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细粒棘球绦虫EgM123表面展示型酿酒酵母菌株的构建及免疫原性初步评价
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作者 贾新月 马静 +6 位作者 普娜 赵文卿 陈旭珂 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期378-391,共14页
旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123... 旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。诱导培养表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123,并进行体外分析,通过免疫荧光分析以及BCA蛋白定量法对EgM123蛋白进行定位鉴定及定量分析。诱导表达表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123菌株并免疫BALB/c小鼠。通过检测小鼠血清中抗体及细胞因子水平变化评价细粒棘球绦虫EgM123口服酵母活载体菌株的免疫效果。结果成功克隆了细粒棘球绦虫EgM123的ORF序列,长度为594 bp。PCR检测以及酶切鉴定结果表明,成功构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。免疫荧光结果显示,EBY100/pYD1-EgM123表面具有绿色荧光,BCA蛋白定量法测定50 OD_(600 nm)EBY100/pYD1-EgM123诱导72 h后蛋白的表达量为15.59μg,浓度为0.31μg/OD_(600 nm)。抗体水平检测结果表明,EBY100/pYD1-EgM123免疫组特异IgG、IgA、IgM抗体的分泌均高于PBS组、EBY100组及EBY100/pYD1组(P<0.05)。细胞因子检测发现,EBY100/pYD1-EgM123免疫组对小鼠细胞因子IL-17、IFN-γ的分泌量显著加强(P<0.001)。综上所述,通过对细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株免疫效果的初步评价,发现该口服活载体菌株具有免疫原性,可以刺激小鼠产生特异性免疫应答,进一步说明其具有成为终末宿主抗囊型包虫候选疫苗的潜力。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgM123 表面展示型酿酒酵母 口服疫苗
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酵母表面展示技术在食品发酵领域的应用研究进展 被引量:1
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作者 李悦 姬翔 +3 位作者 李颜 井蕾 牛明福 李阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期322-328,共7页
酵母表面展示系统与其他种类的微生物展示系统相比,更适合于构建食品发酵所用的全细胞催化剂。该文主要概述了酵母表面展示技术的原理及其在食品发酵领域的应用情况和应用效果。研究表明,酵母表面展示技术在改善传统发酵食品品质、简化... 酵母表面展示系统与其他种类的微生物展示系统相比,更适合于构建食品发酵所用的全细胞催化剂。该文主要概述了酵母表面展示技术的原理及其在食品发酵领域的应用情况和应用效果。研究表明,酵母表面展示技术在改善传统发酵食品品质、简化发酵生产过程、生产高值和增值食品等方面具有较大的应用潜力。该综述还对酵母表面展示技术在食品领域应用的未来研究方向进行了展望,以期为食品发酵的技术革新和工业化应用提供参考。 展开更多
关键词 酵母 表面展示技术 发酵食品 应用 研究进展
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酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示乙醛脱氢酶以及检测乙醛的应用
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作者 杜祥坤 费康清 +3 位作者 王亚森 白佳文 中西秀树 李子杰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第22期318-326,共9页
乙醛是对人体有毒的化合物,乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)能将乙醛氧化为无毒的乙酸,同时将NAD(P)+转化为NAD(P)H。目前检测乙醛的方法繁琐且耗时费力,该研究采用酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示热带假丝酵母(Candida tr... 乙醛是对人体有毒的化合物,乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)能将乙醛氧化为无毒的乙酸,同时将NAD(P)+转化为NAD(P)H。目前检测乙醛的方法繁琐且耗时费力,该研究采用酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示热带假丝酵母(Candida tropicalis)LBBE-W1来源的乙醛脱氢酶,建立一种新颖快速检测乙醛的方法。