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缺氧对人视网膜色素上皮细胞增生和VEGF表达的影响 被引量:15
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作者 张鹏 王雨生 +3 位作者 张星 惠延年 胡丹 马吉献 《眼科新进展》 CAS 2004年第1期6-8,共3页
目的 观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelial,RPE)细胞增生和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。 方法将培养的人RPE细胞接种于 2 4孔板 ,分别放入正常和缺氧环境中培养 ,于 ... 目的 观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelial,RPE)细胞增生和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。 方法将培养的人RPE细胞接种于 2 4孔板 ,分别放入正常和缺氧环境中培养 ,于 1、2、3、4、5d后用四甲基偶氮唑蓝 [3 ( 4 ,5 dimethylthiazole 2yl) 2 ,5 diphenyltetrazoliumbromide ,MTT]比色法检测RPE细胞的增生 ,于 6、12、2 4h后用免疫组织化学法检测RPE细胞对VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析。结果 缺氧组的MTT实验吸光度 (A值 )均高于正常组 (P <0 .0 1) ;抗VEGF抗体染色 ,缺氧组明显强于正常组 (P <0 .0 5 )。结论缺氧可促进RPE细胞的增生及其对VEGF的表达 。 展开更多
关键词 缺氧 视网膜色素上皮细胞 血管内皮生长因子 细胞培养 细胞增生
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表皮生长因子对人视网膜色素上皮细胞增生及移行的影响 被引量:8
2
作者 闫峰 惠延年 +1 位作者 王雨生 郭长梅 《眼科新进展》 CAS 2004年第6期417-421,共5页
目的 观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法 对培养的人 3~ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0... 目的 观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法 对培养的人 3~ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 μg·L-1)及血清对人RPE细胞增生的影响 ;应用RPE细胞损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察EGF及血清对RPE细胞移行的影响。结果 在细胞增生的实验中 :无血清组 ,10~ 10 0 μg·L-1EGF达到最佳刺激浓度 ,其增生率为 81.8% ;5 0mL·L-1血清组 ,1~10 μg·L-1EGF的刺激作用最强达到 12 2 .7% ;无血清组与 5 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,且 5 0mL·L-1血清可明显促进人RPE细胞的增生 (P <0 .0 0 1)。在细胞的移行实验中 :无血清组 ,1~ 10 0 μg·L-1EGF可促进RPE细胞移行 ,但作用较弱 ;10 0mL·L-1血清组中 1~ 10 μg·L-1EGF促移行作用最强达 4 38.9% ;1~ 10 0 μg·L-1EGF的促进基础RPE细胞移行能力 (最强为 36 % )低于 10 0mL·L-1血清诱导的RPE细胞的移行能力 (强度为 14 7% ) ;无血清组与 10 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论 EGF对体外培养的人RPE细胞具有浓度依赖性促增生和移行的作用 ; 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 细胞培养 表皮生长因子 细胞增生 细胞移行
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结缔组织生长因子对视网膜色素上皮细胞增生和黏附的调节作用 被引量:2
3
作者 郭长梅 惠延年 +3 位作者 王雨生 田艳明 王静波 马吉献 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期215-219,共5页
目的观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生和黏附的影响。方法用CTGF蛋白、多聚赖氨酸(PLL)和胶原分别包被培养板,观察CTGF促进RPE细胞黏附的作用;用四唑盐(MTT)比色试验和流式细胞仪(FCM)测定RPE细胞增生... 目的观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生和黏附的影响。方法用CTGF蛋白、多聚赖氨酸(PLL)和胶原分别包被培养板,观察CTGF促进RPE细胞黏附的作用;用四唑盐(MTT)比色试验和流式细胞仪(FCM)测定RPE细胞增生反应。结果10-30 mg/L的CTGF蛋白提高RPE细胞的贴壁黏附能力,与未包被的对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);30 mg/L CTGF促进RPE细胞黏附的能力与0.1 g/L胶原的作用一致,但略低于0.1 g/L PLL的作用。MTT实验显示CTGF刺激RPE细胞生长,CTGF作用24 h刺激RPE细胞增生的能力最强。FCM测定细胞周期结果显示S期百分比随着CTGF浓度增加而逐渐增加,无血清培养的对照组S期百分比为(7.5±0.4)%,60μg/LCTGF刺激24 h后,S期百分比上升至(16.1±2.0)%。结论CTGF可以促进RPE细胞的黏附和增生,在增生性玻璃体视网膜病变等眼内增生性疾病中可能有重要意义。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 视网膜色素上皮细胞 细胞黏附 细胞增生
