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杆状病毒表面展示DAF蛋白抵抗血清补体系统灭活的研究
1
作者
王志昇
李梦婷
+2 位作者
卢豆豆
杨文
杨萌萌
《动物医学进展》
北大核心
2020年第10期36-42,共7页
拟在杆状病毒表面展示补体调节蛋白,即衰亡加速因子(CD55;decay-accelerating factor,DAF),以此来评价其抵抗补体灭活的功效。以pFastBac DUAL质粒为骨架,在p10启动子下游插入GP64 SP-DAF-GP64 TM-GP64 CTD表达元件,同时在pPh启动子下...
拟在杆状病毒表面展示补体调节蛋白,即衰亡加速因子(CD55;decay-accelerating factor,DAF),以此来评价其抵抗补体灭活的功效。以pFastBac DUAL质粒为骨架,在p10启动子下游插入GP64 SP-DAF-GP64 TM-GP64 CTD表达元件,同时在pPh启动子下游插入CMV-EGFP表达元件,获得的质粒命名为pBacSC-DAF-CE;同时作为对照,构建pBacSC-CE。将构建好的重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选、脂质体介导转染Sf-9细胞,获得重组杆状病毒BacSC-DAF-CE和BacSC-CE。结果表明,经PCR鉴定以及测序,成功构建了重组质粒pBacSC-DAF-CE和pBacSC-CE;Western blot和激光共聚焦结果表明,DAF蛋白在BacSC-DAF-CE感染的Sf-9细胞中获得了表达,并且成功展示在了Sf9细胞膜上;血清补体敏感性试验结果表明,随着血清浓度的增加,重组病毒BacSC-DAF-CE和BacSC-CE转导HUVEC细胞的效率逐渐降低;经统计分析,不管血清浓度是20%、40%、60%还是80%,BacSC-DAF-CE组与BacSC-CE组相比,eGFP+%的表达效率明显增高(P<0.05)。成功构建了表面展示DAF蛋白的重组杆状病毒系统,该系统能有效地抵抗小鼠血清补体系统的灭活,研究结果为下一步验证其体内转导效率奠定了工作基础,同时为抗肿瘤或其他恶性疾病的基因治疗提供了良好的基因传递平台。
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关键词
杆状病毒
表面展示
衰亡
加速
因子
(
daf
)
补体灭活
基因治疗
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题名
杆状病毒表面展示DAF蛋白抵抗血清补体系统灭活的研究
1
作者
王志昇
李梦婷
卢豆豆
杨文
杨萌萌
机构
宁夏医科大学药学院
宁夏医科大学实验动物中心
宁夏医科大学中医学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2020年第10期36-42,共7页
基金
宁夏自然科学基金项目(NZ17067)
宁夏卫计委项目(2017-NW-019)
宁夏医科大学校级项目(XY2017019,NXYLXK2017A06)。
文摘
拟在杆状病毒表面展示补体调节蛋白,即衰亡加速因子(CD55;decay-accelerating factor,DAF),以此来评价其抵抗补体灭活的功效。以pFastBac DUAL质粒为骨架,在p10启动子下游插入GP64 SP-DAF-GP64 TM-GP64 CTD表达元件,同时在pPh启动子下游插入CMV-EGFP表达元件,获得的质粒命名为pBacSC-DAF-CE;同时作为对照,构建pBacSC-CE。将构建好的重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选、脂质体介导转染Sf-9细胞,获得重组杆状病毒BacSC-DAF-CE和BacSC-CE。结果表明,经PCR鉴定以及测序,成功构建了重组质粒pBacSC-DAF-CE和pBacSC-CE;Western blot和激光共聚焦结果表明,DAF蛋白在BacSC-DAF-CE感染的Sf-9细胞中获得了表达,并且成功展示在了Sf9细胞膜上;血清补体敏感性试验结果表明,随着血清浓度的增加,重组病毒BacSC-DAF-CE和BacSC-CE转导HUVEC细胞的效率逐渐降低;经统计分析,不管血清浓度是20%、40%、60%还是80%,BacSC-DAF-CE组与BacSC-CE组相比,eGFP+%的表达效率明显增高(P<0.05)。成功构建了表面展示DAF蛋白的重组杆状病毒系统,该系统能有效地抵抗小鼠血清补体系统的灭活,研究结果为下一步验证其体内转导效率奠定了工作基础,同时为抗肿瘤或其他恶性疾病的基因治疗提供了良好的基因传递平台。
关键词
杆状病毒
表面展示
衰亡
加速
因子
(
daf
)
补体灭活
基因治疗
Keywords
Baculovirus
surface display
daf
complement inactivation
gene therapy
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
发文年
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1
杆状病毒表面展示DAF蛋白抵抗血清补体系统灭活的研究
王志昇
李梦婷
卢豆豆
杨文
杨萌萌
《动物医学进展》
北大核心
2020
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