合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化 被引量：1

1

作者 毕晓敏 黄桂菊 +2 位作者 范嗣刚 朱文杰 喻达辉 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期100-106,共7页

为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主... 为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白p ET32a-Pearlin约为34.19 k D。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化。结果显示,IPTG浓度在0.6~1.4 mmol·L^(-1)范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmol·L^(-1)、相同培养时间(6 h)下,37℃表达蛋白最多;重组蛋白在p H分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4~6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3~4 h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白p ET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融合蛋白都主要以包涵体形式存在。 展开更多

关键词 合浦珠母贝 Pearlin 原核表达 表达条件优化 包涵体

在线阅读 下载PDF 职称材料

PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定 被引量：4

2

作者 张煜彬 叶路芬 +6 位作者 吴忠秀 薛维娜 何彬 杨畅 李勇军 王永林 刘亭 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期42-49,共8页

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化 亲和层析 蛋白质印迹法

在线阅读 下载PDF 职称材料

Aga0917-PGEX-4T-2-BL21(DE3)plySs表达条件优化

3

作者 王燕 马金 +1 位作者 苏晓满 郝英慧 《食品界》 2019年第4期138-140,共3页

琼脂是一类以半乳糖为主要成分的一种高分子多糖,琼脂酶可将琼胶水解,产生的低聚糖具有重要的生理学性质和生物学活性,益于人类健康。在相关分子生物学实验当中,琼脂酶也可以从琼脂糖凝胶当中回收DNA、分离海藻中的原生质体和研究海藻... 琼脂是一类以半乳糖为主要成分的一种高分子多糖,琼脂酶可将琼胶水解,产生的低聚糖具有重要的生理学性质和生物学活性,益于人类健康。在相关分子生物学实验当中,琼脂酶也可以从琼脂糖凝胶当中回收DNA、分离海藻中的原生质体和研究海藻细胞壁多糖结构和组成的工具酶。综上,琼胶酶具有十分广阔的研究发展前景。本实验主要探究Aga0917-PGEX-4T-2-BL21(DE3)plySs工程菌株发酵产酶的条件优化,以获得大量有活性的重组酶。 展开更多

关键词 表达条件优化 AG 分子生物学实验 生物学活性 高分子多糖 生理学性质 琼脂糖凝胶 琼脂酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

双酶共表达的条件优化及其硫辛酸中间体制备

4

作者 魏婷 姜灵 杨胜利 《发酵科技通讯》 CAS 2024年第4期197-202,共6页

为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUE... 为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUET。研究了2个酶在双启动子双表达载体中的顺序,考察了反应中的关键酶Cat_(S126A/R129Q/V194A),选择E.coli BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)作为生物催化剂。优化该表达系统的表达条件,结果表明:E.coli BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)的最适诱导温度为25℃,最适诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,最适诱导OD_(600)为3.0。优化后的比酶活达20.8 U/mg(湿细胞),较优化前提高了64%。在此基础上,以共表达优化条件下培养的重组菌为催化剂,以8-氯-6-氧代辛酸乙酯(ECOO)为底物,开展100 mL反应体系研究。研究结果表明:质量浓度为100 g/L的重组菌可以在6 h内将220 g/L的ECOO还原成(R)-8-氯-6-羟基辛酸乙酯((R)-ECHO),收率达96%,ee为98%。 展开更多

关键词 生物催化 共表达 表达条件优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛皮蝇幼虫抗原基因原核表达条件的优化 被引量：9

5

作者 娜仁高娃 呼和巴特尔 王文龙 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期32-36,共5页

分别对构建的3种牛皮蝇幼虫抗原(Hypodermin A,B,C)基因重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)在不同的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度等条件下的表达情况进行了研究。结果表明,重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(p... 分别对构建的3种牛皮蝇幼虫抗原(Hypodermin A,B,C)基因重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)在不同的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度等条件下的表达情况进行了研究。结果表明,重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)最佳诱导时间均为4 h,最佳诱导剂浓度均为0.05 mmol/L,最佳诱导温度分别为37、37、30℃。研究结果为进一步获得大量重组抗原用于牛皮蝇蛆病的血清学诊断和免疫防控研究提供了依据。 展开更多

