靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选

1

作者 王卫东 蒋立新 +1 位作者 徐江平 陆兵勋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期30-33,共4页

目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进... 目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功。靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2最为明显。结论成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒。 展开更多

关键词 RNA干扰 质粒表达载体 短发卡样RNA hVEGF165基因

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杜氏盐藻荧光素酶基因表达载体的构建 被引量：3

2

作者 柴玉荣 王天云 +5 位作者 侯桂琴 侯卫红 谢华 袁保梅 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第1期29-31,共3页

目的 :构建盐藻荧光素酶基因表达载体。方法 :分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD -B、pMD -CA和pMD -rbcS ,胶回收适当的片段 ,T4DNA连接酶过夜连接 ,转化宿主菌大肠杆菌JM1 0 9。挑取阳性克隆 ,提取质粒DNA ,... 目的 :构建盐藻荧光素酶基因表达载体。方法 :分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD -B、pMD -CA和pMD -rbcS ,胶回收适当的片段 ,T4DNA连接酶过夜连接 ,转化宿主菌大肠杆菌JM1 0 9。挑取阳性克隆 ,提取质粒DNA ,酶切鉴定。结果 :得到含盐藻自身启动子碳酸酐酶 (CA)基因启动子、双倍重复碳酸酐酶 (DCA)基因启动子和来自衣藻的 1 ,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (rbcS)基因启动子 ,以及荧光素酶(Luc)基因为外源基因的 3个盐藻表达载体。结论 :构建了 3个杜氏盐藻荧光素酶表达载体。 展开更多

关键词 杜氏盐藻 荧光素酶基因 质粒表达载体

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pcDNA3.1(+)/t-PA真核表达质粒的构建及其在血管内皮细胞中的表达 被引量：4

3

作者 吴忠均 杨素芬 +3 位作者 李昱 吴维伟 郑树森 时德 《中国心血管杂志》 2004年第1期17-20,共4页

目的　利用基因工程技术克隆人组织纤溶酶原激活物 (t- PA)基因并构建一种能在血管内皮细胞 (VEC)中高效、安全表达 t- PA的 pc DNA3.1(+) / t- PA真核表达重组质粒。方法　采用高效 Trizol试剂快速从胎儿肺组织中提取总 RNA,RT- PCR获... 目的　利用基因工程技术克隆人组织纤溶酶原激活物 (t- PA)基因并构建一种能在血管内皮细胞 (VEC)中高效、安全表达 t- PA的 pc DNA3.1(+) / t- PA真核表达重组质粒。方法　采用高效 Trizol试剂快速从胎儿肺组织中提取总 RNA,RT- PCR获得 t- PA c DNA,并将真核表达质粒 pc DNA3.1(+)和 t- PA基因片段分别双酶切 ,将回收的 pc DNA3.1(+)大片段 (5 .0 kb)与 t- PA基因片段 (1.9kb)重组。对 pc DNA 3.1(+) / t- PA质粒进行酶切鉴定和测序。脂质体介导 pc DNA3.1(+) / t- PA转染血管内皮细胞 ,并用 RT- PCR法和 EL ISA法分别从 m RNA水平和蛋白质水平检测 t- PA的表达情况。结果　成功地从胎儿肺组织中克隆了 t- PA基因 ,并构建了以 pc DNA 3.1(+)为载体的真核表达质粒载体。pc DNA3.1(+) / t- PA转染血管内皮细胞后 ,t- PA表达增加 ,(n=6 ,P<0 .0 1)。结论　含t- 展开更多

关键词 组织纤溶酶原激活物 真核表达质粒载体 转染 内皮细胞

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H7亚型禽流感病毒血凝素基因的真核表达载体的构建及鉴定

4

作者 杨旭芹 梁光军 +2 位作者 张小荣 文其乙 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2004年第z1期31-34,共4页

