用 超微结构 生物标志物
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金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用 被引量:5
8
作者 王海燕 惠延年 +3 位作者 王雨生 马吉献 韩泉洪 杜红俊 《眼科新进展》 CAS 2003年第5期316-318,共3页
目的 观察金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮 (hRPE)细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析 ,观察金雀异黄素对hRPE增生的影响。结果 不同浓度的金雀异黄素可以抑制hRPE增生 ,在 2 5~ 10 0mg·L-1的范围内... 目的 观察金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮 (hRPE)细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析 ,观察金雀异黄素对hRPE增生的影响。结果 不同浓度的金雀异黄素可以抑制hRPE增生 ,在 2 5~ 10 0mg·L-1的范围内呈剂量效应关系 ,抑制率为 12 .0 %~ 6 4 .6 % (P <0 .0 5 ) ;并随时间的延长 ,抑制效应增强。嗜银蛋白染色结果 :5 0mg·L-1金雀异黄素作用 12h即有胞核内AgNORs的减少 ,平均数为2 .7(P =0 .0 34) ,2 5mg·L-1金雀异黄素作用 2 4h后 ,其胞核内AgNORs的数量平均为 3.9(P=0 .0 2 3)。并随剂量的增加和时间的延长 ,胞核内AgNORs的数量减少。结论 不同浓度的金雀异黄素作用于培养hRPE细胞 ,抑制hRPE细胞的增生 ,有剂量和时间效应关系 ,随剂量增加和时间延长 ,抑制作用越明显。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 金雀异黄素
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缺氧和高糖对视网膜色素上皮细胞增生及VEGF、TGF-β1表达的影响 被引量:3
9
作者 江丹 吴强 +2 位作者 宋蓓雯 贾丽丽 杜新华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第4期267-271,共5页
目的探究缺氧、高糖环境对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达... 目的探究缺氧、高糖环境对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达变化的影响。方法采用酶消化法进行C57小鼠RPE细胞的体外原代培养。通过组织形态学观察和免疫化学染色对培养的RPE细胞进行鉴定。实验缺氧组:在DMEM培养液中加入CoCl2,使其浓度分别为50μmol.L-1、100μmol.L-1、200μmol.L-1;实验高糖组:在DMEM培养液中加入D-葡萄糖,使其浓度分别为15mmol.L-1、30mmol.L-1、45mmol.L-1。分别向培养的RPE细胞中加入上述培养液,共6组,每组3份;正常对照组加入含5.5mmol.L-1葡萄糖、不含CoCl2的培养液。观察各组细胞在不同培养条件下的活力、倍增时间及增生情况。采用ELISA法检测各组细胞在培养不同时间后(24h、48h、72h)上清液中VEGF及TGF-β1表达量的变化。结果原代培养及传代早期的RPE细胞生长较为旺盛;在缺氧和高糖培养条件下所培养的细胞活力和分裂次数均较正常对照组有所降低或减少,而倍增时间较正常对照组延长。在缺氧和高糖培养条件下培养24h、48h、72h后,细胞上清液中VEGF和TGF-β1表达量均较正常对照组高(P<0.05);当CoCl2浓度为100μmol.L-1和D-葡萄糖浓度为30mmol.L-1时,VEGF和TGF-β1在24h、48h、72h表达均高于其他浓度,缺氧状态下48h表达量分别为(43.28±0.88)ng.L-1和(8.90±1.38)ng.L-1,高糖状态下分别为(39.76±0.56)ng.L-1和(8.81±0.92)ng.L-1;缺氧组2种细胞因子表达量在48h达到高峰,而高糖组在72h达到高峰。结论应用酶联合消化法可获得纯度较高的体外C57小鼠培养RPE细胞;缺氧和高糖状态可对RPE细胞增生起到明显抑制作用,但能够明显上调RPE细胞的VEGF、TGF-β1表达量。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 缺氧 高糖
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机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞增生和移行的影响 被引量:2
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作者 侯旭 惠延年 +4 位作者 韩泉洪 张晓光 王建洲 郭长梅 王海燕 《眼科新进展》 CAS 2005年第3期205-208,共4页
