瓜实蝇嗅觉受体基因的克隆及表达谱分析 被引量：22

1

作者 申建梅 胡黎明 +1 位作者 宾淑英 林进添 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期265-271,共7页

昆虫的嗅觉受体是一个高度变异的蛋白家族,其中一类Or83b嗅觉受体在不同昆虫体内高度保守,在昆虫的行为调控过程中起到十分重要的作用。为进一步探讨Or83b受体的功能,本研究利用RT-PCR和RACE方法克隆获得瓜实蝇Bactrocera cucurbitae(Co... 昆虫的嗅觉受体是一个高度变异的蛋白家族,其中一类Or83b嗅觉受体在不同昆虫体内高度保守,在昆虫的行为调控过程中起到十分重要的作用。为进一步探讨Or83b受体的功能,本研究利用RT-PCR和RACE方法克隆获得瓜实蝇Bactrocera cucurbitae(Coquillett)Or83b-like受体的全长cDNA序列,命名为BcucOr83b-like(GenBank登录号:HM745934)。测序结果表明,BcucOr83b-like开放阅读框全长1422bp,编码473个氨基酸残基。氨基酸序列比对表明,此序列具有Or83b受体的典型特征,序列中具有7个跨膜区和高度保守的C端区域。BcucOr83b-like与其他昆虫的Or83b具有较高的氨基酸序列一致性,其中与桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)Or83b的序列一致性高达99.6%。对该基因在瓜实蝇成虫不同组织和发育时期表达量的荧光定量PCR分析表明,BcucOr83b-like主要在瓜实蝇成虫触角中表达,头部(去除触角)、雌虫前足和翅中也有较高的表达;瓜实蝇在各个发育时期的表达水平不同,在刚羽化雌成虫中的表达量最高。本研究为深入研究瓜实蝇Or83b受体的功能提供了理论依据。 展开更多

关键词 瓜实蝇 嗅觉受体蛋白 Or83b 基因克隆 表达谱分析 荧光定量PCR

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苜蓿盲蝽气味结合蛋白基因Alin-OBP1的克隆及表达谱分析 被引量：15

2

作者 谷少华 张雪莹 +2 位作者 张永军 吴孔明 郭予元 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期487-496,共10页

有证据表明昆虫气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)与其嗅觉识别密切相关,起着运输外界脂溶性气味分子通过嗅觉感器淋巴液到达嗅觉受体的关键作用。为了更好地了解OBPs在苜蓿盲蝽Adelphocoris lineolatus(Goeze)嗅觉识别中的... 有证据表明昆虫气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)与其嗅觉识别密切相关,起着运输外界脂溶性气味分子通过嗅觉感器淋巴液到达嗅觉受体的关键作用。为了更好地了解OBPs在苜蓿盲蝽Adelphocoris lineolatus(Goeze)嗅觉识别中的作用,本研究首次克隆了苜蓿盲蝽气味结合蛋白基因Alin-OBP1(GenBank序列号GQ477022)。测序和序列分析结果表明,该基因开放阅读框长438bp,编码145个氨基酸,预测分子量为15.69kDa,等电点为5.01,N-末端疏水区包含由18个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中有6个保守的半胱氨酸残基。利用RT-PCR和Real-timePCR技术对Alin-OBP1在苜蓿盲蝽成虫不同组织和各个发育阶段的表达水平进行了测定,结果显示Alin-OBP1几乎全部在触角中表达。不同发育阶段Alin-OBP1表达量不同,在5龄若虫和成虫阶段表达水平最高。结果提示Alin-OBP1可能在苜蓿盲蝽感受包括性信息素在内的外界化合物的过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 苜蓿盲蝽 气味结合蛋白 基因克隆 表达谱分析 发育阶段

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绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4的克隆及取食不同寄主植物后的表达谱分析 被引量：10

3

作者 孙洋 柏立新 +3 位作者 张永军 肖留斌 谭永安 吴国强 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期641-650,共10页

胰蛋白酶类和胰凝乳蛋白酶类丝氨酸蛋白酶是盲蝽科昆虫消化系统内重要的消化酶。为了更好地了解丝氨酸类蛋白酶在绿盲蝽Apolygus lucorum消化系统中的作用,本研究首次克隆了绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4(GenBank登录号为JQ609682)。序... 胰蛋白酶类和胰凝乳蛋白酶类丝氨酸蛋白酶是盲蝽科昆虫消化系统内重要的消化酶。为了更好地了解丝氨酸类蛋白酶在绿盲蝽Apolygus lucorum消化系统中的作用,本研究首次克隆了绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4(GenBank登录号为JQ609682)。序列分析结果表明,该基因开放阅读框长999bp,编码332个氨基酸,预测分子量为36.84kDa,理论等电点为5.35,N末端疏水区包含有16个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有丝氨酸蛋白酶的典型特征,即氨基酸序列中具有组氨酸(His)、天门冬氨酸(Asp)以及丝氨酸(Ser)残基组成的酶活性催化中心三元件;该基因翻译后还具有明显的胰蛋白酶前体的特征,即此基因具有信号肽、激活肽以及胰蛋白酶N末端保守的起始氨基酸序列(IVGG)。利用荧光定量PCR技术对绿盲蝽雌、雄成虫取食不同寄主植物后AlSP4的表达谱进行分析,结果表明:相对于其他寄主植物,雌成虫取食Bt棉后AlSP4的表达量最高,并显著高于取食常规棉后的表达量(P<0.01)。雄成虫取食茼蒿后AlSP4的表达量最高;雄成虫取食Bt棉后,AlSP4的表达水平仅次于取食茼蒿后的表达量,也显著高于取食常规棉后的表达量(P<0.01)。由此可见,AlSP4是绿盲蝽取食Bt棉后的重要消化酶基因,对绿盲蝽适应Bt棉取食具有重要作用。 展开更多