参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确... 参考已发表的H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,以pUCH7为模板,经PCR扩增出一条1.7kb的HA全基因片段,将该片段定向克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(一)中,转化大肠埃希氏菌DH5α,小量制备重组质粒pcDNA-HA,酶切鉴定正确后,转染COS-1细胞,经免疫荧光鉴定其体外表达情况。结果表明H7亚型AIV HA在COS-1细胞中获得了成功表达。用该重组质粒pcDNA-HA免疫BALB／C小鼠,制备免疫血清,经免疫印迹实验证实该H7亚型AIV HA在小鼠体内也得到了良好的表达。 展开更多

关键词 H7亚型禽流感病毒 血凝素基因 真核表达质粒载体 表达

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质粒研究与载体构建

5

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第9期21-27,共7页

关键词 载体构建 质粒表达载体 启动子调控 酵母人工染色体 转座子 融合蛋白 表达系统 同源重组 穿梭载体 外源基因

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利用双顺反子系统在大肠杆菌中高表达bFGF(英文)

6

作者 黄更生 汪炬 +4 位作者 孙奋勇 李志英 张玲 洪岸 李贵生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期627-631,共5页

目的 :由于人碱性成纤维细胞生长因子编码基因结构存在不利于原核表达的因素 ,构建了双顺反子的大肠杆菌表达系统 ,以期提高其表达量。方法 :其中质粒表达载体pET - 3c携带的T7噬菌体Φ10基因N端氨基酸的编码序列为第一个顺反子 ,bFGF... 目的 :由于人碱性成纤维细胞生长因子编码基因结构存在不利于原核表达的因素 ,构建了双顺反子的大肠杆菌表达系统 ,以期提高其表达量。方法 :其中质粒表达载体pET - 3c携带的T7噬菌体Φ10基因N端氨基酸的编码序列为第一个顺反子 ,bFGF编码基因为第二个顺反子 ,二者同处于T7启动子的下游。结果 :将重组子转导表达菌BL2 1(DE3) ,并经IPTG诱导表达 ,表达量达到菌体总蛋白的 2 0 % ,并具有良好的活性。结论 展开更多

关键词 双顺反子 大肠杆菌 碱性成纤维细胞生长因子 质粒表达载体 pET—3c

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用于DNA疫苗的质粒大规模纯化研究进展

7

作者 汪洋 易力 王红宁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期51-53,共3页

关键词 质粒表达载体 DNA疫苗 质粒DNA 纯化 规模生产技术 转染细胞 基因克隆 动物体内

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基因标记、转化、表达与检测

8

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第4期32-38,共7页

关键词 启动子调控 基因标记 电激法 自主复制序列 荧光素酶 转染细胞 操纵子 包装细胞系 质粒表达载体 表达产物

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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆 被引量：6

9

作者 景志忠 郭爱疆 +2 位作者 海岗 宗瑞谦 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期391-396,共6页

研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。 展开更多

关键词 猪带绦虫 六钩蚴 免疫原 cDNA文库 克隆 构建 CDNA表达文库 基因组DNA 发育阶段 质粒表达载体 特异性引物 BLAST 基因家族 快速筛选 库容量 代表性 重组率 转录本

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聚乙烯亚胺及睡美人转座酶对基因免疫效果的影响 被引量：1

10

作者 高波 谢飞 +5 位作者 宋成义 曹访 赵琴 吴晗 孙丽亚 陈国宏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第12期15-17,共3页

关键词 基因克隆 聚乙烯亚胺 免疫效果 睡美人 转座 质粒表达载体 免疫系统 质粒DNA

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DNA疫苗体内转染方法 被引量：1

11

作者 邓斌 余东游 +1 位作者 李卫芬 毛翔飞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期87-88,共2页

关键词 DNA疫苗 动物体内 转染 基因工程疫苗 质粒表达载体 抗原基因 基因插入 体内表达

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核酸疫苗研究进展 被引量：1

12

作者 杨大光 柴丽娜 +1 位作者 刘守川 王泽霖 《上海畜牧兽医通讯》 2007年第2期18-19,共2页

关键词 核酸疫苗 基因重组技术 质粒表达载体 DNA疫苗 抗原蛋白 基因疫苗 抗原基因 免疫应答

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医药其它

13

《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第1期95-98,共4页

编码HIV病毒一l或HIV病毒一2蛋白质的DNA序列是新的.含上述新序列的表达载体质粒也是新的.这些新的表达载体质粒转化大肠杆菌细胞后能在其中表达.