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磷脂酰肌醇-3激酶信号转导通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞增生中的作用 被引量:7
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作者 兰兰 王雨生 +1 位作者 王耀春 张鹏 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第2期306-310,共5页
目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)在缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞增生中的作用。方法:利用CoCl2法建立培养细胞缺氧模型。在缺氧条件下培养人RPE细胞1,4,8,12和24h,流... 目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)在缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞增生中的作用。方法:利用CoCl2法建立培养细胞缺氧模型。在缺氧条件下培养人RPE细胞1,4,8,12和24h,流式细胞仪检测RPE细胞的增生活性,RT-PCR和Westernblot检测磷酸化PI3KmRNA和蛋白的表达水平。用30μmol/LPI3K特异性阻断剂LY294002处理RPE细胞,作为阻断实验组。结果:随缺氧时间延长,RPE细胞增生活性逐渐增高,磷酸化PI3KmRNA和蛋白表达水平逐渐增高。LY294002处理组较对照组RPE细胞增生活性显著降低(P<0.05)。结论:缺氧诱导的RPE细胞增生部分是通过PI3K信号转导通路实现的。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇3-激酶 视网膜色素上皮细胞 缺氧
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金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用 被引量:5
5
作者 王海燕 惠延年 +3 位作者 王雨生 马吉献 韩泉洪 杜红俊 《眼科新进展》 CAS 2003年第5期316-318,共3页
目的 观察金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮 (hRPE)细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析 ,观察金雀异黄素对hRPE增生的影响。结果 不同浓度的金雀异黄素可以抑制hRPE增生 ,在 2 5~ 10 0mg·L-1的范围内... 目的 观察金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮 (hRPE)细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析 ,观察金雀异黄素对hRPE增生的影响。结果 不同浓度的金雀异黄素可以抑制hRPE增生 ,在 2 5~ 10 0mg·L-1的范围内呈剂量效应关系 ,抑制率为 12 .0 %~ 6 4 .6 % (P <0 .0 5 ) ;并随时间的延长 ,抑制效应增强。嗜银蛋白染色结果 :5 0mg·L-1金雀异黄素作用 12h即有胞核内AgNORs的减少 ,平均数为2 .7(P =0 .0 34) ,2 5mg·L-1金雀异黄素作用 2 4h后 ,其胞核内AgNORs的数量平均为 3.9(P=0 .0 2 3)。并随剂量的增加和时间的延长 ,胞核内AgNORs的数量减少。结论 不同浓度的金雀异黄素作用于培养hRPE细胞 ,抑制hRPE细胞的增生 ,有剂量和时间效应关系 ,随剂量增加和时间延长 ,抑制作用越明显。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 金雀异黄素
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缺氧和高糖对视网膜色素上皮细胞增生及VEGF、TGF-β1表达的影响 被引量:3
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作者 江丹 吴强 +2 位作者 宋蓓雯 贾丽丽 杜新华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第4期267-271,共5页
目的探究缺氧、高糖环境对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达... 目的探究缺氧、高糖环境对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达变化的影响。方法采用酶消化法进行C57小鼠RPE细胞的体外原代培养。通过组织形态学观察和免疫化学染色对培养的RPE细胞进行鉴定。实验缺氧组:在DMEM培养液中加入CoCl2,使其浓度分别为50μmol.L-1、100μmol.L-1、200μmol.L-1;实验高糖组:在DMEM培养液中加入D-葡萄糖,使其浓度分别为15mmol.L-1、30mmol.L-1、45mmol.L-1。分别向培养的RPE细胞中加入上述培养液,共6组,每组3份;正常对照组加入含5.5mmol.L-1葡萄糖、不含CoCl2的培养液。观察各组细胞在不同培养条件下的活力、倍增时间及增生情况。