目的视网膜脱离和眼内增生性病变形成时,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞层可能会受到牵拉力的作用。本实验旨在观察培养人RPE细胞在受机械牵拉力时增生和移行的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞... 目的视网膜脱离和眼内增生性病变形成时,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞层可能会受到牵拉力的作用。本实验旨在观察培养人RPE细胞在受机械牵拉力时增生和移行的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,分别于不同时间点用MTT比色实验和3H-TdR掺入试验检测细胞的增生情况,用融合单层培养RPE细胞部分缺失模型观察细胞移行变化。此外,观察去炎松对机械牵拉条件下RPE细胞增生和移行的影响。结果机械牵拉在急性期促进了RPE细胞的增生和移行。去炎松呈剂量依赖性抑制这一作用。在机械牵拉作用下15min和30min时的增生促进率分别为15.72%±0.46%(P=0.037)、24.80%±0.23%(P=0.003)。机械牵拉作用下30min时,移行促进率为23.67%±2.53%(P:0.031)。结论机械牵拉能促进RPE细胞的增生和移行,这一过程可能参与视网膜脱离或眼内增生性疾病的发生。 展开更多
关键词 机械力 视网膜色素上皮细胞 细胞增生 细胞移行
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羊膜对人视网膜色素上皮细胞增生和分化的影响 被引量:1
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作者 王瑶 宫华青 +3 位作者 杨玲玲 王茜 周庆军 王宜强 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期786-790,共5页
背景人视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗视网膜变性性疾病是目前的研究热点之一,许多生物载体可制备RPE细胞单层,但多存在着细胞毒性、稳定性差及免疫反应等问题。目的检测羊膜对人RPE细胞增生和分化的影响,探讨其作为人RPE细胞层... 背景人视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗视网膜变性性疾病是目前的研究热点之一,许多生物载体可制备RPE细胞单层,但多存在着细胞毒性、稳定性差及免疫反应等问题。目的检测羊膜对人RPE细胞增生和分化的影响,探讨其作为人RPE细胞层载体进行移植的可能性。方法将RPE细胞系ARPE-19细胞株用含质量分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养和传代,8~12代细胞用于实验。将传代细胞分为2个组,一组细胞接种于去上皮羊膜作为实验组,另一组细胞直接在培养孔内进行培养作为对照组。分别于接种后24、48、72、96h行MTT实验,测定RPE细胞的吸光度(A492)值以评估两组细胞在增生能力方面的不同;培养3周后的细胞层行苏木精-伊红染色,检测细胞在不同培养载体上是否存在形态学方面的区别;分别收集同一孔中生长于羊膜和培养板表面的细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测色素上皮衍生因子(PEDF)、钙黏蛋白(N—cadherin)、β-连环蛋白(β—catenin)以及细胞连接相关蛋白的表达情况;同时收集培养3周时的细胞行透射电子显微镜和扫描电子显微镜检查,比较不同载体培养的ARPE-19细胞在超微结构方面的区别。结果与对照组相比,实验组细胞增生的速度明显变缓,两组细胞增生情况比较差异有统计学意义(F=41.760,P=0.000)。苏木精-伊红染色结果显示,同一培养孔内实验组的细胞密度明显低于对照组,说明羊膜对ARPE-19细胞增生的影响不是通过细胞分泌的可溶性因子的作用。RT—PCR结果显示,实验组细胞连接相关蛋白claudin 1、N—cadherin和PEDF mRNA在培养细胞上的表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(t=15.828,P=0.000;t=6.839,P=0.002;t=14.667,P=0.000);Connexin 43的表达低于对照组,差异有统计学意义(t=3.358,P=0.024)。超微结构分析发现羊膜载体上的细胞呈典型的多边形RPE细胞表型,分化现象明显,而普通培养板培养的RPE细胞形态主要呈梭形,细胞层厚薄不均。结论去上皮羊膜为载体培养的RPE细胞增生速度变慢,但培养的细胞分化程度较高,提示羊膜可作为RPE细胞体外培养的良好载体,用于制备移植所需功能成熟的RPE细胞片层。 展开更多
关键词 羊膜 视网膜色素上皮细胞 增生 分化
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电场对人视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:1
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作者 韩静 闫小龙 +1 位作者 惠延年 韩泉洪 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第2期101-104,共4页