关键词 绿盲蝽 丝氨酸蛋白酶 胰蛋白酶 表达谱分析 寄主植物

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中华蜜蜂DNA甲基化转移酶Dnmt3基因克隆及表达谱分析 被引量：6

4

作者 刘亭亭 刘俊峰 +4 位作者 王文祥 王欢 王子龙 曾志将 颜伟玉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期284-290,共7页

为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4... 为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4日龄蛹,1日龄蜂王和产卵蜂王)头部的Dnmt3基因mRNA的表达量。结果表明:该基因cDNA序列全长2277bp,编码758个氨基酸残基,预测的蛋白分子量为88.24kD,等电点为7.85。将中华蜜蜂与其他物种的Dnmt3基因的结构域进行比对,同时将该基因推导的氨基酸序列与其他物种的Dnmt3氨基酸序列进行同源性比对和系统发育分析,发现与西方蜜蜂的Dnmt3序列一致性高达99%。该基因在工蜂和蜂王不同发育时期均有表达,1日龄工蜂与7日龄工蜂中没有显著差异(P>0.05),30日龄工蜂中的表达量显著高于前两者(P<0.05);蜂王蛹中的表达量显著高于工蜂蛹(P<0.05);1日龄的蜂王中的表达量显著高于1日龄的工蜂(P<0.05);产卵工蜂与产卵蜂王中的表达量没有差异(P>0.05)。这种表达情况提示其可能与工蜂劳动分工及蜜蜂卵巢发育有关。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 DNA甲基化 DNA甲基化转移酶 基因克隆 序列分析 表达谱分析

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绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的鉴定及表达谱分析 被引量：5

5

作者 孙洋 柏立新 +3 位作者 张永军 肖留斌 谭永安 盛洋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期991-998,共8页

从绿盲蝽成虫体内克隆了1个丝氨酸蛋白酶基因,命名为AlSP3(GenBank序列号JQ609681)。经序列分析,该基因开放阅读框长1 041 bp,编码346个氨基酸,预测分子量为3.872×104,理论等电点为9.35,N-末端疏水区包含有19个氨基酸组成的信号肽... 从绿盲蝽成虫体内克隆了1个丝氨酸蛋白酶基因,命名为AlSP3(GenBank序列号JQ609681)。经序列分析,该基因开放阅读框长1 041 bp,编码346个氨基酸,预测分子量为3.872×104,理论等电点为9.35,N-末端疏水区包含有19个氨基酸组成的信号肽。蛋白质特征分析结果表明,该基因翻译后的蛋白质具有丝氨酸蛋白酶的典型特征。利用荧光定量PCR技术对绿盲蝽取食不同寄主植物后AlSP3基因的表达谱进行分析,结果表明:相对于其他寄主植物,雌成虫取食转Bt基因棉花后AlSP3基因的表达量最高,比对照上升了11.62倍,并显著高于取食常规棉(P<0.01);雌成虫取食常规棉后,AlSP3基因的表达量上升了6.42倍,仅次于取食Bt棉和豇豆,并显著高于取食其他寄主植物(P<0.01)。雄成虫取食常规棉后,AlSP3基因的表达水平仅次于取食蚕豆,上升了9.37倍,并显著高于取食Bt棉(P<0.01)。由此可见,AlSP3基因是绿盲蝽成虫取食常规棉后的重要消化酶基因,并对雌成虫适应取食Bt棉具有重要作用。 展开更多

关键词 绿盲蝽 丝氨酸蛋白酶 表达谱分析 寄主 BT棉

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阳春砂磷酸甲羟戊酸激酶的基因克隆与表达谱分析 被引量：9

6

作者 杨恩泽 陆颖锶 +1 位作者 吴秋红 王峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期95-101,共7页