采用ELISA法检测各组细胞在培养不同时间后(24h、48h、72h)上清液中VEGF及TGF-β1表达量的变化。结果原代培养及传代早期的RPE细胞生长较为旺盛;在缺氧和高糖培养条件下所培养的细胞活力和分裂次数均较正常对照组有所降低或减少,而倍增时间较正常对照组延长。在缺氧和高糖培养条件下培养24h、48h、72h后,细胞上清液中VEGF和TGF-β1表达量均较正常对照组高(P<0.05);当CoCl2浓度为100μmol.L-1和D-葡萄糖浓度为30mmol.L-1时,VEGF和TGF-β1在24h、48h、72h表达均高于其他浓度,缺氧状态下48h表达量分别为(43.28±0.88)ng.L-1和(8.90±1.38)ng.L-1,高糖状态下分别为(39.76±0.56)ng.L-1和(8.81±0.92)ng.L-1;缺氧组2种细胞因子表达量在48h达到高峰,而高糖组在72h达到高峰。结论应用酶联合消化法可获得纯度较高的体外C57小鼠培养RPE细胞;缺氧和高糖状态可对RPE细胞增生起到明显抑制作用,但能够明显上调RPE细胞的VEGF、TGF-β1表达量。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 缺氧 高糖
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机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞增生和移行的影响 被引量:2
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作者 侯旭 惠延年 +4 位作者 韩泉洪 张晓光 王建洲 郭长梅 王海燕 《眼科新进展》 CAS 2005年第3期205-208,共4页
目的视网膜脱离和眼内增生性病变形成时,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞层可能会受到牵拉力的作用。本实验旨在观察培养人RPE细胞在受机械牵拉力时增生和移行的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞... 目的视网膜脱离和眼内增生性病变形成时,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞层可能会受到牵拉力的作用。本实验旨在观察培养人RPE细胞在受机械牵拉力时增生和移行的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,分别于不同时间点用MTT比色实验和3H-TdR掺入试验检测细胞的增生情况,用融合单层培养RPE细胞部分缺失模型观察细胞移行变化。此外,观察去炎松对机械牵拉条件下RPE细胞增生和移行的影响。结果机械牵拉在急性期促进了RPE细胞的增生和移行。去炎松呈剂量依赖性抑制这一作用。在机械牵拉作用下15min和30min时的增生促进率分别为15.72%±0.46%(P=0.037)、24.80%±0.23%(P=0.003)。机械牵拉作用下30min时,移行促进率为23.67%±2.53%(P:0.031)。结论机械牵拉能促进RPE细胞的增生和移行,这一过程可能参与视网膜脱离或眼内增生性疾病的发生。 展开更多
关键词 机械力 视网膜色素上皮细胞 细胞增生 细胞移行
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电场对人视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:1
8
作者 韩静 闫小龙 +1 位作者 惠延年 韩泉洪 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第2期101-104,共4页
目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显... 目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显微摄像系统记录不同时间点细胞图像并计数细胞数,检测细胞密度和细胞的生长速度,观测指标包括:细胞密度,以每平方厘米细胞数表示;细胞生长速度,计算公式为:(Ni-N0)/N0×100%(Ni为12h细胞数;N0为0h细胞数);采用流式细胞仪测定细胞周期,计算细胞增生指数:(NS+NG2/M)/N(NS为S期细胞数;NG2/M为G2/M期细胞数;N为细胞总数);Western blotting检测细胞cyclinE蛋白的表达。结果对照组hRPE细胞在12h的观察期间内细胞密度缓慢上升,到12h时细胞密度由95×103cm-2增至130×103cm-2;而实验组在6V.cm-1电场作用下hRPE细胞数量逐渐上升,12h后细胞密度上升至150×103cm-2。实验组hRPE细胞生长速度为50.02%,较对照组(36.84%)明显升高(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示电场作用12h后G0/G1期细胞比例下降,进入S期和G2/M期的细胞比例增多,对照组细胞增生指数为38.43%,实验组升至55.02%(P<0.05);Western blotting结果进一步显示,电场作用12h后hRPE细胞cyclinE蛋白表达水平实验组(比值为0.81±1.22)与对照组(比值为0.47±1.38)相比显著升高(P<0.05)。结论一定条件下的电场作用能够通过上调细胞周期蛋白的表达促进hRPE细胞的增生。 展开更多
关键词 电场 视网膜色素上皮细胞 细胞增生
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端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:1
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作者 项奕 邢怡桥 +4 位作者 晏颖 彭坤 杨安怀 艾明 杨燕宁 《眼科新进展》 CAS 2005年第6期492-494,共3页
