目的 :开发和利用中国梅花鹿的基因资源 ,以期拥有一批梅花鹿基因的专利 ,并在专利保护下生产具有自己知识产权的基因工程药物。方法 :用 Trizol试剂提取梅花鹿脾脏细胞中的总 RNA,分离得到 m RNA后 ,用逆转录方法合成与 m RNA互补的 c ...目的 :开发和利用中国梅花鹿的基因资源 ,以期拥有一批梅花鹿基因的专利 ,并在专利保护下生产具有自己知识产权的基因工程药物。方法 :用 Trizol试剂提取梅花鹿脾脏细胞中的总 RNA,分离得到 m RNA后 ,用逆转录方法合成与 m RNA互补的 c DNA单链 ,再以此 c DNA单链为模板 ,得到与该 c DNA互补的另一条 DNA链 ,将得到的 DNA双链分子通过合适的 Adapter连入 p SPORT1质粒 ,将此重组质粒通过电转化方法导入 E.coliDH5 α菌 ,得到脾脏细胞的 c DNA文库。筛选出阳性重组子 ,测序并分析得到的 ESTS序列。结果 :成功地构建了双阳型梅花鹿脾脏细胞 c DNA文库 ;并对部分库容 c DNA进行了克隆和测序 ,在这一过程中发现 4个与已知基因同源的表达序列标签 (ESTS) ,其中 2个 EST分别是梅花鹿视网膜母细胞瘤的同源基因和梅花鹿维生素 K依赖性蛋白前体 c DNA的部分序列。结论 :通过构建 c展开更多
文摘目的 :开发和利用中国梅花鹿的基因资源 ,以期拥有一批梅花鹿基因的专利 ,并在专利保护下生产具有自己知识产权的基因工程药物。方法 :用 Trizol试剂提取梅花鹿脾脏细胞中的总 RNA,分离得到 m RNA后 ,用逆转录方法合成与 m RNA互补的 c DNA单链 ,再以此 c DNA单链为模板 ,得到与该 c DNA互补的另一条 DNA链 ,将得到的 DNA双链分子通过合适的 Adapter连入 p SPORT1质粒 ,将此重组质粒通过电转化方法导入 E.coliDH5 α菌 ,得到脾脏细胞的 c DNA文库。筛选出阳性重组子 ,测序并分析得到的 ESTS序列。结果 :成功地构建了双阳型梅花鹿脾脏细胞 c DNA文库 ;并对部分库容 c DNA进行了克隆和测序 ,在这一过程中发现 4个与已知基因同源的表达序列标签 (ESTS) ,其中 2个 EST分别是梅花鹿视网膜母细胞瘤的同源基因和梅花鹿维生素 K依赖性蛋白前体 c DNA的部分序列。结论 :通过构建 c