关键词 牛皮蝇蛆病 牛皮蝇幼虫抗原 原核表达 表达条件优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组酪醇糖基转移酶表达条件的优化与纯化 被引量：4

6

作者 胡耀辉 朱蕾 于寒松 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第17期9002-9004,共3页

[目的]研究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为... [目的]研究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为:诱导时间5 h,IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导温度37℃;用镍柱亲和层析对该含有组氨酸标签的融合蛋白进行纯化,获得了纯度达99%以上的目的蛋白。[结论]该项研究为重组糖基转移酶的纯化提供了成功的经验。 展开更多

关键词 酪醇糖基转移酶 重组蛋白 表达条件优化 纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

犬传染性肝炎病毒Hexon基因原核表达条件的优化与表达蛋白的活性 被引量：1

7

作者 简子健 马素贞 +2 位作者 陶玉成 翟少华 赵森 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期931-936,共6页

【目的】为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性。【方法】在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及... 【目的】为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性。【方法】在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件观察对Hexon融合蛋白表达的影响,以确定最佳表达条件,并用Western-blot检测重组蛋白的生物活性。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养2.25 h后,添加终浓度为2.0 mmol/L的IPTG,27℃培养8 h,Hexon重组蛋白表达量最高(1.67 mg/mL),所表达的重组蛋白能与犬传染性肝炎阳性血清相结合。【结论】在高浓度IPTG诱导和冷培养条件下,Hexon蛋白基因的表达量最高,表达出的重组蛋白具有很好的反应原性,为进一步研究六邻体蛋白的作用机理及亚单位疫苗的研究提供了实验基础。 展开更多

关键词 原核表达 表达条件优化 重组蛋白 生物活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

杂合抗菌肽MgJ基因在毕赤酵母中表达条件的优化 被引量：2

8

作者 尹佳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期162-166,共5页

为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达... 为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达。优化杂合抗菌肽MgJ诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、初始菌体浓度表达条件。结果表明杂合抗菌肽MgJ的最佳表达条件为:28℃、250 r/min诱导培养,每24 h添加体积分数0.5%的甲醇,诱导时间120 h,MgJ表达量可达11.9 mg/L。纯化后获得的表达产物MgJ对S.aureus ATCC 29213有较好的抑菌活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为10μg/m L。 展开更多

关键词 杂合抗菌肽MgJ 毕赤酵母 表达条件优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化 被引量：1

9

作者 简子健 马素贞 +2 位作者 申卫红 翟少华 赵森 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期336-340,共5页

【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量。【方法】研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST-CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件... 【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量。【方法】研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST-CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600=1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8 h,GST-CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL。【结论】确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 N蛋白基因 融合蛋白 原核表达条件的优化 纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米黄烷酮-3-羟化酶原核表达条件对香橙素生成量的影响 被引量：1

10

作者 黄旭 王振 +4 位作者 刘娟 肖妃垚 田苗苗 郭佳婧 单杨 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期38-43,共6页

香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C;位接羟基从而生成香橙素。为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱... 香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C;位接羟基从而生成香橙素。为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱导ZmF3H蛋白表达。通过发酵实验验证ZmF3H在胞内可溶性表达并成功催化生成香橙素。为提高香橙素产量,对蛋白表达阶段的菌体密度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行优化实验。单因素试验结果表明各实验组分别在菌种密度OD;=0.8~1.0,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导温度在23℃,诱导8 h时可明显提高香橙素生成量,综合各单因素优化条件进行实验验证后发现香橙素生成量为(32.27±1.98)mg/L,与初始条件相比提高了60.39%。 展开更多

关键词 香橙素 黄烷酮-3-羟化酶 原核表达 表达条件优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

