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恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)基因在毕赤酵母系统中的高效表达
被引量：
4
1
作者
张忠广
赵恒梅
宫玉香
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第3期240-243,共4页
目的 利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA - 1(Ⅲ )重组蛋白。方法 将测序正确的AMA - 1(Ⅲ )基因插入毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9k中 ,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115 ,筛选高拷贝...
目的 利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA - 1(Ⅲ )重组蛋白。方法 将测序正确的AMA - 1(Ⅲ )基因插入毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9k中 ,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115 ,筛选高拷贝转化子 ,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS -PAGE和免疫印迹进行检测。结果 AMA - 1(Ⅲ )蛋白表达于培养上清 ,蛋白的相对分子质量分别为 16 .3ku ,免疫印迹结果表明AMA - 1(Ⅲ )基因表达蛋白能被抗AMA - 1(Ⅲ )的单抗所识别 ,出现特异条带 ,推算AMA - 1(Ⅲ )蛋白的表达量为 0 .8g/L。 结论 酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA - 1(Ⅲ )
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关键词
疟原虫
恶性
裂殖子顶端膜抗原1
疟疾疫苗
毕赤氏酵母
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职称材料
恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析
被引量：
3
2
作者
单志新
余新炳
+4 位作者
李学荣
马长玲
徐劲
罗树红
吴忠道
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第5期19-24,共6页
目的 测定恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原 1(AMA - 1)基因和Pfs2 30基因序列 ,并分别进行序列分析。方法 根据AMA - 1基因已知序列合成一对引物 ,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA - 1基因 ,构建真核...
目的 测定恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原 1(AMA - 1)基因和Pfs2 30基因序列 ,并分别进行序列分析。方法 根据AMA - 1基因已知序列合成一对引物 ,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA - 1基因 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3 -AMA - 1。根据Pfs2 30基因已知序列合成七对引物 ,分 7段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs2 30基因 ,并分别将扩增片段插入pMD - 18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定克隆的AMA -1、Pfs2 30基因序列 ,应用DNAstar软件辅助进行序列分析和同源性比较。结果 PCR扩增得到恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1和Pfs2 30基因片段。恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1基因全长 186 9bp ,无内含子 ,编码 6 2 2个氨基酸残基 ,不存在氨基酸重复序列 ,相对分子量约 72 0 4 5kDa ;Pfs2 30基因全长 94 35bp ,无内含子 ,编码 314 4个氨基酸残基 ,分子量为36 4 36kDa。恶性疟原虫FCC1/HN株与FC2 7、7G8、CAMP、FCR3、Thai -Tn、3D7、FVO、KF1916、CMP1、HB3、K1和V1株AMA - 1的同源性在 94 9%以上 ,各株间有 5 3个位置相同的氨基酸残基替代位点 ,并且发生替代的氨基酸残基具二态性。FCC1/HN株分别比 3D7、7G8株Pfs2 30抗原多 9、10个氨基酸残基 ,三个分离株有 2 8个氨基酸替换?
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关键词
海南株
疟原虫
恶性
裂殖子顶端膜抗原1
Pfs230基因
克隆
序列分析
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职称材料
题名
恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)基因在毕赤酵母系统中的高效表达
被引量：
4
1
作者
张忠广
赵恒梅
宫玉香
机构
青岛大学医学院人体寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第3期240-243,共4页
基金
青岛市科技计划项目 (2 0 0 1KNS -2E -2 7 2 )
文摘
目的 利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA - 1(Ⅲ )重组蛋白。方法 将测序正确的AMA - 1(Ⅲ )基因插入毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9k中 ,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115 ,筛选高拷贝转化子 ,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS -PAGE和免疫印迹进行检测。结果 AMA - 1(Ⅲ )蛋白表达于培养上清 ,蛋白的相对分子质量分别为 16 .3ku ,免疫印迹结果表明AMA - 1(Ⅲ )基因表达蛋白能被抗AMA - 1(Ⅲ )的单抗所识别 ,出现特异条带 ,推算AMA - 1(Ⅲ )蛋白的表达量为 0 .8g/L。 结论 酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA - 1(Ⅲ )
关键词
疟原虫
恶性
裂殖子顶端膜抗原1
疟疾疫苗
毕赤氏酵母
Keywords
Plasmodium falciparum
apical membrane antigen-
1
major merozoite
malaria vaccine
Pichia pastoris
expression
分类号
R382.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析
被引量：
3
2
作者
单志新
余新炳
李学荣
马长玲
徐劲
罗树红
吴忠道
机构
中山大学中山医学院寄生虫学教研室
广州医学院寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第5期19-24,共6页
基金
国家自然科学基金 (NO 3 970 0 12 4)
中山医科大学"2 11"重点学科建设课题资金(NO 98169)
+1 种基金
广东省自然科学资金(NO 980 0 89)
教育部博士点基金(博教NO 93 -186)资助
文摘
目的 测定恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原 1(AMA - 1)基因和Pfs2 30基因序列 ,并分别进行序列分析。方法 根据AMA - 1基因已知序列合成一对引物 ,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA - 1基因 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3 -AMA - 1。根据Pfs2 30基因已知序列合成七对引物 ,分 7段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs2 30基因 ,并分别将扩增片段插入pMD - 18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定克隆的AMA -1、Pfs2 30基因序列 ,应用DNAstar软件辅助进行序列分析和同源性比较。结果 PCR扩增得到恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1和Pfs2 30基因片段。恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1基因全长 186 9bp ,无内含子 ,编码 6 2 2个氨基酸残基 ,不存在氨基酸重复序列 ,相对分子量约 72 0 4 5kDa ;Pfs2 30基因全长 94 35bp ,无内含子 ,编码 314 4个氨基酸残基 ,分子量为36 4 36kDa。恶性疟原虫FCC1/HN株与FC2 7、7G8、CAMP、FCR3、Thai -Tn、3D7、FVO、KF1916、CMP1、HB3、K1和V1株AMA - 1的同源性在 94 9%以上 ,各株间有 5 3个位置相同的氨基酸残基替代位点 ,并且发生替代的氨基酸残基具二态性。FCC1/HN株分别比 3D7、7G8株Pfs2 30抗原多 9、10个氨基酸残基 ,三个分离株有 2 8个氨基酸替换?
关键词
海南株
疟原虫
恶性
裂殖子顶端膜抗原1
Pfs230基因
克隆
序列分析
Keywords
Plasmodium falciparum
Apical membrane antigen
1
Pfs230 gene
Gene cloning
Sequence analysis
分类号
R382.31 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)基因在毕赤酵母系统中的高效表达
张忠广
赵恒梅
宫玉香
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析
单志新
余新炳
李学荣
马长玲
徐劲
罗树红
吴忠道
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002
3
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