首先,基于蛋白质免疫印迹与荧光结果证实ALDH能够在孢子中表达且定位在孢子壁上。然后,测定了孢子表面展示ALDH与游离ALDH的酶学性质。结果显示,孢子表面展示ALDH和游离酶的最适温度与pH值分别为40℃和9.0;与游离酶相比,孢子表面展示ALDH具有更高的活性,以及更佳的温度与pH稳定性。此外,孢子表面展示ALDH对十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、蛋白酶K具有更强的耐受性;孢子表面展示ALDH与游离乙醛脱氢酶的最适底物都是乙醛,并且孢子表面展示ALDH具有良好的重复使用性能。最后,将孢子表面展示ALDH作为生物传感器检测乙醛,结果表明在0~500μmol/L的乙醛浓度范围内具有良好的线性关系,其R2值为0.9992。该研究成功构建一种新颖的生物传感器,为乙醛的检测提供一种新的方法。 展开更多
关键词 孢子表面展示 乙醛脱氢酶 生物传感器 酿酒酵母 乙醛检测
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量子点荧光标记在重组噬菌体表面展示肽与胰岛素受体相互作用中的应用 被引量:9
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作者 李鸿梅 刘含智 +4 位作者 张皓 朱贵宾 王丽萍 杨柏 李惟 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期982-984,共3页
Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experi... Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experimental result shows that the labeling phage can still infect E.coli K91 normally. We have also developed the procedures for using QDs to label CHO-IR cells and Mouse Kidney tissue slice. The tissue slice remained stably labeled for over 10 d and the cells remained stably labeled even for over 5 months. 展开更多
关键词 量子点荧光标记 重组噬菌体表面展示 胰岛素受体 相互作用 生物荧光标记 光谱学
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利用枯草芽孢衣壳蛋白表面展示β-半乳糖苷酶 被引量:5
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作者 王贺 杨瑞金 +2 位作者 华霄 赵伟 张文斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1-5,共5页
分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)芽孢衣壳蛋白CotB、CotC、CotG和CotX的启动子和编码序列与来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus IAM11001)的β-半乳糖苷酶基因bgaB进行重组,构建融合表达cotB-bgaB、cotC-bgaB... 分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)芽孢衣壳蛋白CotB、CotC、CotG和CotX的启动子和编码序列与来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus IAM11001)的β-半乳糖苷酶基因bgaB进行重组,构建融合表达cotB-bgaB、cotC-bgaB、cotG-bgaB和cotX-bgaB的整合型重组质粒。将4种重组质粒分别转入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168(trp-),获得了能在芽孢表面展示的重组菌株PB701、PB702、PB703和PB704。经Western blot检测,4种重组菌株均表达了预期分子量的融合蛋白,初步表明β-半乳糖苷酶被锚定在重组菌株的芽孢表面。以oNPG为底物测定4种重组菌株芽孢表面展示β-半乳糖苷酶的水解能力,得到的酶活分别为0.14、0.06、0.22和0.20 U/mL。 展开更多
关键词 芽孢 表面展示 Β-半乳糖苷酶 WESTERN BLOT
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热带假丝酵母木糖还原酶在酿酒酵母细胞表面展示 被引量:5
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作者 陈璐菲 杜红丽 +2 位作者 林影 曾琦锴 郑穗平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期29-34,共6页