目的探讨端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞增生的影响。方法用常规培养法培养人RPE细胞后,分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸、P16反义寡... 目的探讨端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞增生的影响。方法用常规培养法培养人RPE细胞后,分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸、P16反义寡核苷酸处理,然后提取细胞mRNA,PCR扩增后电泳检测端粒酶mRNA表达。然后用MTT法检测无血清培养组、端粒酶反义寡核苷酸处理组、P16反义寡核苷酸处理组与常规培养组细胞增生状况。结果二甲基亚砜组、热休克蛋白90抑制剂组、无血清培养组、端粒酶反义寡核苷酸处理组,端粒酶mRNA表达受到抑制,凝胶分析系统软件分析结果电泳H值分别为80、116、90、81,而P16反义寡核苷酸处理组端粒酶mRNA表达增强,电泳H值为255。常规培养组H值为162,阴性对照组为0,阳性对照组(胃癌细胞)为255。MTT法显示:无血清培养组,端粒酶反义寡核苷酸处理组细胞活性下降,细胞生长抑制率上升。而P16反义寡核苷酸处理组细胞活性上升,细胞生长抑制率下降。结论端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸可抑制RPE细胞端粒酶mRNA表达,从而抑制RPE细胞增生;P16反义寡核苷酸可促进RPE细胞端粒酶mRNA表达,从而促进RPE细胞增生。 展开更多
关键词 端粒酶抑制剂 视网膜色素上皮细胞 细胞增生
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肝细胞生长因子对视网膜色素上皮细胞增生及损伤愈合的影响 被引量:5
10
作者 张喜梅 张皙 《临床眼科杂志》 2004年第4期291-293,共3页
目的 研究肝细胞生长因子 (hepatocyte growth factor,HGF)对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmental epithelial,RPE)细胞增生和损伤愈合的影响。方法  MTT比色法检测细胞增生情况 ,相差显微和细胞计数法观察 RPE细胞损伤后的愈... 目的 研究肝细胞生长因子 (hepatocyte growth factor,HGF)对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmental epithelial,RPE)细胞增生和损伤愈合的影响。方法  MTT比色法检测细胞增生情况 ,相差显微和细胞计数法观察 RPE细胞损伤后的愈合情况。结果 中等浓度 HGF(1 0 ng/ m l)刺激 RPE细胞的增生较低浓度组 (0 .0 1~1 ng/ ml)明显增多 (P <0 .0 5 ) ,而与高浓度 (1 0 0 ng/ ml)组比较无统计学差异 (P >0 .0 5 )。随着 HGF刺激时间的延长 ,迁移的细胞数量增多 ,同一时间点 ,HGF处理组明显比对照组细胞数量多 (P <0 .0 5 )。结论 中等浓度的 HGF可促进细胞增生 ,对损伤后的 展开更多
关键词 细胞生长因子 视网膜色素上皮细胞 增生 损伤愈合 增生性玻璃体视网膜病变
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盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:2
11
作者 牛超 惠延年 +1 位作者 王雨生 王建洲 《眼科新进展》 CAS 2006年第4期245-247,共3页
目的 观察盐酸甲氯芬酯对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响。结果 不同浓度盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,... 目的 观察盐酸甲氯芬酯对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响。方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响。结果 不同浓度盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,在10-1000mg·L^-1的范围内呈剂量效应关系,并随时间的延长,促进效应增强。嗜银蛋白染色结果:10mg·L^-1盐酸甲氯芬酯作用24h后其胞核内AgNORs的数量增加,平均数为2.0(P=0.029);100mg·L^-1盐酸甲氯芬酯作用12h即有胞核内AgNORs的增多,平均数为2.0(P=0.029)。随剂量的增加和时间的延长,胞核内AgNORs的数量增加。结论 盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,并与剂量和作用时间有一定的关系。 展开更多
关键词 年龄相关性黄斑变性 盐酸甲氯芬酯 视网膜色素上皮细胞
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端粒酶编码区的反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞增生的影响 被引量:1
12
作者 晏颖 邢怡桥 项奕 《眼科新进展》 CAS 2005年第6期485-487,共3页