目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显... 目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显微摄像系统记录不同时间点细胞图像并计数细胞数,检测细胞密度和细胞的生长速度,观测指标包括:细胞密度,以每平方厘米细胞数表示;细胞生长速度,计算公式为:(Ni-N0)/N0×100%(Ni为12h细胞数;N0为0h细胞数);采用流式细胞仪测定细胞周期,计算细胞增生指数:(NS+NG2/M)/N(NS为S期细胞数;NG2/M为G2/M期细胞数;N为细胞总数);Western blotting检测细胞cyclinE蛋白的表达。结果对照组hRPE细胞在12h的观察期间内细胞密度缓慢上升,到12h时细胞密度由95×103cm-2增至130×103cm-2;而实验组在6V.cm-1电场作用下hRPE细胞数量逐渐上升,12h后细胞密度上升至150×103cm-2。实验组hRPE细胞生长速度为50.02%,较对照组(36.84%)明显升高(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示电场作用12h后G0/G1期细胞比例下降,进入S期和G2/M期的细胞比例增多,对照组细胞增生指数为38.43%,实验组升至55.02%(P<0.05);Western blotting结果进一步显示,电场作用12h后hRPE细胞cyclinE蛋白表达水平实验组(比值为0.81±1.22)与对照组(比值为0.47±1.38)相比显著升高(P<0.05)。结论一定条件下的电场作用能够通过上调细胞周期蛋白的表达促进hRPE细胞的增生。 展开更多
关键词 电场 视网膜色素上皮细胞 细胞增生
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外伤眼迁移视网膜色素上皮细胞增生活性的观察 被引量:2
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作者 王恩普 马志中 李丹 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第5期477-480,共4页
目的观察外伤眼经玻璃体切割手术获取的增生组织内迁移视网膜色素上皮(RPE)细胞增生活性随伤后不同时间、不同外伤类型变化的特点。方法利用细胞增生标志物Ki67和PCNA的单克隆抗体对22例外伤眼增生标本进行免疫组织化学染色。结果伤后迁... 目的观察外伤眼经玻璃体切割手术获取的增生组织内迁移视网膜色素上皮(RPE)细胞增生活性随伤后不同时间、不同外伤类型变化的特点。方法利用细胞增生标志物Ki67和PCNA的单克隆抗体对22例外伤眼增生标本进行免疫组织化学染色。结果伤后迁移RPE细胞增生活性迅速升高,1.5个月前后分组比较,Ki67表达率(LI)分别为38.27%和10.82%(P=0.0000);PCNALI分别为32.91%和18.09%(P=0.0273)。病程延长和增生性玻璃体视网膜病变(PVR)加重,RPE细胞增生活性逐渐下降。1.5个月以内手术11例全部为开放伤合并视网膜脱离(RD),Ki67LI为38.27%,6例无RD病例Ki67LI为18%,(P=0.0031)。结论眼外伤后迁移RPE细胞增生活性迅速升高,合并RD是发生PVR的重要危险因素。早期实施玻璃体切割手术将有效地清除异常增生的RPE细胞,减少合并症的产生。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 Ki-67增生活性
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端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:1
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作者 项奕 邢怡桥 +4 位作者 晏颖 彭坤 杨安怀 艾明 杨燕宁 《眼科新进展》 CAS 2005年第6期492-494,共3页
目的探讨端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞增生的影响。方法用常规培养法培养人RPE细胞后,分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸、P16反义寡... 目的探讨端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞增生的影响。方法用常规培养法培养人RPE细胞后,分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸、P16反义寡核苷酸处理,然后提取细胞mRNA,PCR扩增后电泳检测端粒酶mRNA表达。然后用MTT法检测无血清培养组、端粒酶反义寡核苷酸处理组、P16反义寡核苷酸处理组与常规培养组细胞增生状况。结果二甲基亚砜组、热休克蛋白90抑制剂组、无血清培养组、端粒酶反义寡核苷酸处理组,端粒酶mRNA表达受到抑制,凝胶分析系统软件分析结果电泳H值分别为80、116、90、81,而P16反义寡核苷酸处理组端粒酶mRNA表达增强,电泳H值为255。常规培养组H值为162,阴性对照组为0,阳性对照组(胃癌细胞)为255。MTT法显示:无血清培养组,端粒酶反义寡核苷酸处理组细胞活性下降,细胞生长抑制率上升。而P16反义寡核苷酸处理组细胞活性上升,细胞生长抑制率下降。结论端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸可抑制RPE细胞端粒酶mRNA表达,从而抑制RPE细胞增生;P16反义寡核苷酸可促进RPE细胞端粒酶mRNA表达,从而促进RPE细胞增生。 展开更多
关键词 端粒酶抑制剂 视网膜色素上皮细胞 细胞增生
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Bcl-2反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增生的实验研究 被引量:2
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作者 华振宇 赵宏 +3 位作者 朱冬梅 高延庆 张蕾 李铮 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第4期347-350,共4页