磷脂酶A1辅助蛋白N端截短菌株的构建及其优化表达 被引量：3

11

作者 朱昊 薛正莲 +2 位作者 王洲 陈阿娜 杨蒙 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期34-38,45,共6页

根据GenBank公布的磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因序列,通过生物信息学软件分析,截短辅助蛋白PlaS的N端35AA。将截短后的辅助蛋白plaS基因经PCR扩增技术与原核表达载体pET-28a(+)连接,再转化到BL21(DE3)宿主菌中进行融合表达,从而成功构建dS... 根据GenBank公布的磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因序列,通过生物信息学软件分析,截短辅助蛋白PlaS的N端35AA。将截短后的辅助蛋白plaS基因经PCR扩增技术与原核表达载体pET-28a(+)连接,再转化到BL21(DE3)宿主菌中进行融合表达,从而成功构建dSP28表达菌株。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导辅助蛋白表达,对诱导时间、IPTG浓度、起始菌体浓度(OD_(600nm))和温度逐项进行优化,摸索得到辅助蛋白的最佳诱导表达条件为诱导时间8 h,IPTG浓度0.2 mmol/L,起始体浓度(OD_(600nm))0.7,温度40℃,转速200 r/min。在此条件下,对P28、SP28和dSP28发酵中OD_(600nm)进行测定,结果表明,加入IPTG诱导后P28和dSP28能够快速的增殖,且诱导8 h后仍显示增长趋势,而SP28的生长受到明显的抑制作用。 展开更多

关键词 磷脂酶A1辅助蛋白PlaS N端截短 原核表达 表达条件优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性（英文） 被引量：1

12

作者 水燕 管政兵 +3 位作者 叶俊贤 史永红 刘国锋 徐增洪 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期526-532,共7页

为开发虾类来源的溶菌酶,本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1(简称"pc-iLys1")的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌... 为开发虾类来源的溶菌酶,本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1(简称"pc-iLys1")的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌表达,重组蛋白分子质量约为17.1 kDa。在摇瓶中对诱导表达条件进行优化,获得的相对最佳表达条件为:培养基pH 7.0,培养温度28℃,甲醇体积分数1.5%,诱导表达时间96 h。采用该优化条件,进一步利用分批补料策略在5 L发酵罐中进行高密度培养诱导,120 h后获得重组pc-iLys1,其酶活性达到2052.6 U/mL,最终,酵母干细胞质量浓度达98.1 g/L。抑菌实验表明,重组pc-iLys1对多种革兰氏阳性和阴性细菌均具有明显的抑制活性。总之,本研究实现了克氏原螯虾i-型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达,为其大规模制备打下了基础。 展开更多

关键词 i-型溶菌酶 克氏原螯虾 巴斯德毕赤酵母 表达条件优化 抑菌活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

几丁质裂解性多糖单加氧酶的表达及应用研究 被引量：1

13

作者 徐倩倩 马春桐 +3 位作者 姚莹莹 徐伟 周秀玲 张扬 《中国酿造》 CAS 北大核心 2022年第8期97-104,共8页

以具有几丁质降解能力菌株Chitiniphilus sp. LY72的裂解多糖单加氧酶(Cs LPMO)为研究对象,在克隆Cs LPMO全长基因的基础上对其进行生物信息学分析,利用3种表达质粒p ET-22b、pET-28a和pCold,构建Cs LPMO异源表达菌株EBL-22、EBL-28和EB... 以具有几丁质降解能力菌株Chitiniphilus sp. LY72的裂解多糖单加氧酶(Cs LPMO)为研究对象,在克隆Cs LPMO全长基因的基础上对其进行生物信息学分析,利用3种表达质粒p ET-22b、pET-28a和pCold,构建Cs LPMO异源表达菌株EBL-22、EBL-28和EBL-Co。重组Cs LPMO蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,筛选最佳表达质粒,对其表达条件进行优化。结果表明,Cs LPMO是一种裂解性多糖单加氧酶,隶属于AA10家族。3株重组菌中,纯化重组酶蛋白相对含量分别为5.9%、4.1%、5.4%,比酶活力分别为155.42 U/mg、80.26 U/mg、148.29 U/mg,因此,确定最佳质粒为pET-22b,菌株EBL-22表达条件为:OD600 nm值至0.4时,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.4 mmol/L后,在25℃下诱导表达16 h。在优化条件下,其可溶性蛋白含量为928.32 mg/L,比酶活力为3.34 U/m L。Cs LPMO的加入可使还原糖的产量提高1.67倍。 展开更多