目的：为了了解阳春砂磷酸甲羟戊酸激酶（PMK）的功能与表达特性，根据阳春砂的转录组注释设计引物，PCR 克隆阳春砂甲羟戊酸途径中的关键酶磷酸甲羟戊酸激酶基因的编码区 cDNA，使用生物信息学方法对其编码的蛋白进行相似性检索及同源... 目的：为了了解阳春砂磷酸甲羟戊酸激酶（PMK）的功能与表达特性，根据阳春砂的转录组注释设计引物，PCR 克隆阳春砂甲羟戊酸途径中的关键酶磷酸甲羟戊酸激酶基因的编码区 cDNA，使用生物信息学方法对其编码的蛋白进行相似性检索及同源序列比对，构建进化树，预测二级及三级结构并分析其功能，探索其各器官中的表达差异．结果：获得了全长1539 bp 的编码阳春砂 PMK 的 cDNA 序列，命名为 AvPMK （GenBank 登录号：KF569902），编码由512个氨基酸组成的磷酸甲羟戊酸激酶，该蛋白含有 GHMP 激酶超家族特异的 N －保守区域、C －保守区域和 ATP 结合位点 Gly-X-Gly-XX-Ala．AvPMK 与其他植物的 PMK 氨基酸相似性达61％～69％，进化树结果显示其与二穗短柄草（Brachypodium distachyon）等单子叶植物具有较近的亲缘关系．AvPMK 蛋白包含14个α-螺旋（Alpha helix），占37.1％；16个β链（Beta strand），占15.6％；32个无规则卷曲结构，占47.3％，无跨膜结构域，其3级结构含有一个催化反应的口袋状结构域．实时荧光定量 PCR 结果显示 AvPMK 基因在叶中表达量较高，茎、根中表达量相对较低．结论：首次从阳春砂仁中扩增磷酸甲羟戊酸激酶的基因片段，为分析其基因表达特性及其在砂仁萜类生物合成中的功能奠定基础． 展开更多

关键词 磷酸甲羟戊酸激酶 阳春砂 萜类化合物 基因克隆 表达谱分析

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异色瓢虫气味结合蛋白基因HaxyOBP1和HaxyOBP6的克隆及表达谱分析 被引量：3

7

作者 韩世鹏 梁超 +3 位作者 李新兵 韩慧 赵锋 何运转 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期284-293,共10页

【目的】本研究旨在探索异色瓢虫Harmonia axyridis气味结合蛋白的结构和分布,更好地了解气味结合蛋白在异色瓢虫嗅觉系统中的作用。【方法】利用生物信息学方法克隆异色瓢虫2个气味结合蛋白基因序列并对其蛋白结构进行分析;通过实时荧... 【目的】本研究旨在探索异色瓢虫Harmonia axyridis气味结合蛋白的结构和分布,更好地了解气味结合蛋白在异色瓢虫嗅觉系统中的作用。【方法】利用生物信息学方法克隆异色瓢虫2个气味结合蛋白基因序列并对其蛋白结构进行分析;通过实时荧光定量PCR分析克隆获得的这2个基因在异色瓢虫各个发育阶段和成虫不同组织中的表达水平。【结果】本研究成功克隆得到异色瓢虫两个气味结合蛋白基因HaxyOBP1和HaxyOBP6(GenBank登录号分别为MG757923和MG757927)。HaxyOBP1开放阅读框全长447 bp,编码148个氨基酸,具有6个保守的半胱氨酸,表明HaxyOBP1属于Classic OBPs。HaxyOBP1在异色瓢虫各发育阶段均有表达,在雄性成虫中表达量最高;组织表达谱分析表明HaxyOBP1在雄虫头部表达量最高。HaxyOBP6开放阅读框全长414 bp,编码137个氨基酸,具有4个保守的半胱氨酸,表明HaxyOBP6属于Minus-C OBPs。HaxyOBP6在成虫期的表达量明显高于幼虫阶段,并且在雄成虫中的表达量显著高于雌成虫;组织表达谱分析表明HaxyOBP6在雄成虫头部和雌成虫翅中表达量最高。【结论】本研究克隆得到异色瓢虫两个气味结合蛋白基因,表达谱分析表明HaxyOBP1和HaxyOBP6分别在异色瓢虫成虫头和翅中具有较高的表达水平,说明气味结合蛋白基因可能在异色瓢虫非嗅觉组织中同样具有重要作用。本研究结果为深入研究异色瓢虫气味结合蛋白结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 异色瓢虫 气味结合蛋白 基因克隆 表达谱分析 实时荧光定量PCR

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不同温度影响下绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的表达谱分析 被引量：3

8

作者 盛洋 孙洋 +2 位作者 柏立新 肖留斌 谭永安 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期541-548,共8页