目的 探讨不同浓度的Bcl 2反义寡核苷酸 (bcl 2AS ODN)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生活性的影响。方法 使用不同浓度 ( 0、15、3 0、45、60 μmol/L)的bcl 2AS ODN和bcl 2S ODN处理人RPE细胞 2 4h后 ,使用MTT、氚 -标记脱氧胸苷... 目的 探讨不同浓度的Bcl 2反义寡核苷酸 (bcl 2AS ODN)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生活性的影响。方法 使用不同浓度 ( 0、15、3 0、45、60 μmol/L)的bcl 2AS ODN和bcl 2S ODN处理人RPE细胞 2 4h后 ,使用MTT、氚 -标记脱氧胸苷掺入试验 ( 3 H TdR)测定RPE细胞增生的抑制率及DNA合成抑制率 ;使用流式细胞仪检测其对RPE细胞周期的影响 ;使用免疫组织化学染色法检测不同浓度bcl 2AS ODN作用下的RPE细胞bcl 2的表达。结果 不同浓度bcl 2AS ODN处理过的RPE细胞的抑制率和DNA合成抑制率随bcl 2AS ODN浓度的增高而升高 ,bcl 2AS ODN将RPE细胞阻滞在G0 /G1期 ,免疫组化结果显示 :bcl 2AS ODN可抑制RPE细胞bcl 2的表达。结论 bcl 2AS ODN对RPE细胞的增生有抑制作用且呈浓度依赖性 ,这一结果有可能成为增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 BCL-2反义寡核苷酸 视网膜色素上皮细胞 MTT 氚-标记脱氧胸苷掺人试验 流式细胞技术 免疫组 织化学染色方法
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盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:2
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作者 牛超 惠延年 +1 位作者 王雨生 王建洲 《眼科新进展》 CAS 2006年第4期245-247,共3页
目的 观察盐酸甲氯芬酯对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响。结果 不同浓度盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,... 目的 观察盐酸甲氯芬酯对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响。结果 不同浓度盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,在10-1000mg·L^-1的范围内呈剂量效应关系,并随时间的延长,促进效应增强。嗜银蛋白染色结果:10mg·L^-1盐酸甲氯芬酯作用24h后其胞核内AgNORs的数量增加,平均数为2.0(P=0.029);100mg·L^-1盐酸甲氯芬酯作用12h即有胞核内AgNORs的增多,平均数为2.0(P=0.029)。随剂量的增加和时间的延长,胞核内AgNORs的数量增加。结论 盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,并与剂量和作用时间有一定的关系。 展开更多
关键词 年龄相关性黄斑变性 盐酸甲氯芬酯 视网膜色素上皮细胞
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维生素E对IL-6作用的视网膜色素上皮细胞增生及胶原合成的影响 被引量:1
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作者 韩丽娜 宋鄂 +1 位作者 董宇 张晓光 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期270-272,共3页
目的 探讨白细胞介素 -6(IL 6)对视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生及胶原合成的作用 ,以及维生素E对这种作用的影响。方法 采用放射自显影的方法测定RPE细胞增生和胶原合成。用含IL 6和不同浓度维生素E的EMDM培养基培养RPE细胞 ,加入氚... 目的 探讨白细胞介素 -6(IL 6)对视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生及胶原合成的作用 ,以及维生素E对这种作用的影响。方法 采用放射自显影的方法测定RPE细胞增生和胶原合成。用含IL 6和不同浓度维生素E的EMDM培养基培养RPE细胞 ,加入氚标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)和氚标记的脯氨酸 ( 3 H proline) ,测定每分钟闪烁值cpm ,反映3 H TdR和3 H proline的掺入量 ,即RPE细胞增殖和胶原合成情况。结果 IL 6与RPE细胞共同孵育后 ,3 H TdR和3 H proline的掺入量较单纯RPE细胞培养组明显升高 ,提示IL 6促进RPE细胞增生明显 ,胶原合成显著增加 ;不同浓度的维生素E和IL 6共同培养的RPE细胞3 H TdR和3 H proline的掺入量较单纯IL 6培养的RPE细胞组明显降低。且维生素E浓度越高 ,3 H TdR和3 H proline的掺入量越低 ,提示维生素E抑制IL 6引起的RPE细胞的增生和胶原合成 ,且抑制作用随浓度的增加而增加。结论 IL 6对RPE细胞的增生和胶原合成有促进作用 ,维生素E抑制IL 6引起的RPE细胞的增生和胶原合成 。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 白介素-6