关键词 表达载体质粒 大肠杆菌细胞 七叶树素 病毒培养 陈玉梅 融合蛋白 分子克隆 链霉菌 克隆载体 SEPHAROSE

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疫苗

14

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第10期58-63,共6页

913286 百日咳杆菌毒素亚单位在枯草杆菌中表达[英]/Saris,P.E.J.…∥Finland Bio1echnology Lett.-1990,12(12).-873～878[译自DBA,1991,10(5),91-02556] 百日咳毒素(PT)亚单位(S1～S5)在枯草杆菌中表达.

关键词 百日咳毒素 表达载体质粒 融合蛋白 亚单位 基因克隆 启动子 FINLAND 百日咳杆菌 减毒沙门氏菌 接头插入

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激素和活性多肽

15

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第5期50-51,共2页

关键词 融合蛋白 活性多肽 胸腺素 切割位点 克隆载体 寄主细胞 表达载体质粒 生物学活性 信号肽序列 胰岛素原

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淋巴因子和干扰素

16

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第2期76-78,共3页

910536适应无血清培养基的Namalwa KJM-1细胞表达的人β-干扰素[英]/Miyaji,H.…∥Cytotechnology.-1990,3(2).-133～140(17页)[译自DBA,1990,9(13),90-07503]构建了表达载体质粒pAGE107,将之与质粒pSE-β-1-2融合。

关键词 表达载体质粒 淋巴因子 启动子 无血清培养基 细胞生长 表达系统 生物学活性 电穿孔 RNA 预诱导

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医药其他

17

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第7期72-81,共10页

912289 重组人弹性蛋白原的生产:免疫活性和趋化性的鉴定及证明[英]/Indik,Z.…∥Arch.Biochem.Biophys.-1990,280(1).-80～86[译自DBA,1990,9(23),90-13491] 天然弹性蛋白原不容易大量制得,这使其结构-功能关系及纤维组成的研究受到限... 912289 重组人弹性蛋白原的生产:免疫活性和趋化性的鉴定及证明[英]/Indik,Z.…∥Arch.Biochem.Biophys.-1990,280(1).-80～86[译自DBA,1990,9(23),90-13491] 天然弹性蛋白原不容易大量制得,这使其结构-功能关系及纤维组成的研究受到限制.为克服这一局限。 展开更多

关键词 表达载体质粒 编码人 弹性蛋白 逆病毒载体 劳氏肉瘤病毒 巴斯德毕赤酵母 启动子调控 基因表达系统 基因转移 Biophys

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激素和活性多肽

18

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第6期76-77,共2页

关键词 重组质粒 活性多肽 启动子 编码序列 基因融合 表达载体质粒 生物学活性 融合蛋白 多克隆位点 载体转染

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疫苗

19

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第8期65-70,共6页

关键词 疫苗生产 减毒活菌苗 痘苗病毒 亚单位 恶性疟原虫 重组疫苗 抗独特型抗体 百日咳杆菌 表达载体质粒 免疫原

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激素和活性多肽

20

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第9期75-78,共4页

912999 人类催乳激素在大肠杆菌中的表达和部分纯化[英]/Gilbert,M.S.…∥Int.J.Biochem.-1991,23(1).-107～114[译自DBA,1991,10(3),91-01334] 在大肠杆菌HB101中克隆并表达了一种编码人催乳激素的基因.将编码信号肽序列和全长催乳激... 912999 人类催乳激素在大肠杆菌中的表达和部分纯化[英]/Gilbert,M.S.…∥Int.J.Biochem.-1991,23(1).-107～114[译自DBA,1991,10(3),91-01334] 在大肠杆菌HB101中克隆并表达了一种编码人催乳激素的基因.将编码信号肽序列和全长催乳激素分子的cDNA片段克隆到表达载体质粒pUR291中。 展开更多

关键词 融合蛋白 表达载体质粒 催乳激素 片段克隆 酵母表达质粒 活性多肽 β-葡糖苷酸酶 基因克隆 信号肽序列 载体转化

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