利用荧光定量PCR技术，系统分析了不同温度处理下绿盲蝽成、若虫丝氨酸蛋白酶基因A1SP3的表达谱。结果表明：在24℃下，若虫各虫龄AISP3表达量差异未达到显著水平fP〉0．05）．而雌虫交配前期与雄虫交配后期的A1SP3表达量分别达l龄若虫... 利用荧光定量PCR技术，系统分析了不同温度处理下绿盲蝽成、若虫丝氨酸蛋白酶基因A1SP3的表达谱。结果表明：在24℃下，若虫各虫龄AISP3表达量差异未达到显著水平fP〉0．05）．而雌虫交配前期与雄虫交配后期的A1SP3表达量分别达l龄若虫对照的19．71倍与7．16倍，显著高于其他时期。但在21～30℃内，4～5龄若虫AISP3的表达量随温度升高而上升，2～5龄若虫在30℃时AISP3的表达量均达最高；不同温度处理下，刚羽化、交配前的雌、雄成虫的A1SP3的表达量较24℃对照均显著升高（P〈0．01）；而交配后的雌、雄成虫的表达量却是18℃下显著高于其他温度处理。此外，极端温度4℃与40℃诱导后，雌、雄成虫AISP3的表达量均显著高于24℃。绿盲蝽AISP3的表达谱综合分析表明，外在环境温度与绿盲蝽虫龄与性别因素均可显著影响绿盲蝽A1SP3的表达量（P〈0．01），并存在一定的互作效应。由此可见，AJSP3对于绿盲蝽雌成虫早期获取寄主营养具有重要作用，并且温度是影响AISP3表达的一个很重要的因素。 展开更多

关键词 绿盲蝽 丝氨酸蛋白酶 表达谱分析 温度

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高血压性脑出血患者血清MicroRNA表达谱分析 被引量：1

9

作者 杨维明 邵鸿飞 +5 位作者 曹英肖 郭玉霞 孔世奇 李占欣 郑兆强 吴文增 《世界中医药》 CAS 2016年第B06期1839-1840,共2页

目的寻找HICH患者血浆中是否存在差异表达的miRNAs，分析此类mjRNAs在出血后不同时间的变化规律。方法：抽取100例HICH患者和50例健康体检者外周静脉血，运用RNA抽提技术，获取血中总RNA。采用Agilent芯片技术进行miRNAs表达谱研究，初... 目的寻找HICH患者血浆中是否存在差异表达的miRNAs，分析此类mjRNAs在出血后不同时间的变化规律。方法：抽取100例HICH患者和50例健康体检者外周静脉血，运用RNA抽提技术，获取血中总RNA。采用Agilent芯片技术进行miRNAs表达谱研究，初步筛选差显表达miRNAs，按时间因素将100例脑出血分为〈6h、6—23h、24—71h、≥72h4组，采用荧光定量RT—PCR技术miRNAs在出血后不同时间的变化规律。结果：在HICH患者周围血液中发现6个与出血相关的miRNAs，且在不同时间点有显著差异性表达：miRNA-16、miRNA-19b、miRNA—107、miRNA-92a和miRNA-223表达上调，miRNA—1183表达下调。结论：发现高血压性脑出血病人外周静脉血中存在着与高血压性脑出血相关特异性的miRNA，为高血压性脑出血病人的发病机制研究奠定理论基础。 展开更多

关键词 MICRORNA 脑出血患者 表达谱分析 高血压性 MIRNAS 外周静脉血 脑出血病人 血清

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形态观察、RNA-Seq定量和表达谱分析:南瓜砧木嫁接西瓜类胡萝卜素生物合成的新见解 被引量：1

10

作者 刘广 羊杏平(编译) 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2019年第8期178-179,共2页

目的与意义:西瓜(Citrullus lanatus)属于葫芦科家族的一员,是一种重要的园艺作物,以其营养多汁的果肉闻名全世界.西瓜种植效益较高,但受枯萎病的影响,不能在同一园区实现连年栽培.嫁接技术的应用有效地解决了西瓜不能连作的难题.为了... 目的与意义:西瓜(Citrullus lanatus)属于葫芦科家族的一员,是一种重要的园艺作物,以其营养多汁的果肉闻名全世界.西瓜种植效益较高,但受枯萎病的影响,不能在同一园区实现连年栽培.嫁接技术的应用有效地解决了西瓜不能连作的难题.为了充分发掘果实发育期南瓜砧木对嫁接西瓜基因表达的影响及鉴定参与嫁接西瓜番茄红素生物合成的基因,本研究以自根西瓜、自根嫁接西瓜、南瓜嫁接西瓜果实四个发育时期的瓜瓤组织为试验材料,利用HPLC测定番茄红素的含量,并用RNA-Seq(quantification)技术及qRT-PCR进行了基因组范围内转录本的研究. 展开更多

关键词 嫁接西瓜 南瓜砧木 生物合成 类胡萝卜素 表达谱分析 形态观察 果实发育期 番茄红素

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基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR基因表达谱分析平台的构建、优化及其应用

11

作者 王勤熙 李凯 +1 位作者 周宇荀 肖君华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期552-560,共9页