利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表面展示系统,将来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖还原酶基因xyl1嵌入带有His-Tag的酿酒酵母α-凝集素展示载体pICAS-His,构建重组质粒pICAS- His-Ctxyl1,并转化到酿酒酵母宿主菌... 利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表面展示系统,将来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖还原酶基因xyl1嵌入带有His-Tag的酿酒酵母α-凝集素展示载体pICAS-His,构建重组质粒pICAS- His-Ctxyl1,并转化到酿酒酵母宿主菌酿酒酵母MT8—1,通过流式细胞仪快速检测和筛选,得到重组菌株MT8- 1/pICAS-His—Ctxyl1。将重组酵母用于葡萄糖(15g/L)和木糖(5g/L)的混合糖发酵研究,结果表明,重组酿酒酵母MT8/1/pICAS-His—Ctxyl1细胞具有良好的生长和产酶特性,同时能转化木糖生产木糖醇,在培养基中2.5g/ L木糖转化生成2.5g/L木糖醇,转化率达98.7%。 展开更多
关键词 木糖还原酶 酿酒酵母表面展示 木糖 木糖醇
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绵羊DRA基因外显子2酵母表面展示库的构建及鉴定 被引量:3
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作者 许万云 王会敏 +4 位作者 汪文伦 胡梦薇 严国 李建华 高剑峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第3期568-576,共9页
根据绵羊DRA基因序列和酿酒酵母表面展示载体pYD1上的多克隆位点设计特异性引物,从绵羊组织中提取总RNA并逆转录,利用PCR技术扩增得到DRA基因,克隆获得762bp目的片段,并提交GenBank,登录号:KR422362。将该基因通过双酶切连接到表面展示... 根据绵羊DRA基因序列和酿酒酵母表面展示载体pYD1上的多克隆位点设计特异性引物,从绵羊组织中提取总RNA并逆转录,利用PCR技术扩增得到DRA基因,克隆获得762bp目的片段,并提交GenBank,登录号:KR422362。将该基因通过双酶切连接到表面展示载体pYD1上,成功构建了酿酒酵母表面展示重组质粒pYD1-DRA。将DRA基因外显子2两端进行基因点突变,形成新的酶切位点,继而对外显子2设计特异性引物,对绵羊大样本进行DNA池化,并将外显子2扩增产物测序,分析其多态性获得多态位点。重组质粒双酶切得到246bp具有多态性的外显子2,将其连接到经同样酶双酶切的表面展示重组突变载体pYD1-DRA-TB上,成功构建了酿酒酵母表面展示库。将其转化用于表面展示的酿酒酵母EBY100感受态细胞中,得到酵母转化子,挑取酵母菌的单克隆通过PCR扩增及序列测定证实了DRA基因库已成功整合到酿酒酵母基因组中。经半乳糖诱导后,通过免疫荧光法在荧光显微镜下检测得到DRA基因库已成功展示在酵母细胞表面。 展开更多
关键词 绵羊 DRA 外显子2 点突变 酵母表面展示 免疫荧光法
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基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示 被引量:3
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作者 郭恒 刘娟 +6 位作者 李慧萍 王学林 孙树民 张茂林 高丽芳 徐德启 刘明远 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第S1期51-54,共4页
为验证冰核蛋白表面展示系统的可行性与优越性,将编码狂犬病毒(Rabies virus,RV)主要免疫保护性抗原糖蛋白G基因片段融合到丁香假单胞菌冰核蛋白截断的N端,构建表面展示载体pET28a-INP-RVG。转化大肠埃希菌BL21(DE3)后16℃低温诱导表达,... 为验证冰核蛋白表面展示系统的可行性与优越性,将编码狂犬病毒(Rabies virus,RV)主要免疫保护性抗原糖蛋白G基因片段融合到丁香假单胞菌冰核蛋白截断的N端,构建表面展示载体pET28a-INP-RVG。转化大肠埃希菌BL21(DE3)后16℃低温诱导表达,SDS-PAGE检测表明在约78 ku和56 ku处有明细的蛋白带出现,大小与理论值相符。完整细胞ELISA实验结果表明,重组蛋白在大肠埃希菌表面成功展示。为进一步研制基于沙门菌的多抗原表位展示性重组疫苗、新型狂犬病疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 冰核蛋白 表面展示 狂犬病毒 大肠埃希菌
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植物乳杆菌LAI的酵母表面展示 被引量:2
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作者 刘佩 阮晖 +3 位作者 沈生荣 周倩 马鎏鏐 何国庆 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第9期140-146,共7页