目的探讨不同浓度端粒酶编码区的反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞增生活性的影响。方法用不同浓度(0μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1、15μmol·L-1)端粒酶编码区的反义寡核苷酸处理人视网膜色素上皮细胞24h... 目的探讨不同浓度端粒酶编码区的反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞增生活性的影响。方法用不同浓度(0μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1、15μmol·L-1)端粒酶编码区的反义寡核苷酸处理人视网膜色素上皮细胞24h后,使用MTT法测定视网膜色素上皮细胞增生的抑制率,使用流式细胞仪检测其对视网膜色素上皮细胞周期的影响。结果不同浓度端粒酶编码区反义寡核苷酸处理过的视网膜色素上皮细胞的抑制率随反义寡核苷酸浓度的增高而升高,并将视网膜色素上皮细胞阻滞在G0/G1期。结论端粒酶编码区的反义寡核苷酸对视网膜色素上皮细胞有抑制作用且呈浓度依赖性,这一结论可能成为增生性玻璃体视网膜疾病基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 端粒酶 反义寡核苷酸 脂质体 转染 视网膜色素上皮细胞
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环孢霉素A抑制人视网膜色素上皮细胞增生的体外研究 被引量:1
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作者 赵小钊 万光明 《眼科新进展》 CAS 2008年第1期18-20,共3页
目的观察环孢霉素A(cyclosporine,CsA)对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增生的影响作用。方法取体外培养人RPE细胞进行分组实验,实验分对照组和实验组:对照组用DMEM培养液继续培养;实验组按所加CsA浓度... 目的观察环孢霉素A(cyclosporine,CsA)对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增生的影响作用。方法取体外培养人RPE细胞进行分组实验,实验分对照组和实验组:对照组用DMEM培养液继续培养;实验组按所加CsA浓度的不同分为0.20mg·L-1、0.40mg·L-1、0.80mg·L-1、1.60mg·L-1、3.20mg·L-1、6.40mg·L-1。时间效应关系分别于CsA作用24h、48h、72h后测定。对照组和实验组均用MTT比色法测吸光度A值。结果CsA浓度为0.20mg·L-1时,作用72h后差异有统计学意义(P<0.05);CsA浓度≥0.40mg·L-1时,作用24h即差异有统计学意义(P<0.05)。结论CsA能够抑制体外培养的RPE细胞的生长,这种抑制作用在一定浓度范围内有剂量时间效应。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 环孢霉素A
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巴曲酶对视网膜色素上皮细胞增生活性的影响
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作者 孙晓蕾 原公强 +1 位作者 杨玲玲 董晓光 《眼科新进展》 CAS 2008年第9期668-670,共3页
目的探讨巴曲酶对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增生活性的影响。方法利用体外培养的RPE细胞系,应用噻唑兰比色法观察不同浓度的巴曲酶对RPE增生活性的影响。结果当巴曲酶浓度不大于1/10KU.mL-1时各浓度巴曲酶组(... 目的探讨巴曲酶对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增生活性的影响。方法利用体外培养的RPE细胞系,应用噻唑兰比色法观察不同浓度的巴曲酶对RPE增生活性的影响。结果当巴曲酶浓度不大于1/10KU.mL-1时各浓度巴曲酶组(1/100KU.mL-1、1/32KU.mL-1、1/16KU.mL-1、1/10KU.mL-1)与对照组吸光度(optical density,OD)值差异无统计学意义(P=0.068、0.455、0.675、0.159);巴曲酶浓度为1/8KU.mL-1时OD值明显降低(P=0.000)。OD值与培养液渗透压呈明确的负相关(r=-0.951,P=0.000);巴曲酶组和等渗对照组OD值的差异没有统计学意义(P=0.749)。结论渗透压符合RPE生长要求的前提下,巴曲酶对体外培养的RPE增生无明显影响,其应用于玻璃体手术中控制眼内出血的可行性值得进一步研究。 展开更多
关键词 巴曲酶 视网膜色素上皮细胞 增生
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增生细胞核抗原核酶对兔视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用
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作者 孟自军 李斌 祝磊 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第12期904-907,共4页
目的探讨增生细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)核酶(ri-bozyme,Rz)对PCNA表达及细胞增生的影响,为进一步基因治疗增生性玻璃体视网膜病变提供实验基础。方法设计构建针对PCNA的锤头状核酶(PCNα-Rz),通过阳离子脂质... 目的探讨增生细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)核酶(ri-bozyme,Rz)对PCNA表达及细胞增生的影响,为进一步基因治疗增生性玻璃体视网膜病变提供实验基础。方法设计构建针对PCNA的锤头状核酶(PCNα-Rz),通过阳离子脂质体Lipofectamine2000介导转染体外培养的视网膜色素上皮细胞(经此处理的为Rz载体组),观察其在细胞中的分布,应用3H-TDR掺入实验及四甲基偶氮唑盐比色实验检测细胞增生及活性,应用免疫组织化学技术检测细胞内PCNA表达水平,并设立裸Rz组、空载体组和对照组进行对照研究。结果在脂质体介导下PCNα-Rz可成功转染培养的视网膜色素上皮细胞,较裸PCNα-Rz转染效率明显增高;Rz载体组细胞增生活性显著低于裸Rz组、空载体组及对照组,细胞生长抑制率显著提高(81.2%);Rz载体组细胞PCNA表达水平(9.2±1.3)%显著低于裸Rz组(27.5±4.3)%、空载体组(37.4±5.2)%和对照组(43.6±5.8)%,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论PCNα-Rz能显著抑制培养的兔视网膜色素上皮细胞中PCNA的表达,降低细胞的增生活性,此项技术有望应用于人眼并可能成为防治增生性玻璃体视网膜病变的有效手段。 展开更多