文章建立并优化了一种基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR技术,该技术采用了嵌合特异引物引导荧光通用引物的扩增方案,多个目的基因被一对通用引物等比例扩增,从而实现多重定量检测。该技术实现了经济可靠的中通量基因表达定量研究,弥补... 文章建立并优化了一种基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR技术,该技术采用了嵌合特异引物引导荧光通用引物的扩增方案,多个目的基因被一对通用引物等比例扩增,从而实现多重定量检测。该技术实现了经济可靠的中通量基因表达定量研究,弥补了基因表达分析平台中cDNA芯片定量准确性低和Real-time quanti-tative PCR通量小的缺点,完善了整个基因表达的分析过程。文章以小鼠X染色体上影响性发育启动的QTL区段为例,选择11个目的基因进行了技术构建及优化,确定了该技术的检测灵敏度为102拷贝,通用引物与上游嵌合特异引物的比例以1:1为佳,并且验证了该技术的重复性和准确性。降落式(Touchdown)PCR结合通用引物补加实验表明,该优化步骤可大大改善低丰度表达基因的扩增。通过对2个品系(C3H/HeJ和C57BL/6J)15日龄小鼠的下丘脑和睾丸组织中的11个基因的表达分析,在下丘脑中找到了一个差异表达的基因PHF6可用于进一步的基因功能研究。 展开更多

关键词 通用引物 多重定量RT-PCR 基因表达谱分析 性发育启动

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大麻FT同源基因CsHd3a的克隆及表达谱分析 被引量：4

12

作者 李铮 潘根 +5 位作者 陶杰 黄思齐 唐慧娟 邓勇 赵立宁 李德芳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期41-49,共9页

为探究FT基因在大麻光周期途径中调控开花的作用,从工业大麻品种庆麻1号(Q1)中使用PCR技术克隆了FT同源基因cDNA序列,命名为CsHd3a。利用生物信息方法对该基因序列特征进行了分析,并使用实时荧光定量(qRT-PCR)技术研究其组织特异性表达... 为探究FT基因在大麻光周期途径中调控开花的作用,从工业大麻品种庆麻1号(Q1)中使用PCR技术克隆了FT同源基因cDNA序列,命名为CsHd3a。利用生物信息方法对该基因序列特征进行了分析,并使用实时荧光定量(qRT-PCR)技术研究其组织特异性表达模式。选取了晚花品种云麻7号(Y7)与早花品种Q1使用qRT-PCR技术进行了长、短日照下的表达谱分析,并分别克隆了2个品种的CsHd3a基因,对其氨基酸序列进行了差异分析。结果表明,CsHd3a基因CDS全长为543 bp,编码180个氨基酸,包含PEBP家族蛋白结构域。系统进化分析表明,CsHd3a蛋白与棉花的GhFT1蛋白亲缘关系最近。组织特异性分析表明,大麻CsHd3a基因在叶片中高表达,在根和茎中几乎不表达。qRT-PCR分析结果表明,Q1在短日照(SD)处理下表现出节律性变化,且在8:00达到最高,而在长日照(LD)处理下几乎不表达。SD条件下,早花品种Q1 CsHd3a基因表达量显著高于晚熟品种Y7。此外,CsHd3a氨基酸序列在Q1和Y7存在5处氨基酸差异,其差异是否因其保守结构域PEBP功能的变化还有待进一步研究。综上,获得了CsHd3a基因的CDS序列,初步探究了早、晚花品种Q1和Y7 CsHd3a基因的时空表达模式,为探究大麻开花光周期途径的机理奠定了研究基础。 展开更多

关键词 大麻 CsHd3a 基因克隆 生物信息学分析 表达谱分析

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白桑bZIP基因家族的全基因组鉴定及表达谱分析 被引量：5

13

作者 邓璇 陈春兵 +3 位作者 刘练练 邓静 李娟 查幸福 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期477-488,共12页

碱性亮氨酸拉链转录因子(bZIP)是真核生物中广泛存在的转录因子,对于植物生长发育的作用意义非凡。通过同源检索在白桑基因组中共鉴定得到50个MabZIP基因,其仅在桑树的12条染色体上分布,且分布不均匀。理化性质分析发现有27个bZIP的等... 碱性亮氨酸拉链转录因子(bZIP)是真核生物中广泛存在的转录因子,对于植物生长发育的作用意义非凡。通过同源检索在白桑基因组中共鉴定得到50个MabZIP基因,其仅在桑树的12条染色体上分布,且分布不均匀。理化性质分析发现有27个bZIP的等电点小于7.0,表明桑树的bZIP家族成员超过一半为酸性蛋白,亚细胞定位预测50个bZIP蛋白皆位于细胞核。参照拟南芥bZIP分支情况可将桑树的bZIP分为12个亚族,其中A亚族蛋白数目最多。桑树bZIP家族的同一亚族具有相似的外显子数目,不同亚族外显子数目从1~18个不等。组织表达分析表明,桑树bZIP家族大部分基因在根、茎、叶和果实中均有表达,少数基因只在特定组织表达。研究结果为桑树bZIP的克隆及功能研究提供了理论支撑。 展开更多

关键词 白桑 碱性亮氨酸拉链转录因子 全基因组鉴定 表达谱分析

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广西巴马小型猪PAQR3基因克隆及表达谱分析 被引量：1