为了研究亚油酸异构酶(LAI)的功能并构建基因工程菌株,克隆了植物乳杆菌lp15-2-1的lai基因并对其编码序列进行分析比对,随后将其融合酵母信号肽序列和α-凝集素锚定序列,构建酵母表面展示载体;使用电击法转化酿酒酵母K601,并在尿嘧啶缺... 为了研究亚油酸异构酶(LAI)的功能并构建基因工程菌株,克隆了植物乳杆菌lp15-2-1的lai基因并对其编码序列进行分析比对,随后将其融合酵母信号肽序列和α-凝集素锚定序列,构建酵母表面展示载体;使用电击法转化酿酒酵母K601,并在尿嘧啶缺失型培养基上筛选出转化子.氨基酸序列比对分析表明,LAI与肌球蛋白交叉反应抗原蛋白家族同源性极高,N端含有一个半保守的黄素腺嘌呤二核苷酸结合基序.对酵母工程菌株的研究表明,LAI成功地在酵母细胞表面展示,酶活在诱导培养48 h时达到最大,为40.5 U/mL.气相色谱检测发现,酵母工程菌株能够合成单一的c9t,11-共轭亚油酸异构体. 展开更多
关键词 植物乳杆菌 酿酒酵母 亚油酸异构酶 表面展示 黄素腺嘌呤二核苷酸
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毕赤酵母表面展示磷脂酶D高密度发酵优化 被引量:3
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作者 刘逸寒 薄嘉鑫 +3 位作者 乔婧 张超 王建玲 路福平 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2012年第8期184-187,共4页
利用基因工程手段构建获得的一株细胞表面展示表达磷脂酶D的毕赤酵母工程菌株GS115/pKFS-pld,通过摇瓶单因素筛选进行发酵条件优化,确定了最佳发酵条件为:诱导产酶阶段28℃,初始pH6.5,甲醇浓度1.5%,装液量为30 mL/250 mL,250 r/min摇床... 利用基因工程手段构建获得的一株细胞表面展示表达磷脂酶D的毕赤酵母工程菌株GS115/pKFS-pld,通过摇瓶单因素筛选进行发酵条件优化,确定了最佳发酵条件为:诱导产酶阶段28℃,初始pH6.5,甲醇浓度1.5%,装液量为30 mL/250 mL,250 r/min摇床培养144 h。在此优化条件下菌体量为19.6 g/L,酶活达17.8×10-7kat/g,分别是是优化前的1.38及1.44倍。同时进行了5 L规模发酵罐分批补料培养,结果表明15 mL(/L.h)速率流加甘油补料培养基6 h后,采用溶氧恒定流加法流加甲醇,诱导132 h后,菌体量及PLD活力分别达到67.4 g/L及27.3×10-7kat/g,是摇瓶发酵水平的3.44倍及1.53倍。 展开更多
关键词 毕赤酵母表面展示 磷脂酶D 磷脂酰丝氨酸 发酵优化 酶活力
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表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的毕赤酵母FM22发酵培养基响应面优化 被引量:3
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作者 陈明祥 谢万勇 +3 位作者 廖锡豪 陈家驹 韩双艳 林影 《中国酿造》 CAS 2012年第10期52-56,共5页
FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自... FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自变量最佳值及高低水平,再采用Box-Behnken组合设计方法,模拟二次多项式回归方程的预测模型,研究各自变量及其交互作用对酶活力的影响。最终得到自变量最佳值:KH2PO445.02g/L、(NH4)2SO45.63g/L、CaSO40.46g/L、PTM4 1.63mL/L,酶活力为3214.7U/gDCW,较优化前提高约40%。 展开更多
关键词 毕赤酵母表面展示系统 南极假丝酵母脂肪酶B FM22培养基 响应面优化
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嗜酸乳杆菌S-层蛋白表面展示系统的构建及酶切位点分析 被引量:2
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作者 刘琼 王春凤 +2 位作者 杨桂连 秦守涛 刘曼 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第30期18421-18423,18434,共4页
[目的]克隆和表达嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,用其构建能承载外源抗原表位的乳酸菌细胞表面展示系统。[方法]以染色体DNA为模板克隆S-层蛋白基因SlpA,通过酶切、连接将其插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pW425et,构建表面展示系统pW425et-S... [目的]克隆和表达嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,用其构建能承载外源抗原表位的乳酸菌细胞表面展示系统。[方法]以染色体DNA为模板克隆S-层蛋白基因SlpA,通过酶切、连接将其插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pW425et,构建表面展示系统pW425et-S,并对酶切位点进行分析。[结果]将pW425et-S转化入thyA基因缺陷型E.coli X13感受态细胞,SDS-PAGE、Western-blotting、全细胞ELISA检测表明,在重组菌表面表达出S-层蛋白,构建出表面展示系统,确定BstEⅡ作为融合外源保护性抗原基因的酶切位点。[结论]克隆出嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,成功构建表面展示系统pW425et-S,为开发乳酸菌活载体口服活菌疫苗提供了可行性操作平台。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 S-层蛋白 表面展示系统
