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基因枪介导bar基因表达盒转化甜玉米初步研究
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作者 祁喜涛 吴景 +3 位作者 杨婷 文天祥 郑锦荣 胡建广 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第S1期15-17,28+5,共5页
以超甜玉米优良自交系1132幼胚的愈伤组织为受体材料,采用基因枪介导法将bar基因表达盒(启动子+基因+终止子)导入胚性愈伤组织,经选择培养、胚状体诱导、再生等过程,获得38个株系共101株转基因玉米。对转基因植株的叶片涂抹除草剂basta... 以超甜玉米优良自交系1132幼胚的愈伤组织为受体材料,采用基因枪介导法将bar基因表达盒(启动子+基因+终止子)导入胚性愈伤组织,经选择培养、胚状体诱导、再生等过程,获得38个株系共101株转基因玉米。对转基因植株的叶片涂抹除草剂basta进行抗性鉴定,其中有8个株系共22株表现抗性;进一步进行PCR分析,结果表明,其中有6个株系共15株为阳性。试验结果初步证明bar基因已整合到1132的基因组中,转化效率为3%。转基因表达盒完整性分析表明,bar基因表达盒在受体基因组中的结构是完整的。 展开更多
关键词 基因枪介导 BAR基因 基因表达盒 玉米
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大豆叶绿体多顺反子单交换表达载体的构建 被引量:3
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作者 常玲 张江 +2 位作者 陈俊 张银波 马立新 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期26-30,共5页
根据已知序列(GeneBankX076075),设计引物,用PCR方法获得了一段大豆叶绿体DNA片段,命名为soy。将来源于质粒pBluescriptSK( +)的含氨苄抗性基因Ampr和大肠杆菌质粒复制起始点ColE1ori的一段DNA片段克隆到这段大豆叶绿体DNA片段中,然后... 根据已知序列(GeneBankX076075),设计引物,用PCR方法获得了一段大豆叶绿体DNA片段,命名为soy。将来源于质粒pBluescriptSK( +)的含氨苄抗性基因Ampr和大肠杆菌质粒复制起始点ColE1ori的一段DNA片段克隆到这段大豆叶绿体DNA片段中,然后与由三个基因(壮观霉素抗性基因aadA、甘露聚糖酶基因man及绿色荧光蛋白基因gfp)串联的表达盒相连,以构建大豆叶绿体多顺反子表达载体pCS。并在大肠杆菌中通过平板定性分析和Western印迹的方法对所构建载体上的表达盒进行了功能鉴定,结果表明同一多顺反子的三个基因均得到了表达。 展开更多
关键词 大豆 叶绿体 表达盒 功能鉴定 多顺反子 单交换
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采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体的构建
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作者 陈波 王熙 +1 位作者 贺新生 张义正 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期181-185,共5页
为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈,本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR,从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1基因组DNA扩增获得glaA 2.1 kb启动子片段(包含信号... 为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈,本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR,从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1基因组DNA扩增获得glaA 2.1 kb启动子片段(包含信号肽编码序列)及1.1kb终止子片段,构建了外源基因表达盒。以根瘤农杆菌双元载体pCAMBIA1302为基础,删除非必需区段及多余限制酶位点,插入上述外源基因表达盒及来自丝状真菌标记载体pAN7-1的潮霉素抗性标记,构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉分泌整合型表达载体pSUAA52am。转化结果表明:采用原生质体法的转化效率为21个转化子/10~6分生孢子,而农杆菌介导法可达1106个转化子/10~6分生孢子,是原生质体法的53倍。构建载体成功利用glaA表达盒与农杆菌介导转化法的高效特性,可为利用泡盛曲霉高效表达外源基因奠定基础。 展开更多
关键词 泡盛曲霉 glaA表达盒 农杆菌介导转化法 表达载体
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人凝血因子IX在脆壁克鲁维酵母中的表达与分泌 被引量:1
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作者 姚笑迪 霍克克 +2 位作者 方季 戈万忠 李育阳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期26-29,共4页
通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒... 通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒,得到了一个高稳定的h-FIX基因整合表达载体pHKB202-FP。经摇瓶培养并以半乳糖诱导此表达载体转化的酵母菌株,ELISA检测显示酵母上清液中的人凝血因子IX表达量可达到约200 ng/ml。此结果表明人凝血因子IX蛋白首次成功地在脆壁克鲁维酵母中得到了表达和分泌。这对于促进人凝血因子IX的基因工程产业化具有实际意义。 展开更多
关键词 凝血因子 脆壁克鲁维酵母 血友病 分泌信号序列 乳酸克鲁维酵母 基因调控型启动子 基因表达盒 IX蛋白
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南瓜多糖对2型糖尿病大鼠PDX-1 mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 刘洪凤 韩智学 +1 位作者 宋高臣 王桂云 《中国食物与营养》 2012年第2期64-65,共2页
目的:研究南瓜多糖对2型糖尿病(2-diabetes mellitus,2-DM)大鼠胰腺-十二指肠同源盒(PDX-1)基因表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为5组,A:正常对照组;B:模型组;C、D、E:南瓜多糖高、中、低剂量治疗组。8周后,半定量RT-PCR检测PDX-1m... 目的:研究南瓜多糖对2型糖尿病(2-diabetes mellitus,2-DM)大鼠胰腺-十二指肠同源盒(PDX-1)基因表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为5组,A:正常对照组;B:模型组;C、D、E:南瓜多糖高、中、低剂量治疗组。8周后,半定量RT-PCR检测PDX-1mRNA的表达水平。结果:与A组大鼠相比,2-DM模型组大鼠PDX-1mRNA基因表达减少(P<0.01);与B组相比,南瓜多糖治疗组大鼠PDX-1mRNA基因表达增加(P<0.05)。结论:南瓜多糖能上调2-DM大鼠PDX-1基因的表达。 展开更多