关键词 几丁质 裂解性多糖单加氧酶 蛋白质表达 表达条件优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

谷氨酸棒杆菌表达大肠杆菌来源海藻糖酶 被引量：1

14

作者 满在伟 崔慧慧 +3 位作者 李锦 张迎阳 张建波 张建涛 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2022年第24期181-187,共7页

对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)表达大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源海藻糖酶进行研究。构建重组C.glutamicum菌株Cgtrl表达E.coli BL21来源海藻糖酶。菌株Cgtrl海藻糖酶最适表达条件:诱导剂异丙基-β... 对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)表达大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源海藻糖酶进行研究。构建重组C.glutamicum菌株Cgtrl表达E.coli BL21来源海藻糖酶。菌株Cgtrl海藻糖酶最适表达条件:诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)添加量为0.5 mmol/L,诱导温度为22℃,诱导时间为12 h。在最适表达条件下重组海藻糖酶酶活为9.1 U/mL。重组海藻糖酶酶学性质研究表明,未经纯化的重组海藻糖酶具有较好的底物特异性能,专一性水解海藻糖,海藻糖水解率在96%以上,低温条件下稳定性较好,能够长时间低温保存,最适作用温度为45℃,最适作用pH值为6.6。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 大肠杆菌 海藻糖酶 表达条件优化 酶学性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

耐热β-木糖苷酶的可溶性表达及其应用

15

作者 罗佳年华 董玉蓉 +2 位作者 张珊珊 张小濛 赵林果 《林业工程学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期81-87,共7页

紫杉醇作为一种具有突出药用价值的天然抗癌药物,其在红豆杉属植物中的含量极少,且已有的紫杉醇制备方法难以满足商业需求,因此酶法制备紫杉醇的研究受到越来越多的关注。通过β-木糖苷酶水解紫杉醇类似物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-X... 紫杉醇作为一种具有突出药用价值的天然抗癌药物,其在红豆杉属植物中的含量极少,且已有的紫杉醇制备方法难以满足商业需求,因此酶法制备紫杉醇的研究受到越来越多的关注。通过β-木糖苷酶水解紫杉醇类似物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-XDT)得到10-去乙酰基紫杉醇(10-DT),再进一步被乙酰基转移酶催化变成紫杉醇,此双酶催化反应为紫杉醇的制备提供了一个可靠方法。以嗜热菌Thermotoga petrophila DSM 13995来源的β-木糖苷酶Tpexyl3为研究对象,利用重组酶Tpexyl3催化7-XDT制备10-DT。为了提高重组β-木糖苷酶Tpexyl3在大肠杆菌BL21(DE3)中的可溶性表达量,对6种商业化的分子伴侣蛋白进行了筛选。结果表明:分子伴侣蛋白dnaK-dnaJ-grpE能显著提高Tpexyl3在大肠杆菌中的可溶性表达量;在以质量分数1%的麦芽糊精作为碳源的富集肉汤(TB)培养基中,不添加诱导剂,32℃下发酵48 h,重组酶Tpexyl3的表达量可达190 U/mL,较原始重组质粒在溶菌肉汤(LB)培养基中的表达量(6.81 U/mL)提高了27.9倍;在重组酶Tpexyl3加酶量250 U/mL、7-XDT质量浓度500 mg/L、pH 5.5、80℃下反应4 h,可生成162 mg/L的10-DT,物质的量转化率为45.59%。 展开更多

关键词 Β-木糖苷酶 分子伴侣 表达条件优化 7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇 生物转化

在线阅读 下载PDF 职称材料