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有机磷水解酶及其细胞表面展示研究进展 被引量:3
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作者 廖上铁 黎小军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第4期2165-2167,共3页
对有机磷水解酶在酶学特性、蛋白结构和细胞表面展示等方面的研究进行了综述,并且对该领域的研究趋势进行了展望。
关键词 有机磷水解酶 细胞表面展示 有机磷农药
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酶联免疫吸附技术和噬菌体表面展示技术在食品检测中的应用
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作者 陆春 俞晓平 +1 位作者 王红 黄光荣 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2009年第5期125-128,共4页
介绍食品中可能存在的一些有害小分子物质,综述酶联免疫吸附技术和噬菌体表面展示技术在检测食品有害小分子物质中的应用,展望这两种技术目前存在的不足与今后发展的方向。
关键词 酶联免疫吸附技术 噬菌体表面展示技术 有害小分子物质
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人源蛋白酶体α亚基6的酵母表面展示及表达优化(英文)
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作者 唐语谦 林影 +1 位作者 韩双艳 梁世中 《陕西科技大学学报(自然科学版)》 2007年第6期1-6,共6页
为构建人源蛋白酶体α亚基6(hPSA6)的酵母表面展示体系用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,并优化hPSA6的展示表达,将基因PSA6_HUMAN克隆于表达载体pICAS-H,该载体带有His.tag标签可检测表达水平.经过重组酵母的培养,用抗His.tag... 为构建人源蛋白酶体α亚基6(hPSA6)的酵母表面展示体系用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,并优化hPSA6的展示表达,将基因PSA6_HUMAN克隆于表达载体pICAS-H,该载体带有His.tag标签可检测表达水平.经过重组酵母的培养,用抗His.tag或抗hPSA6的单克隆抗体和荧光二抗进行免疫荧光染色,通过流式细胞仪和荧光显微镜检测到hPSA6已经成功地展示于酿酒酵母表面.通过对培养基中不同初始浓度的葡萄糖和酸水解酪素的诱导培养,发现hPSA6呈现出不同的展示水平,与对照相比,对His.tag进行免疫荧光检测观测到3%酸水解酪素诱导培养可获得超过70%的展示表达率,3%葡萄糖诱导培养可达到50%以上表达率,2%葡萄糖诱导也有接近40%表达率.考虑到葡萄糖效应和灭菌过程中高浓度的葡萄糖易碳化,采用2%葡萄糖进行诱导表达较3%更适合于hPSA6的展示表达. 展开更多
关键词 泛素α蛋白酶体途径 蛋白酶体α亚基6 酵母表面展示
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噬菌体表面展示技术筛选胰高血糖样肽1受体N端片段的Exendin-4亲和位点
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作者 高蔚丰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16775-16777,共3页
[目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP... [目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP-1R与Exendin-4结合活性。[结果]nGLP-1R第30位、第46位和第92位氨基酸是其与Exendin-4结合的潜在位点。[结论]关键位点单个氨基酸残基的突变可以改变nGLP-1R蛋白质的生物学活性。 展开更多
关键词 胰高血糖素样肽1受体 EXENDIN-4 易错PCR 噬菌体表面展示
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细胞表面展示有机磷水解酶的研究概况
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作者 刘诚 万娟 倪红 《南方农业》 2017年第1期16-17,共2页
近年来,有机磷水解酶越来越多地被展示到不同的细胞表面。对有机磷水解酶的细胞表面展示技术的原理,大肠杆菌、假单胞菌、酵母菌等几种细胞表面展示有机磷水解酶系统的研究概况进行综述。
关键词 有机磷废水 有机磷水解酶 细胞表面展示