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全反式维甲酸对人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用 被引量:1
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作者 李中秋 吴雅臻 韩宁 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期258-261,F0003,共5页
目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用及机制。方法:采用传代培养的人RPE细胞,分成不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6和10-5mol.L-1的ATRA)和不同时间点(6、12、24、48、72和96h)给药组,通过... 目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用及机制。方法:采用传代培养的人RPE细胞,分成不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6和10-5mol.L-1的ATRA)和不同时间点(6、12、24、48、72和96h)给药组,通过活细胞计数法、MTT比色法和流式细胞术分别检测ATRA对人RPE细胞增生的影响。结果:ATRA给药组细胞生存率低于非给药组(P<0.01)。细胞增生的抑制率与药物剂量及时间呈正相关(r1=0.9926,P<0.05;r2=0.9647,P<0.05)。与非给药组比较,ATRA给药组RPE细胞周期中G1期细胞增加(P<0.05),而G0/G1期细胞数明显减少(P<0.05)。结论:ATRA可能通过阻滞人RPE细胞周期对RPE细胞增生具有剂量依赖和时间依赖的抑制作用。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮 细胞培养 全反式维甲酸 流式细胞
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端粒酶编码区的反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:1
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作者 晏颖 邢怡桥 项奕 《眼科新进展》 CAS 2005年第6期485-487,共3页
目的探讨不同浓度端粒酶编码区的反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞增生活性的影响。方法用不同浓度(0μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1、15μmol·L-1)端粒酶编码区的反义寡核苷酸处理人视网膜色素上皮细胞24h... 目的探讨不同浓度端粒酶编码区的反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞增生活性的影响。方法用不同浓度(0μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1、15μmol·L-1)端粒酶编码区的反义寡核苷酸处理人视网膜色素上皮细胞24h后,使用MTT法测定视网膜色素上皮细胞增生的抑制率,使用流式细胞仪检测其对视网膜色素上皮细胞周期的影响。结果不同浓度端粒酶编码区反义寡核苷酸处理过的视网膜色素上皮细胞的抑制率随反义寡核苷酸浓度的增高而升高,并将视网膜色素上皮细胞阻滞在G0/G1期。结论端粒酶编码区的反义寡核苷酸对视网膜色素上皮细胞有抑制作用且呈浓度依赖性,这一结论可能成为增生性玻璃体视网膜疾病基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 端粒酶 反义寡核苷酸 脂质体 转染 视网膜色素上皮细胞
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环孢霉素A抑制人视网膜色素上皮细胞增生的体外研究 被引量:1
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作者 赵小钊 万光明 《眼科新进展》 CAS 2008年第1期18-20,共3页
目的观察环孢霉素A(cyclosporine,CsA)对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增生的影响作用。方法取体外培养人RPE细胞进行分组实验,实验分对照组和实验组:对照组用DMEM培养液继续培养;实验组按所加CsA浓度... 目的观察环孢霉素A(cyclosporine,CsA)对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增生的影响作用。方法取体外培养人RPE细胞进行分组实验,实验分对照组和实验组:对照组用DMEM培养液继续培养;实验组按所加CsA浓度的不同分为0.20mg·L-1、0.40mg·L-1、0.80mg·L-1、1.60mg·L-1、3.20mg·L-1、6.40mg·L-1。时间效应关系分别于CsA作用24h、48h、72h后测定。对照组和实验组均用MTT比色法测吸光度A值。结果CsA浓度为0.20mg·L-1时,作用72h后差异有统计学意义(P<0.05);CsA浓度≥0.40mg·L-1时,作用24h即差异有统计学意义(P<0.05)。结论CsA能够抑制体外培养的RPE细胞的生长,这种抑制作用在一定浓度范围内有剂量时间效应。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 环孢霉素A
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