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HPS OmpP2表面环状结构诱导猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录的研究
被引量：
1
1
作者
周叶
贺超
+3 位作者
王丹
岳华
任玉鹏
张斌
《动物医学进展》
北大核心
2019年第9期52-57,共6页
副猪嗜血杆菌(HPS)对养猪业造成了严重的影响。外膜蛋白P2(OmpP2)是HPS外膜中最丰富的蛋白,能介导宿主的炎症反应。试验通过人工合成OmpP2的表面环状结构(Loop)氨基酸序列体外刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs),探究OmpP2中不同Loop在炎性反应...
副猪嗜血杆菌(HPS)对养猪业造成了严重的影响。外膜蛋白P2(OmpP2)是HPS外膜中最丰富的蛋白,能介导宿主的炎症反应。试验通过人工合成OmpP2的表面环状结构(Loop)氨基酸序列体外刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs),探究OmpP2中不同Loop在炎性反应中的作用。用HPS血清4型SC096菌株OmpP2作为参照,通过real-time PCR方法测量8个Loop刺激PAMs细胞6 h后IL-1ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、CCL-4、CCL-5细胞因子mRNA的转录水平。与对照细胞相比,8个Loop均能诱导PAMs中IL-1ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、CCL-4、CCL-5细胞因子mRNA转录出现不同程度的上调,其中Loop7和Loop8刺激细胞后细胞因子mRNA转录水平上调显著(P<0.05)。提示Loop7和Loop8是OmpP2发挥促炎功能的一个重要组成结构。
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关键词
副猪嗜血杆菌
外膜蛋白P2
表面环状结构
细胞因子
mRNA转录水平
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职称材料
Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究
被引量：
3
2
作者
何欣怡
周叶
+4 位作者
周群
曹慧
宋鑫
岳华
张斌
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期639-645,共7页
为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PC...
为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PCR扩增融合基因片段Km-ompP2克隆至自杀性质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀性质粒pZY01。以HPS SC096为模板经PCR分别扩增ompP2 Loop1~Loop8上臂片段和ompP2 Loop1~Loop 8下游片段,并经重叠延伸PCR扩增各loop基因融合片段(分别缺失Loop1~Loop8基因序列的ompP2片段)并克隆至pZY01,构建各Loop基因缺失的自杀性质粒pZY02~pZY08,所有的自杀性质粒均经PCR鉴定。将正确构建的自杀性质粒pZY01~pZY08通过自然转化法转化至ompP2基因缺失的HPS SC096(SC096ΔompP2)中,构建了HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,并均经PCR鉴定后在TSA中传10代,通过PCR方法检测其遗传稳定性。结果显示,正确构建了8个自杀性质粒pZY01~pZY08及缺失各Loop基因的HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8,共5个HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,且各缺失菌株的Loop基因均能够稳定缺失,表明其均具有较好的遗传稳定性。未获得HPS ompP2ΔLoop1、ompP2ΔLoop3和ompP2ΔLoop4缺失菌株。制备新鲜兔血清并分别测定不同HPS ompP2ΔLoop缺失菌株在50%和90%兔血清中的存活率,分析不同缺失菌株的抗兔血清中补体介导的杀菌作用。结果显示,与HPSΔompP2菌株相比,HPS ompP2ΔLoop2菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了4×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop5菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了3×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8的存活率无显著变化。与野生型SC096株相比,在50%兔血清中,HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8缺失菌株的存活率分别降低了53.7%、60.1%、99.8%、99.6%和99.9%;在90%兔血清中,上述HPS ompP2ΔLoop菌株的存活率分别降低了78.0%、84.4%、99.9%、99.9%和99.9%。以上结果表明Loop6、Loop7和Loop8参与OmpP2的抗血清杀菌作用,且这三者可能是OmpP2重要的活跃肽段。本研究为探究HPS ompP2的毒力机制提供参考。
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关键词
副猪嗜血杆菌
外膜蛋白P2
表面环状结构
血清杀菌作用
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职称材料
题名
HPS OmpP2表面环状结构诱导猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录的研究
被引量：
1
1
作者
周叶
贺超
王丹
岳华
任玉鹏
张斌
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