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表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的重组毕赤酵母高密度发酵条件优化 被引量:3
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作者 冯琮 林影 +2 位作者 梁书利 苏国栋 韩双艳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期29-34,共6页
以Invitrogen公司提供的毕赤酵母发酵工艺手册为依据,先用摇瓶模拟甘油分批发酵,确定了表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarcticlipase B,CALB)的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需几种重要配方的最佳浓度为:甘油含量40g/L、硫酸铵4... 以Invitrogen公司提供的毕赤酵母发酵工艺手册为依据,先用摇瓶模拟甘油分批发酵,确定了表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarcticlipase B,CALB)的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需几种重要配方的最佳浓度为:甘油含量40g/L、硫酸铵4g/L、PTM14mL/L和CaSO410mmol/L;然后利用多功能补料摇床确定了菌株最适生长和产酶的pH分别为5.5和7.0,最适生长和产酶温度为30℃;再在2L发酵罐上放大,并对甘油流加模式和甲醇流加模式进行了优化筛选,确定了以9.6mL/(L.h)的流速流加甘油12h能有效提高菌体密度;以6.4mL/(L.h)的流速恒速流加甲醇比恒定溶氧流加甲醇诱导产酶更佳。最终单位菌体酶活力可达348.4U/g,比甘油含量40g/L、硫酸铵10g/L、PTM14.35mL/L、CaSO40.93g/L,以6.4mL/(L.h)的流速流加甘油4h和以恒定溶氧流加甲醇的未优化条件下提高34.8%。最后通过细胞表面荧光强度检测和全细胞催化合成活力对比,发现优化后单位菌体展示的蛋白表达量得到提高。 展开更多
关键词 发酵优化 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 高密度
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传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立 被引量:2
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作者 贺文斌 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 刘淼 任广明 卢彤岩 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期662-667,共6页
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PC... 为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP 2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 传染性胰脏坏死病毒 VP2 酵母表面展示 细胞免疫荧光
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酿酒酵母表面展示β-淀粉酶及其酶学性质研究 被引量:2
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作者 杨华 樊游 +3 位作者 沈微 石贵阳 SurenSingh 王正祥 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期135-138,共4页
通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因,将其与酿酒酵母细胞壁蛋白α凝集素基因在读框内融合,构建得到表面展示载体pBA-AG,进一步将该重组质粒通过遗传转化,整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中,获得了β-淀粉酶经过α凝集素锚定信号... 通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因,将其与酿酒酵母细胞壁蛋白α凝集素基因在读框内融合,构建得到表面展示载体pBA-AG,进一步将该重组质粒通过遗传转化,整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中,获得了β-淀粉酶经过α凝集素锚定信号结合到细胞壁上的重组酵母。重组酵母表面展示的β-淀粉酶活力为131U/g干细胞。对展示的β-淀粉酶酶学性质研究表明,其最适反应温度为50℃,最适作用pH为5.0,与游离酶相比,其温度稳定性和pH稳定性均得到提高。本研究利用α凝集素系统首次将β-淀粉酶成功展示在酿酒酵母表面,为以酿酒酵母为基础的全细胞催化剂研究与应用打下了一定基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 Β-淀粉酶 表面展示 全细胞催化
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