关键词 增生细胞核抗原 核酶 视网膜色素上皮细胞 增生性玻璃体视网膜病变
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微小RNA-7对人视网膜色素上皮细胞增生和迁移的影响 被引量:6
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作者 李林 徐剑容 +2 位作者 王咏针 孙玉莹 李斌 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第2期122-126,共5页
目的探讨微小RNA-7(miRNA-7)对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增生和迁移的调控作用。方法利用脂质体Lipofectamine 2000将miRNA-7前体miRNA-145(miRNA-7前体干预组)和阴性对照物(阴性miRNA对照组)转染h... 目的探讨微小RNA-7(miRNA-7)对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增生和迁移的调控作用。方法利用脂质体Lipofectamine 2000将miRNA-7前体miRNA-145(miRNA-7前体干预组)和阴性对照物(阴性miRNA对照组)转染hRPE细胞,同时设立空脂质体组和空白对照组,采用Real-Time PCR检测成熟miRNA-7的表达,CCK-8检测细胞增殖抑制情况,用直径为8.5 mm的Boyden小室进行细胞迁移能力的检测,对4组结果作统计学分析。结果 miRNA-7对hRPE细胞增殖有明显抑制作用,miRNA-7前体干预组细胞增殖抑制率(23.58%)明显高于阴性miRNA对照组(2.35%)、空脂质体组(2.97%)与空白对照组(0%),差异均具有统计学意义(均为P<0.05),空脂质体组、阴性miRNA对照组与空白对照组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。在miRNA-7前体干预组中,迁移细胞数明显较少,每高倍视野为(16.0±3.8)个,而在阴性miRNA对照组、空脂质体组和空白对照组中,迁移细胞数明显较多,每高倍视野分别为(32.2±7.8)个、(31.4±6.9)个和(33.9±8.4)个,miRNA-7前体干预组细胞迁移数较后3组显著减少,差异均有统计学意义(均为P<0.01),而后3组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 miRNA-7可明显抑制hRPE细胞的增殖和迁移,这种抑制作用可能是由于miRNA-7对hRPE细胞的EGFR通路产生了良好的靶向沉默后效应,直接下调EGFR表达,从而阻断或部分阻断了ERK1/2信号通路,使得hRPE细胞的增殖和迁移受到明显抑制。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 增生性玻璃体视网膜病变 表皮生长因子受体 微小RNA
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人参皂苷Rg1对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮细胞损伤的抑制作用及机制 被引量:1
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作者 白玫 苗得雨 吴忧 《山东医药》 CAS 2024年第34期29-33,共5页
目的探究人参皂苷Rg1(GRg1)对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮(ARPE)细胞损伤的作用及机制。方法体外培养ARPE-19细胞,将其随机分为对照组、模型组及GRg1高、中、低剂量组与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂组。除对照组外,其余组采取氯化... 目的探究人参皂苷Rg1(GRg1)对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮(ARPE)细胞损伤的作用及机制。方法体外培养ARPE-19细胞,将其随机分为对照组、模型组及GRg1高、中、低剂量组与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂组。除对照组外,其余组采取氯化钴诱导ARPE-19细胞构建缺氧模型,通过CCK-8法、TUNEL法测定各组不同时间点细胞活性及凋亡情况,DCFH-DA荧光探针对各组活性氧(ROS)水平,经由RT-qPCR、Western blotting法测定各组细胞内HIF-1α、BDNF、PACAP38 mRNA与蛋白表达。结果与对照组相比,各组给药0、12、24 h时ARPE-19细胞活性均低、凋亡率高(P均<0.05);GRg1高剂量组给药12、24、48 h时ARPE-19细胞活性均高于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05),细胞凋亡率均低于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组给药24、48 h时细胞活性均高于GRg1中剂量组(P均<0.05)。