14

作者 司景磊 黄玥萌 +7 位作者 李龙 陈秋明 严雪瑜 吴延军 张笠 蒋钦杨 兰干球 郭亚芬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1390-1395,共6页

【目的】克隆广西巴马小型猪孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)基因,并研究该基因在广西巴马小型猪不同组织中的表达特性,为揭示PAQR3的功能及其在疾病模型中的作用打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增广西巴马小型猪PAQR3基因,应用在线预... 【目的】克隆广西巴马小型猪孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)基因,并研究该基因在广西巴马小型猪不同组织中的表达特性,为揭示PAQR3的功能及其在疾病模型中的作用打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增广西巴马小型猪PAQR3基因,应用在线预测软件对其功能和结构进行生物信息学分析,并以q RT-PCR分析PAQR3基因在不同组织中的表达特性及高脂高糖诱导后的表达水平。【结果】广西巴马小型猪PAQR3基因编码区(CDS)序列全长936 bp,编码312个氨基酸,与人类(XM_006714106.2)、猕猴(NM_001257693.1)、牛(XM_010806259.1)、家犬(XM_014109889.1)、家鼠(XM_006534874.2)、羊(XM_012180242.1)、鸡(XM_001233720.3)PAQR3氨基酸序列的一致性在81%以上,其中与猕猴的亲缘关系最近,与牛的亲缘关系相对较远。PAQR3蛋白氨基酸序列包含保守的Hly IⅡ结构域,为亲水性蛋白,有7个跨膜螺旋结构;其二级结构主要是延伸链,占31.83%;该蛋白不存在信号肽,不属于分泌蛋白。q RT-PCR分析结果表明,PAQR3基因在广西巴马小型猪的不同组织中均有表达,以在肺脏中的表达量最高、脂肪中的表达量最低;经高脂高糖诱导后,PAQR3基因在广西巴马小型猪肝脏组织中的表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】PAQR3基因在广西巴马小型猪不同组织中广泛表达,在胆固醇和甘油三脂充裕的条件下,机体可通过下调PAQR3基因的表达量来平衡胆固醇含量。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 PAQR3基因 克隆 表达谱分析

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ENC1的克隆,原核表达与数种细胞系表达谱分析 被引量：1

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作者 丰竹 张斌 +2 位作者 刘瑾 彭小忠 袁建刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期605-608,共4页

以人 3月胎脑总RNA为模板 ,用RT PCR的方法得到了ENC1(ectoderm neuralcortex 1)基因的cDNA ,经测序证实该cDNA的长度为 180 0bp ,包含ENC1的完整编码区 .将之克隆入pGEX 4T 1载体构建重组表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1表达 ,经Sepharose... 以人 3月胎脑总RNA为模板 ,用RT PCR的方法得到了ENC1(ectoderm neuralcortex 1)基因的cDNA ,经测序证实该cDNA的长度为 180 0bp ,包含ENC1的完整编码区 .将之克隆入pGEX 4T 1载体构建重组表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1表达 ,经Sepharose 4B纯化得到目的蛋白 .通过Northern印迹和RT PCR检验了该基因在数种细胞系中的表达 ,结果表明其在神经胶质母细胞瘤细胞系U2 5 1中有较高的表达 ,而在包括神经母细胞瘤细胞系SH SY5Y的其他数种细胞系中无表达 .与在正常生理状态下神经系统中两种细胞的表达情况相反 . 展开更多

关键词 ENC1 原核表达 细胞系 表达谱分析 蛋白纯化 神经细胞 基因克隆

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白桦BpNAC012基因调控白桦木质部发育表达谱分析 被引量：1

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作者 郭依萍 刘佳欣 +2 位作者 于颖 王超 杨传平 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期251-261,共11页

NAC转录因子成员被认为是调控植物次生壁合成的开关。前期研究结果显示BpNAC012基因的表达能够调控白桦次生细胞壁的合成。为研究BpNAC012调控的下游靶基因,本研究分别以该基因的过表达,抑制表达株系茎为材料构建转录组,以野生型为对照... NAC转录因子成员被认为是调控植物次生壁合成的开关。前期研究结果显示BpNAC012基因的表达能够调控白桦次生细胞壁的合成。为研究BpNAC012调控的下游靶基因,本研究分别以该基因的过表达,抑制表达株系茎为材料构建转录组,以野生型为对照分析差异表达基因。结果显示:与对照相比,过表达株系OE中上调的基因有627条,下调的基因有229条,抑制表达株系中上调的基因有299条,下调表达的基因有207条。过表达BpNAC012相对于抑制表达能够调控更多的基因表达变化。而抑制表达BpNAC012更多的是影响蛋白修饰和转运类基因的表达变化。在差异表达基因中,涉及受体信号通路,营养代谢,氨基酸合成,及苯丙烷生物合成相关代谢通路基因比较富集。BpNAC012能够调控纤维素、木质素合成及木质部发育相关基因的表达变化,同时能够调控多种转录因子的表达变化。该研究为深入分析BpNAC012在白桦次生细胞壁合成的分子调控机制奠定基础。 展开更多