关键词 南瓜多糖 2型糖尿病 胰腺-十二指肠同源基因表达
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口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建 被引量:9
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作者 马鸣潇 金宁一 +6 位作者 刘慧娟 沈国顺 郑敏 金明兰 鲁会军 霍晓伟 马海利 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期288-294,共7页
针对我国口蹄疫(FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其... 针对我国口蹄疫(FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株)作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒(FPV)表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 复合多表位抗原 表达盒 OAAT口蹄疫病毒 鸡痘病毒
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伪狂犬病毒Sa株gI^-/gE^-/YFP^+基因缺失载体构建及突变株筛选 被引量:7
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作者 吕素芳 郭广君 +3 位作者 管宇 魏凤 张松林 沈志强 《中国动物检疫》 CAS 2009年第8期38-40,共3页
根据伪狂犬病病毒SA株的gI和gE基因序列,设计两对引物,缺失掉gE基因5'端738bp,在克隆测序的基础上,采用酶切方法构建了含部分gE基因的转移载体pBgIE,同时将pBLYFP载体上含CMV启动子、多克隆位点、黄色荧光蛋白(YFP)基因和polyA尾巴... 根据伪狂犬病病毒SA株的gI和gE基因序列,设计两对引物,缺失掉gE基因5'端738bp,在克隆测序的基础上,采用酶切方法构建了含部分gE基因的转移载体pBgIE,同时将pBLYFP载体上含CMV启动子、多克隆位点、黄色荧光蛋白(YFP)基因和polyA尾巴的表达盒双酶切后插入到缺失位置,构建转移载体,命名为pBgIE-YFP,为下一步开发以伪狂犬病病毒为载体的基因工程疫苗提供了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE/gI基因 黄色荧光蛋白(YFP)表达盒 转移载体
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酿酒酵母产泛酸工程菌株的构建与诱变 被引量:3
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作者 孙杰 姜杰 +1 位作者 任郑 魏春 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第3期134-137,142,共5页
泛酸具有重要的生理功能,参与糖、脂肪、蛋白质及能量的代谢,广泛用作微生物药物、食品添加剂和饲料添加剂.通过强化酿酒酵母泛酸生物合成途径的酮泛解酸羟甲基转移酶、酮泛解酸还原酶、泛酸合成酶和多胺氧化酶的表达水平,提高酵母泛酸... 泛酸具有重要的生理功能,参与糖、脂肪、蛋白质及能量的代谢,广泛用作微生物药物、食品添加剂和饲料添加剂.通过强化酿酒酵母泛酸生物合成途径的酮泛解酸羟甲基转移酶、酮泛解酸还原酶、泛酸合成酶和多胺氧化酶的表达水平,提高酵母泛酸合成量.在不含泛酸的培养基中培养102h后,泛酸质量浓度达到290μg/L.进一步对菌株BYPAN01进行微波辐照诱变,筛选到的突变株BYPAN02泛酸质量浓度较菌株BYPAN01和BY4741分别提高了43.3%和203.2%,达到415.7μg/L,为实现泛酸的环保和低成本合成提供了新的思路. 展开更多
关键词 酿酒酵母 泛酸 表达盒 微波辐射
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TANDEM REPEATING OF THE EXPRESSIONCARTRIDGE──A NOVEL STRATEGY TOENHANCE THE EXPRESSION EFFICIENCY OFCLONED GENE IN ESCHERICHIA COLI
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作者 林缨 卢圣栋 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1996年第4期204-208,共5页
A novel strategy to enhance the expression efficiency of cloned target gene in Escherichia coli was developed. The whole expression cartridge , consisting of promoter. SD sequence , target gene and transcription termi... A novel strategy to enhance the expression efficiency of cloned target gene in Escherichia coli was developed. The whole expression cartridge , consisting of promoter. SD sequence , target gene and transcription terminator, was tandem repeatedly engineered into a expression plasmid. Consequently, the copy number of specific gene was increased substantially, leading to the improvement of expression efficiency.Using this approach, a recombinant plasmid , designed as PLYD, was constructed and transformated into the Escherichia coli strain DH5α. Upon induction , the desired protein was synthesized in a considerable level and accumulated up to 63% of the total cell proteins. The present study revealed that tandem repeating of expression cartridge provided a convenient means to improve expression level efficiently. 展开更多
关键词 expression cartridge tandem repeating: high-level expression copy number
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