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基因ifi56在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的表达及其真核表达质粒的构建
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作者 张长林 许桂平 +3 位作者 肖澍 李冬 贾培敏 童建华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期1159-1162,共4页
本研究探讨ifi56基因在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的表达,构建人ifi56真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位情况。用RT-PCR技术检测APL细胞NB4经维甲酸处理不同时间后ifi56的表达,并从白血病细胞NB... 本研究探讨ifi56基因在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的表达,构建人ifi56真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位情况。用RT-PCR技术检测APL细胞NB4经维甲酸处理不同时间后ifi56的表达,并从白血病细胞NB4中扩增ifi56全长编码序列,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,转染到293T细胞中,提取细胞蛋白,用Western blot方法检测蛋白表达情况,荧光显微镜检测IFI56的定位。结果表明,ifi56在未经处理的NB4细胞中几乎检测不到,当用维甲酸处理72小时后明显升高,并成功将ifi56插入到质粒pEGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为83 kD。IFI56重组蛋白在293T细胞内主要定位于细胞胞浆中。结论:ifi56表达随着APL细胞分化明显升高,成功构建ifi56基因真核表达载体,IFI56蛋白主要定位于细胞浆。 展开更多
关键词 ifi56基因 全反式维甲酸 急性早幼粒细胞白血病 真核表达质粒构建
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小鼠白细胞介素33真核表达质粒的构建及表达
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作者 朱俊丰 桑力轩 +7 位作者 杨芳丽 李岩 翟景波 高植鹏 邓芳博 孙逊 王大南 吕昌龙 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期60-63,共4页
克隆小鼠IL-33基因构建其真核表达质粒,并转染COS-7细胞检测其表达。提取C57BL/6小鼠肺组织总RNA,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增小鼠IL-33基因,酶切后插入pc DNATM3.1/myc-His A构建其真核表达质粒pc DNA-3.1-IL-33,重组质粒转染C... 克隆小鼠IL-33基因构建其真核表达质粒,并转染COS-7细胞检测其表达。提取C57BL/6小鼠肺组织总RNA,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增小鼠IL-33基因,酶切后插入pc DNATM3.1/myc-His A构建其真核表达质粒pc DNA-3.1-IL-33,重组质粒转染COS-7细胞,RT-PCR和免疫印迹法(western blotting)检测目的基因表达。结果显示,pc DNA3.1-IL-33中插入的片段序列测定结果与小鼠IL-33c DNA序列一致,重组质粒转染COS-7细胞后检测到相应mRNA及蛋白表达。成功克隆了小鼠IL-33基因c DNA,并构建其真核表达质粒。 展开更多
关键词 白细胞介素33 基因克隆 表达质粒构建 真核表达
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抗卵巢癌单链免疫细胞因子真核表达载体的构建及表达 被引量:4
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作者 张辛燕 冯捷 +4 位作者 叶雪 姚煜 程洪艳 成夜霞 付天云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期484-490,共7页
为将细胞因子IL 2靶向卵巢癌局部 ,提高肿瘤局部细胞因子的浓度 ,构建并表达了抗卵巢癌单链免疫细胞因子IL 2 1 83B2scFv .通过基因工程将两段基因IL 2和 1 83B2scFv开放读码框架的编码序列克隆在一起 ,在CHO细胞内人巨细胞病毒启动子... 为将细胞因子IL 2靶向卵巢癌局部 ,提高肿瘤局部细胞因子的浓度 ,构建并表达了抗卵巢癌单链免疫细胞因子IL 2 1 83B2scFv .通过基因工程将两段基因IL 2和 1 83B2scFv开放读码框架的编码序列克隆在一起 ,在CHO细胞内人巨细胞病毒启动子的作用下表达可溶性融合蛋白 .酶联免疫吸附法检测其免疫学活性 ,并检测其促淋巴细胞增殖活性 .构建成功的抗体细胞因子融合蛋白能够在哺乳动物细胞内表达并能分泌到细胞外 ,且融合蛋白既能与卵巢癌相关抗原OC1 83B2很好地结合 ,又能刺激IL 2依赖细胞株的增殖 。 展开更多
关键词 卵巢癌 单链抗体 IL-2 质粒构建表达
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海洋创伤弧菌反式翻译系统关键因子SmpB基因的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 刘鹏 岑妍慧 +4 位作者 林江 梁忠秀 兰太进 韩丝银 陈振兴 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期100-106,共7页
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋... 创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋白与创伤弧菌致病性之间的关系并以此开发新型的抑菌靶标奠定基础。使用LiCl沉淀法提取创伤弧菌基因组DNA,以它为模板,PCR扩增目的基因,并构建到pET-28a原核表达载体上测序鉴定后对SmpB序列进行生物信息学分析,将正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定。结果表明使用LiCl沉淀法成功提取到高质量创伤弧菌基因组DNA,以其为模板,扩增到smpB基因,并成功构建pET-28a原核表达重组质粒,测序鉴定正确;smpB基因全长为486 bp,编码161个氨基酸,分子量为18.41 kD,理论等电点为10.28,不稳定系数为35.02,总平均亲水性为-0.635,SmpB蛋白整体表现为稳定亲水性蛋白。生物信息学分析显示其高级结构核心部分为5个β折叠组成的桶状结构,外围由3个α螺旋组成,SmpB C-端亦为α螺旋。诱导表达的重组融合蛋白相对分子质量大小在25.0 kD附近,显示在E.coli中成功表达了SmpB蛋白。 展开更多
关键词 创伤弧菌 小蛋白B 原核表达质粒构建 基因表达
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鸡Elovl2基因组织表达谱及脂代谢功能研究 被引量:1
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作者 徐钰芳 孙洁 +3 位作者 韩琪 郁建锋 徐璐 顾志良 《中国家禽》 北大核心 2022年第3期9-16,共8页
为探究Elovl2基因在鸡体内的生物学功能,对鸡ELOVL2蛋白的理化性质进行分析,通过RT-qPCR技术检测该基因在鸡各组织中的表达情况。将Elovl2基因过表达重组质粒与最佳干扰片段分别转染鸡LMH细胞系,通过RT-qPCR技术检测Elovl2基因及脂代谢... 为探究Elovl2基因在鸡体内的生物学功能,对鸡ELOVL2蛋白的理化性质进行分析,通过RT-qPCR技术检测该基因在鸡各组织中的表达情况。将Elovl2基因过表达重组质粒与最佳干扰片段分别转染鸡LMH细胞系,通过RT-qPCR技术检测Elovl2基因及脂代谢相关基因mRNA水平的变化,利用GC-MS技术检测细胞内相关脂肪酸含量的变化。结果显示:鸡ELOVL2蛋白属于稳定蛋白,该基因mRNA主要表达于脑和肝脏组织。转染pcDNA3.1-Elovl2后,基因相对表达水平显著上升,过表达重组质粒构建成功。三组siRNA均显著抑制Elovl2基因表达,抑制效果最佳的为siRNA-681。抑制Elovl2基因表达后,pck1基因的表达量较对照组相比上升2倍,但二者差异不显著。过表达Elovl2基因后,各种脂肪酸含量均有所增加,而经RNAi技术抑制Elovl2基因表达后,各种脂肪酸则有不同程度减少,受其影响最明显的为C22∶1N9。试验结果为进一步研究鸡Elovl2基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 Elovl2基因 表达重组质粒构建 RNAI技术 RT-QPCR
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