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弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D基因的原核表达及蛋白定位研究
被引量：
1
1
作者
刘辉
米荣升
+7 位作者
贾海燕
王旭
黄燕
张烨华
张晓丽
杨衡
韩先干
陈兆国
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2020年第4期17-23,共7页
为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,...
为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性;利用His柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,制备抗血清,通过间接ELISA检测血清效价;利用免疫荧光法检测蛋白在弓形虫速殖子中的定位。结果显示:成功构建了原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,表达产物约为55 kDa;重组蛋白能与感染弓形虫的小鼠血清发生特异性反应,免疫兔血清效价达到1∶51 200;免疫荧光检测结果显示,SRS47D蛋白分布在弓形虫速殖子表面,尤其前部和后部表膜。上述结果为进一步深入研究弓形虫SRS47D的特性和功能奠定了基础。
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关键词
刚地弓形虫
表面抗原糖蛋白相关序列
原核表达
定位
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职称材料
弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析
2
作者
牛水珠
潘明
+1 位作者
葛层层
黄思扬
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2024年第8期10-17,共8页
为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能,本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本,运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs 19 d敲除虫株,并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体...
为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能,本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本,运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs 19 d敲除虫株,并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体外缓殖子转化试验、小鼠毒力试验和小鼠脑包囊检测试验。噬斑试验和细胞内增殖试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株在人包皮成纤维(HFF)细胞上形成的噬斑显著变小(P<0.05),纳虫泡内形成的速殖子个数显著减少(P<0.05)。体外缓殖子转化试验发现,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株的体外缓殖子转化率极显著降低(P<0.01)。小鼠毒力试验结果显示,与Pru虫株相比,弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株不会引起ICR小鼠的死亡(P<0.05)。小鼠脑包囊检测试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株感染小鼠后形成的脑包囊数量极显著减少(P<0.01)。本试验成功构建了弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株,发现srs 19 d基因在弓形虫的体外生长、复制、毒力和慢性感染中发挥重要作用,为进一步探究SRS19D的功能和作用机制提供参考。
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关键词
弓形虫
表面
抗原
1
相关
序列
(SRS)
srs19d
成簇规律间隔短回文重复-CRISPR
相关
蛋白
9(CRISPR/Cas9)
生物学功能
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职称材料
题名
弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D基因的原核表达及蛋白定位研究
被引量：
1
1
作者
刘辉
米荣升
贾海燕
王旭
黄燕
张烨华
张晓丽
杨衡
韩先干
陈兆国
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海)农业农村部动物寄生虫学重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2020年第4期17-23,共7页
基金
国家重点研发计划(2018YFD0502305)
国家农产品质量安全风险评估计划项目(GJFP201900022)
+2 种基金
国家自然科学基金项目(31302083)
上海市科委技术标准专项项目(16DZ0501900)
中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2019JB13)。
文摘
为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性;利用His柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,制备抗血清,通过间接ELISA检测血清效价;利用免疫荧光法检测蛋白在弓形虫速殖子中的定位。结果显示:成功构建了原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,表达产物约为55 kDa;重组蛋白能与感染弓形虫的小鼠血清发生特异性反应,免疫兔血清效价达到1∶51 200;免疫荧光检测结果显示,SRS47D蛋白分布在弓形虫速殖子表面,尤其前部和后部表膜。上述结果为进一步深入研究弓形虫SRS47D的特性和功能奠定了基础。
关键词
刚地弓形虫
表面抗原糖蛋白相关序列
原核表达
定位
Keywords
Toxoplasma gondii
surface antigen glycoprotein 1-related sequence
prokaryotic expression
location
分类号
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析
2
作者
牛水珠
潘明
葛层层
黄思扬
机构
扬州大学兽医学院
教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2024年第8期10-17,共8页
基金
江苏省杰出青年基金项目(BK20190046)
江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)。
文摘
为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能,本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本,运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs 19 d敲除虫株,并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体外缓殖子转化试验、小鼠毒力试验和小鼠脑包囊检测试验。噬斑试验和细胞内增殖试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株在人包皮成纤维(HFF)细胞上形成的噬斑显著变小(P<0.05),纳虫泡内形成的速殖子个数显著减少(P<0.05)。体外缓殖子转化试验发现,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株的体外缓殖子转化率极显著降低(P<0.01)。小鼠毒力试验结果显示,与Pru虫株相比,弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株不会引起ICR小鼠的死亡(P<0.05)。小鼠脑包囊检测试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株感染小鼠后形成的脑包囊数量极显著减少(P<0.01)。本试验成功构建了弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株,发现srs 19 d基因在弓形虫的体外生长、复制、毒力和慢性感染中发挥重要作用,为进一步探究SRS19D的功能和作用机制提供参考。
关键词
弓形虫
表面
抗原
1
相关
序列
(SRS)
srs19d
成簇规律间隔短回文重复-CRISPR
相关
蛋白
9(CRISPR/Cas9)
生物学功能
Keywords
Toxoplasma gondii
surface antigen 1-related sequences(SRS)
srs 19 d
CRISPR/Cas9
biological function
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D基因的原核表达及蛋白定位研究
刘辉
米荣升
贾海燕
王旭
黄燕
张烨华
张晓丽
杨衡
韩先干
陈兆国
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2020
1
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职称材料
2
弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析
牛水珠
潘明
葛层层
黄思扬
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2024
0
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