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siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
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作者 田生礼 刘桂云 +3 位作者 郑硕 梁惠卿 刘士德 张建华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1118-1125,共8页
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-M... 利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用. 展开更多
关键词 RNA干涉 多药耐药相关蛋白1 基因表达沉默 RNA二级结构
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小鼠黑色素细胞沉默及过表达色素上皮衍生因子对黑色素合成的影响
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作者 梁睿 范小瑞 +1 位作者 张晋强 庞全海 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3916-3930,共15页
旨在研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)与黑色素合成调控因子之间的互作关系,探索PEDF对黑色素细胞活力和黑色素合成的调控作用,为研究动物毛色形成机制提供基础。本研究将PEDF siRNA及PEDF过表达载体分别... 旨在研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)与黑色素合成调控因子之间的互作关系,探索PEDF对黑色素细胞活力和黑色素合成的调控作用,为研究动物毛色形成机制提供基础。本研究将PEDF siRNA及PEDF过表达载体分别转染小鼠黑色素细胞,对黑色素细胞活力、黑色素含量进行检测,采用qRT-PCR、Western blotting及细胞免疫荧光对PEDF、Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的表达和定位进行检测。黑色素细胞PEDF沉默后,黑色素细胞的细胞活力增强,黑色素含量增加,Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的mRNA和蛋白表达量升高;黑色素细胞PEDF过表达后,黑色素细胞活力减弱,黑色素含量减少,Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的mRNA和蛋白表达量降低。细胞免疫荧光结果显示:PEDF、Wnt1、MITF、β-catenin表达于黑色素细胞的细胞质;Wnt3α表达于黑色素细胞的细胞质和细胞膜。本研究证实:PEDF使黑色素细胞活力减弱,可通过下调促黑色素生成相关的因子Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin,从而抑制黑色素的生成。 展开更多
关键词 色素上皮衍生因子 PEDF 沉默和过表达 黑色素 小鼠黑色素细胞
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siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究 被引量:4
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作者 江晟 陈飞虎 +5 位作者 陈寸知 荣超 胡伟 吴繁荣 葛金芳 唐杰 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第3期256-262,共7页
目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法:通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1asiRNA-FAM,使用Lipo-fectamine 2000转染试剂盒... 目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法:通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1asiRNA-FAM,使用Lipo-fectamine 2000转染试剂盒将ASIC1asiRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及WesternBlot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1amRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用An-nexin-V/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:ASIC1asiRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1amRNA表达显著低于对照组(P<0.01),最大抑制率为85.4%;Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。Annexin-V/PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少。结论:siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节的表达有关。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 酸敏感离子通道(ASICs) 阳离子脂质体 表达沉默 细胞凋亡
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Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响 被引量:9
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作者 王吉利 张志海 +4 位作者 黄宏兴 万雷 刘海全 柴爽 汪悦东 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期841-846,873,共7页
目的基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响。方法将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉... 目的基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响。方法将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ME,Ad-bcl2+ME),用RT-q PCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化。结果 (1)荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;(2)在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05);(3)与NC-bcl2比较,RTq PCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;(4)在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均<0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均<0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化。结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达。 展开更多
关键词 补肾健脾活血方 UMR-106细胞 B淋巴细胞瘤-2 表达/沉默 骨形态发生蛋白2 骨保护素
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银屑病中miRNA的研究进展 被引量:9
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作者 詹理春 周萌 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期638-640,共3页
银屑病是一种慢性的炎症性皮肤病,其与遗传、免疫和感染等多种因素相关。在组织病理上以表皮角质形成细胞增殖加速、细胞分裂周期和表皮更替时间缩短为重要特点。miRNA属于一类长约19~24个核苷酸的非编码RNA,并广泛存在于从细菌、真... 银屑病是一种慢性的炎症性皮肤病,其与遗传、免疫和感染等多种因素相关。在组织病理上以表皮角质形成细胞增殖加速、细胞分裂周期和表皮更替时间缩短为重要特点。miRNA属于一类长约19~24个核苷酸的非编码RNA,并广泛存在于从细菌、真菌到人类的各生命体中。其通过招募RNA干扰途径中的蛋白组分或与染色体重排相关的蛋白因子到启动子区域抑制翻译,导致表达沉默,从而发挥控制基因表达的作用。近年来MicmRNA(miRNA)对于银屑病诊断治疗的研究越来越受到人们的关注。 展开更多
关键词 银屑病 MIRNA SIRNA 表达沉默
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