四川省兽药监察所
国家民族事务委员会青藏高原动物疫病防控创新团队
出处
《动物医学进展》
北大核心
2019年第9期52-57,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31772766)
四川省科技厅项目(13TD0057)
西南民族大学研究生创新型科研项目(CX2018SZ25)
文摘
副猪嗜血杆菌(HPS)对养猪业造成了严重的影响。外膜蛋白P2(OmpP2)是HPS外膜中最丰富的蛋白,能介导宿主的炎症反应。试验通过人工合成OmpP2的表面环状结构(Loop)氨基酸序列体外刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs),探究OmpP2中不同Loop在炎性反应中的作用。用HPS血清4型SC096菌株OmpP2作为参照,通过real-time PCR方法测量8个Loop刺激PAMs细胞6 h后IL-1ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、CCL-4、CCL-5细胞因子mRNA的转录水平。与对照细胞相比,8个Loop均能诱导PAMs中IL-1ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、CCL-4、CCL-5细胞因子mRNA转录出现不同程度的上调,其中Loop7和Loop8刺激细胞后细胞因子mRNA转录水平上调显著(P<0.05)。提示Loop7和Loop8是OmpP2发挥促炎功能的一个重要组成结构。
关键词
副猪嗜血杆菌
外膜蛋白P2
表面环状结构
细胞因子
mRNA转录水平
Keywords
Haemophilus parasuis
OmpP2
surface loop structure
cytokine
mRNA transcription level
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究
被引量：
3
2
作者
何欣怡
周叶
周群
曹慧
宋鑫
岳华
张斌
机构
西南民族大学畜牧兽医学院
青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期639-645,共7页
基金
国家自然科学基金(31772766)
四川应用基础研究计划(2020YJ0247)
西南民族大学研究生创新科研项目(CX2020SZ54)。
文摘
为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PCR扩增融合基因片段Km-ompP2克隆至自杀性质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀性质粒pZY01。以HPS SC096为模板经PCR分别扩增ompP2 Loop1~Loop8上臂片段和ompP2 Loop1~Loop 8下游片段,并经重叠延伸PCR扩增各loop基因融合片段(分别缺失Loop1~Loop8基因序列的ompP2片段)并克隆至pZY01,构建各Loop基因缺失的自杀性质粒pZY02~pZY08,所有的自杀性质粒均经PCR鉴定。将正确构建的自杀性质粒pZY01~pZY08通过自然转化法转化至ompP2基因缺失的HPS SC096(SC096ΔompP2)中,构建了HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,并均经PCR鉴定后在TSA中传10代,通过PCR方法检测其遗传稳定性。结果显示,正确构建了8个自杀性质粒pZY01~pZY08及缺失各Loop基因的HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8,共5个HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,且各缺失菌株的Loop基因均能够稳定缺失,表明其均具有较好的遗传稳定性。未获得HPS ompP2ΔLoop1、ompP2ΔLoop3和ompP2ΔLoop4缺失菌株。制备新鲜兔血清并分别测定不同HPS ompP2ΔLoop缺失菌株在50%和90%兔血清中的存活率,分析不同缺失菌株的抗兔血清中补体介导的杀菌作用。结果显示,与HPSΔompP2菌株相比,HPS ompP2ΔLoop2菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了4×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop5菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了3×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8的存活率无显著变化。与野生型SC096株相比,在50%兔血清中,HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8缺失菌株的存活率分别降低了53.7%、60.1%、99.8%、99.6%和99.9%;在90%兔血清中,上述HPS ompP2ΔLoop菌株的存活率分别降低了78.0%、84.4%、99.9%、99.9%和99.9%。以上结果表明Loop6、Loop7和Loop8参与OmpP2的抗血清杀菌作用,且这三者可能是OmpP2重要的活跃肽段。本研究为探究HPS ompP2的毒力机制提供参考。
关键词
副猪嗜血杆菌
外膜蛋白P2
表面环状结构
血清杀菌作用
Keywords
Haemophilus parasuis
outer membrane protein P2
surface-exposed loops
serum resistance
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HPS OmpP2表面环状结构诱导猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录的研究
周叶
贺超
王丹
岳华
任玉鹏
张斌
《动物医学进展》
北大核心
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究
何欣怡
周叶
周群
曹慧
宋鑫
岳华
张斌
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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