与对照组相比,各组给药48 h时ARPE-19细胞ROS、HIF-1αmRNA及蛋白表达均高(P均<0.05);GRg1高剂量组ARPE-19细胞ROSHIF-1αmRNA及蛋白表达均低于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组ARPE-19细胞BDNF、PACAP38 mRNA及蛋白表达均高于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组与HIF-1α抑制剂组给药不同时间点细胞活性与凋亡率、细胞ROS、HIF-1α、BDNF、PACAP38表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论GRg1能减轻缺氧诱导所致ARPE-19细胞损伤,其机制可能与抑制细胞ROS、HIF-1α表达,上调BDNF、PACAP38表达有关。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 缺氧 人参皂苷RG1 脑源性神经营养因子 垂体腺苷酸环化酶激活多肽38
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DRP1调控线粒体稳态对人视网膜色素上皮细胞上皮-间充质转化的影响
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作者 汤中 唐云骢 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第6期443-448,共6页
目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)... 目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)O_(2)组:先采用650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预细胞,此后培养方式及时间与NG组相同;H_(2)O_(2)+Mdivi-1组:先采用10μmol·L^(-1)Mdivi-1处理ARPE-19细胞2 h,再给予650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预,此后培养方式及时间与NG组相同。Western blot检测各组细胞p-DRP-1/DRP1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白(Vimintin)及紧密连接蛋白(ZO-1)表达水平;线粒体红色荧光探针检测各组细胞线粒体形态;线粒体超氧化物红色荧光探针检测各组细胞线粒体活性氧(ROS)水平;JC-1染色试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位;免疫荧光检测各组细胞中ZO-1表达水平。结果H_(2)O_(2)组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值高于NG组,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值低于H_(2)O_(2)组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞较H_(2)O_(2)组线粒体碎片化程度得到改善。H_(2)O_(2)组细胞线粒体ROS水平(4.42±0.29)与NG组(1.00±0.17)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(2.15±0.18)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞红/绿荧光强度比值(0.16±0.12)与NG组(1.00±0.09)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(0.42±0.05)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞上皮样标志物表达下降,间质样标志物表达上升,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞上皮样标志物表达上升,间质样标志物表达下降。各组细胞α-SMA、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、Vimintin及ZO-1相对表达量比较,H_(2)O_(2)组与NG组及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ZO-1免疫荧光染色实验显示,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组的细胞连接紧密程度优于H_(2)O_(2)组。结论DRP1可调控线粒体动态平衡,靶向DRP1可改善线粒体功能并抑制EMT进展,从而减轻H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞功能障碍。 展开更多
关键词 线粒体动力相关蛋白 线粒体功能 视网膜色素上皮细胞 上皮-间充质转化 年龄相关性黄斑变性
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LncRNA HAGLR靶向miR-625-5p对脂多糖诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡和炎症因子表达的影响
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作者 李晶 曾卫娟 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第3期178-182,共5页