关键词 白桦 BpNAC012 表达谱分析 木质部发育

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刺激隐核虫感染诱导斜带石斑鱼MHCIα和β_2m基因的表达谱分析 被引量：1

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作者 徐冬冬 徐舜 +1 位作者 吴凤依 罗晓春 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2145-2150,共6页

【目的】检验石斑鱼(Epinephelus coioides)MHCIα和β_2m基因是否参与诱导抗寄生虫免疫应答,为揭示鱼类免疫系统启动抗刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染的细胞免疫应答分子机制打下基础。【方法】以实时荧光定量PCR对刺激隐核虫... 【目的】检验石斑鱼(Epinephelus coioides)MHCIα和β_2m基因是否参与诱导抗寄生虫免疫应答,为揭示鱼类免疫系统启动抗刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染的细胞免疫应答分子机制打下基础。【方法】以实时荧光定量PCR对刺激隐核虫感染斜带石斑鱼前后MHC Iα和β_2m基因在感染局部位点和免疫器官中的表达变化进行检测。【结果】MHCIα和β_2m基因在健康斜带石斑鱼的组织中均呈组成性表达,且以在外周血、腮、头肾和脾脏中的表达量较高。经刺激隐核虫感染后,MHCIα和β_2m基因在斜带石斑鱼皮肤中的表达明显上调,均在感染后第5 d达峰值,其中MHCIα基因的最大表达量为2.6倍、β_2m基因的最大表达量为6.1倍;在腮中二者呈波动性变化,而在头肾中以显著下调为主。在脾脏中,MHCIα基因在刺激隐核虫感染后第5 d显著上调表达,为对照组的2.0倍,至感染后第7 d其表达水平略微下调,为对照组的1.5倍;β_2m基因表达于感染后12 h即升高至对照组的4.0倍,此后呈下调表达趋势,至感染后第5 d其表达水平再次上调为对照组的3.4倍。【结论】在刺激隐核虫感染过程中,斜带石斑鱼MHCIα和β_2m基因的相对表达量在皮肤、鳃、头肾和脾脏中均发生了明显变化,即鱼类MHCⅠ类分子可能参与了机体的细胞免疫,在抗寄生虫感染的特异性免疫应答过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 石斑鱼 刺激隐核虫 MHCIα基因 β2m基因 表达谱分析

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盐胁迫下旱地棉叶片数字化基因表达谱分析

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作者 翟彩娇 徐鹏 +4 位作者 范昕琦 郭琪 张香桂 徐珍珍 沈新莲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期481-489,共9页

为了深入研究棉花耐盐的分子机理,利用数字化基因表达谱技术,分析了盐胁迫处理3 h和72 h时旱地棉叶片中基因表达差异,分别获得1 778(1 046个上调、732个下调)和2 873(2 065个上调、808个下调)个差异表达基因。功能注释分析结果表明,这... 为了深入研究棉花耐盐的分子机理,利用数字化基因表达谱技术,分析了盐胁迫处理3 h和72 h时旱地棉叶片中基因表达差异,分别获得1 778(1 046个上调、732个下调)和2 873(2 065个上调、808个下调)个差异表达基因。功能注释分析结果表明,这些差异表达基因主要参与了信号转导、逆境应答、能量代谢和转录调节等方面。随机挑选10个差异表达基因进行qRT-PCR验证,结果表明,qRT-PCR结果与数字化基因表达谱分析结果基本一致。 展开更多

关键词 旱地棉 盐胁迫 数字化表达谱分析

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湖羊m^(6)A甲基转移酶METTL14基因CDS序列克隆及表达谱分析

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作者 张丹 陈博雯 +2 位作者 杨博辉 刘建斌 卢曾奎 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3047-3055,共9页

【目的】克隆湖羊甲基转移酶样蛋白14基因(METTL14)编码区(CDS)序列,探究其分子特征及组织表达分布规律,为揭示METTL14基因调控湖羊肌肉发育的特异性分子机制打下基础。【方法】提取湖羊肌肉组织RNA并反转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增ME... 【目的】克隆湖羊甲基转移酶样蛋白14基因(METTL14)编码区(CDS)序列,探究其分子特征及组织表达分布规律,为揭示METTL14基因调控湖羊肌肉发育的特异性分子机制打下基础。【方法】提取湖羊肌肉组织RNA并反转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增METTL14基因CDS序列,通过ProtParam、ProtScale、SignaIP-6.0等在线软件进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR进行湖羊METTL14基因组织表达谱分析。【结果】湖羊METTL14基因CDS序列全长1371 bp,共编码456个氨基酸残基;湖羊METTL14基因CDS序列与黄牛、人类、小鼠、大鼠、猕猴、山羊、弯角剑羚、马、双峰驼、野牦牛、野猪和水牛等12个参考物种的METTL14基因核苷酸序列相似性为89.28%~99.78%,对应的METTL14氨基酸序列相似性为98.66%~100.00%;基于METTL14基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,湖羊与山羊的亲缘关系最近,与双峰驼的亲缘关系较远。湖羊METTL14蛋白分子式为C2277H3575N669O709S16,分子量为52179.45 Da,理论等电点(pI)为5.89,不存在信号肽,无跨膜结构域,具有较强的亲水性,属于不稳定蛋白,主要分布在细胞核(占69.6%);湖羊METTL14蛋白包含12个α-螺旋和10个β-折叠,但以无规则卷曲为主。METTL14基因在湖羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、睾丸、肌肉及皮下脂肪中均有表达,以心脏中的相对表达量最高,而肝脏中的相对表达量最低。【结论】METTL14作为m^(6)A甲基化的核心蛋白,在物种进化过程中高度保守;METTL14基因在湖羊肌肉和脂肪等多个组织中均有表达,且表达量与机体的代谢活动相关,可作为调控湖羊肌肉生长发育的候选基因进一步研究。 展开更多

