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弓形虫表面抗原P30基因分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒的构建及序列测定 被引量:5
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作者 占国清 吴少庭 +4 位作者 李国光 高世同 林敏 梁驹卿 郑春福 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期28-31,共4页
目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定。方法 弓形虫RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,酚 /氯仿法抽提基因组DNA ;根据基因库P30基因序列设计合成一对引物 ,采用PCR法扩增编码P3... 目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定。方法 弓形虫RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,酚 /氯仿法抽提基因组DNA ;根据基因库P30基因序列设计合成一对引物 ,采用PCR法扩增编码P30的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将P30基因定向克隆到分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达质粒 ,转化大肠杆菌DH5dα,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子 ,并经双酶切及PCR鉴定 ;最后对重组子进行序列测定。结果 PCR所扩增的P30基因片段为 10 37bp ,阳性重组质粒pBCG -P30经XbaI+KpnI双酶切 ,获得包含P30和热休克蛋白 (hsp70 )启动子的复合基因片段 ,此片段的大小为 1170bp ,与预期的理论值相符合。序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P30抗原的基因片段。结论 成功构建编码弓形虫表面抗原P30基因大肠杆菌 -分枝杆菌穿梭质粒pBCG -P30。 展开更多
关键词 弓形虫 表面抗原p30 基因重组 序列测定
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用含霍乱毒素A_2/B的载体在大肠杆菌中表达弓形虫主要表面抗原P30 被引量:1
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作者 于瑾 古钦民 +6 位作者 李瑛 何深一 王伟 卞继峰 周怀瑜 赵群力 丛华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第6期21-23,16,共4页
目的 克隆并表达含有弓形虫P30抗原及霍乱毒素A2 /B亚基基因的原核表达载体 ,为弓形虫疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法扩增出P30基因片段后 ,克隆入含有霍乱毒素A2 /B亚基基因的表达质粒pUAB0 2 4 ,在大肠杆菌JM10 9(DE3)中表... 目的 克隆并表达含有弓形虫P30抗原及霍乱毒素A2 /B亚基基因的原核表达载体 ,为弓形虫疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法扩增出P30基因片段后 ,克隆入含有霍乱毒素A2 /B亚基基因的表达质粒pUAB0 2 4 ,在大肠杆菌JM10 9(DE3)中表达融合蛋白。通过SDS -PAGE电泳及Westernblotting进行检测鉴定。 结果 电泳证明质粒构建正确 ,SDS -PAGE显示经IPTG诱导可以产生特异性条带 ,Westernblotting进一步证实该条带为P30 -CTA2 /B融合蛋白。结论 表达载体pUAB0 2 4 -P30可有效表达特异性的融合弓形虫抗原蛋白P30 -CTA2 B。 展开更多
关键词 霍乱毒素 A2/B 载体 大肠杆菌 弓形虫 表面抗原p30 弓形虫病 基因表达
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弓形虫ZS2株抗原基因的扩增及克隆 被引量:11
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作者 周永安 陈观今 +2 位作者 刘彦文 罗树红 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第5期14-16,共3页
扩增弓形虫ZS2株P30抗原基因,构建PcDNA3—P30真核表达重组质粒。方法本文采用PCR技术,自行设计一对寡核苷酸引物(P1,P2),从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRI和Hind双酶切后... 扩增弓形虫ZS2株P30抗原基因,构建PcDNA3—P30真核表达重组质粒。方法本文采用PCR技术,自行设计一对寡核苷酸引物(P1,P2),从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRI和Hind双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中,转化入大肠杆菌TG1,用氨共青霉素和PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRI和Kind双酶切鉴定。结果从弓形虫ZS2株DNA中扩增出1025bP的P30基因,构建重组质粒PcDNA3—P30,酶切产物的大小分别与预期相符。结论成功地对弓形虫ZS2株P30基因进行体外扩增及构建真核表达重组质粒PcDNA3—P30,为重组P30抗原及核酸疫苗研究做好准备。 展开更多
关键词 表面抗原p30 聚合酶链反应 弓形体 基因克隆
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