目的 探讨长链非编码RNA HAGLR(LncRNA HAGLR)是否可通过靶向调控微小RNA-625-5p(miR-625-5p)表达而影响脂多糖(LPS)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡、炎症因子表达,为揭示视网膜病变机制奠定实验基础。方法 将LPS诱导人视网膜色素... 目的 探讨长链非编码RNA HAGLR(LncRNA HAGLR)是否可通过靶向调控微小RNA-625-5p(miR-625-5p)表达而影响脂多糖(LPS)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡、炎症因子表达,为揭示视网膜病变机制奠定实验基础。方法 将LPS诱导人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)设为LPS组,正常培养的ARPE-19细胞设为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-625-5p表达水平。根据转染物不同分为LPS+sh-NC组、LPS+sh-HAGLR组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-625-5p组、LPS+sh-HAGLR+anti-miR-NC组、LPS+sh-HAGLR+anti-miR-625-5p组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;验证LncRNA HAGLR、miR-625-5p靶向关系;Western blot检测活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)、cleaved-Caspase 9蛋白水平。结果 与Con组比较,LPS组LncRNA HAGLR表达水平升高,miR-625-5p表达水平降低(均为P<0.05),细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均升高(均为P<0.05)。与LPS+sh-NC组比较,LPS+sh-HAGLR组细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均降低(均为P<0.05);LncRNA HAGLR可负向调控miR-625-5p表达水平(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-625-5p组miR-625-5p表达水平升高,细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均降低(均为P<0.05)。与LPS+sh-HAGLR+anti-miR-NC组比较,LPS+sh-HAGLR+anti-miR-625-5p组miR-625-5p表达水平降低,细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均升高(均为P<0.05)。结论 干扰LncRNA HAGLR表达可通过靶向调控miR-625-5p表达抑制细胞凋亡、炎症因子表达,以减轻LPS诱导的ARPE-19细胞损伤。 展开更多
关键词 长链非编码RNA HAGLR 微小RNA-625-5p 脂多糖 视网膜色素上皮细胞 细胞凋亡 炎症
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姜黄素对人视网膜色素上皮细胞中基质金属蛋白酶、纤维粘连蛋白1表达的影响观察
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作者 杜颖华 王淑然 +1 位作者 滕达 梁小芳 《山东医药》 CAS 2024年第21期35-38,共4页
目的观察姜黄素对人视网膜色素上皮(RPE)细胞中基质金属蛋白酶(MMP)、纤维粘连蛋白1(FN1)表达的影响。方法将人RPE细胞分成2组,姜黄素组加入0.5×10^(-5)mol/L的姜黄素,对照组不加姜黄素,两组细胞继续孵育48 h后,采用实时荧光定量PC... 目的观察姜黄素对人视网膜色素上皮(RPE)细胞中基质金属蛋白酶(MMP)、纤维粘连蛋白1(FN1)表达的影响。方法将人RPE细胞分成2组,姜黄素组加入0.5×10^(-5)mol/L的姜黄素,对照组不加姜黄素,两组细胞继续孵育48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1 mRNA,采用Western blotting法检测细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1蛋白。结果姜黄素组细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1 mRNA相对表达量分别为0.41±0.14、5.02±0.22、1.09±0.21、0.47±0.28、2.50±0.21,对照组分别为5.10±0.38、6.43±0.15、0.27±0.19、1.82±0.12、6.83±0.18,两组相比,P均<0.05。姜黄素组细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1蛋白相对表达量分别为6155.33±124.01、6208.00±157.33、8126.33±235.78、3541.67±130.16、3684.33±90.22,对照组分别为16207.33±210.19、8053.33±61.98、2543.67±122.20、9477.33±108.68、8218.00±239.86,两组相比,P均<0.05。结论姜黄素可上调人RPE细胞中MMP1、MMP2、MMP9、FN1的表达,下调MMP3的表达。 展开更多
关键词 姜黄素 视网膜色素上皮细胞 基质金属蛋白酶 纤维粘连蛋白1 增殖性玻璃体视网膜病变 细胞外基质
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