关键词 湖羊 METTL14基因 m6 A甲基化 表达谱分析

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沙葱萤叶甲钙结合蛋白基因的鉴定及表达谱分析 被引量：3

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作者 李爽 李玲 +2 位作者 周晓榕 庞保平 单艳敏 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1059-1069,共11页

【目的】沙葱萤叶甲Galeruca daurica是一种近年来在内蒙古草原上猖獗成灾的新害虫。本研究旨在克隆沙葱萤叶甲钙结合蛋白(calcium-binding protein,CaBP)基因,分析其在沙葱萤叶甲成虫不同发育阶段及不同温度下的表达谱,为进一步探究其... 【目的】沙葱萤叶甲Galeruca daurica是一种近年来在内蒙古草原上猖獗成灾的新害虫。本研究旨在克隆沙葱萤叶甲钙结合蛋白(calcium-binding protein,CaBP)基因,分析其在沙葱萤叶甲成虫不同发育阶段及不同温度下的表达谱,为进一步探究其在沙葱萤叶甲生长发育及滞育过程中的作用奠定基础。【方法】根据沙葱萤叶甲转录组和蛋白质组数据,筛选CaBP基因序列信息,应用RT-PCR技术克隆获得CaBP基因的开放阅读框(ORF)全长序列,并对其进行生物信息学分析;通过qPCR检测其在沙葱萤叶甲成虫不同日龄(羽化后3,7,10,15,20,30,40,60,90和110 d)及3日龄成虫在不同温度(0,5,10,15,20,25,30和35℃)下处理1 h后的表达水平。【结果】克隆得到4条具有完整ORF的沙葱萤叶甲CaBP基因cDNA序列,分别命名为GdCaM,GdCAPSL,GdTnCl和GdCRT(GenBank登录号:MN695412-695415),ORF全长分别为480,648,516和1209 bp,分别编码149,215,171和402个氨基酸;只有GdCRT拥有信号肽。同源序列比对和系统发育分析表明,GdCaM,GdCAPSL,GdTnCl和GdCRT分别与玉米根萤叶甲Diabrotica virgifera virgifera的CaM,CAPSL,TnCl及马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata CRT的氨基酸序列一致性最高,分别为100.0%,74.0%,88.2%和92.5%。qPCR结果表明,4个CaBP基因在沙葱萤叶甲不同日龄成虫中均差异表达,且表达模式不同。GdCaM在成虫滞育前(羽化后3 d)表达量较高,进入滞育后(羽化后7 d)表达量降低,在滞育期间(羽化后7-60 d)表达量变化较小,而解除滞育后(羽化后90 d)表达量进一步下调。GdCAPSL在滞育初期(羽化后10 d)维持在最低水平,进入滞育中后期(羽化后40和60 d)开始回升,滞育解除后又突然下调至最低水平,而羽化后110 d急剧上升至最高水平。GdTnCl在滞育初期(羽化后15-20 d)高表达,进入滞育中后期(羽化后30-60 d)急剧下降至最低水平,滞育解除后再次上调,但羽化后110 d突然下调至最低水平。GdCRT在进入滞育后表达量开始逐渐下调,在滞育维持期间(羽化后15-60 d)维持在低水平,滞育解除后又开始上升。温度对3日龄成虫中除GdCRT外的其他3个CaBP基因的表达有显著影响。温度低于20℃时,GdCaM的表达量随温度的降低而升高,但0℃时突然下降;温度高于20℃时,GdCaM的表达量随着温度的升高而上升。GdCAPSL的表达量随着温度的升高而呈现上升的趋势,25℃时达到最高,然后下降。GdTnCl随着温度的升高,表达量呈现下降的趋势。【结论】钙结合蛋白可能在沙葱萤叶甲成虫生长发育及夏滞育调控过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 沙葱萤叶甲 钙结合蛋白 基因克隆 表达谱分析 夏滞育 温度

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