EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)在重组大肠杆菌中的表达条件研究 被引量：8

1

作者 费冬梅 林智 +3 位作者 吕海鹏 张悦 谭俊峰 郭丽 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期333-340,共8页

本研究以EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)催化EGCG生成EGCG3"Me的产量为主要指标,探讨了重组大肠杆菌内EGCG-O-甲基转移酶的诱导表达条件。结果表明,当诱导剂IPTG终浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为20 h,培养基初始pH为7.0,以及诱导温度为20... 本研究以EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)催化EGCG生成EGCG3"Me的产量为主要指标,探讨了重组大肠杆菌内EGCG-O-甲基转移酶的诱导表达条件。结果表明,当诱导剂IPTG终浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为20 h,培养基初始pH为7.0,以及诱导温度为20℃时,EOMT的表达效果最佳。 展开更多

关键词 EGCG-O-甲基转移酶 重组大肠杆菌 表达条件

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杂色云芝漆酶基因在甲醇毕赤酵母中表达条件研究 被引量：6

2

作者 郭梅 路福平 +2 位作者 蒲军 白东清 杜连祥 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2006年第4期82-84,共3页

重组甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)工程菌PMAD16/pMETA-Lcc1能分泌表达杂色云芝重组漆酶。本文通过对其发酵条件的研究,找出瓶发酵表达漆酶的最适培养条件:在BMMY培养基中添加0.2mmol/L的Cu2+,装液量为25mL/250mL三角瓶,接种量体积... 重组甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)工程菌PMAD16/pMETA-Lcc1能分泌表达杂色云芝重组漆酶。本文通过对其发酵条件的研究,找出瓶发酵表达漆酶的最适培养条件:在BMMY培养基中添加0.2mmol/L的Cu2+,装液量为25mL/250mL三角瓶,接种量体积之比为45:25,0.5%甲醇诱导,20℃条件下瓶培养5d,漆酶最高酶活力达1192U/L。 展开更多

关键词 漆酶 重组甲醇毕赤酵母 表达条件

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牛皮蝇幼虫抗原基因原核表达条件的优化 被引量：9

3

作者 娜仁高娃 呼和巴特尔 王文龙 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期32-36,共5页

分别对构建的3种牛皮蝇幼虫抗原(Hypodermin A,B,C)基因重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)在不同的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度等条件下的表达情况进行了研究。结果表明,重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(p... 分别对构建的3种牛皮蝇幼虫抗原(Hypodermin A,B,C)基因重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)在不同的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度等条件下的表达情况进行了研究。结果表明,重组表达菌BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)最佳诱导时间均为4 h,最佳诱导剂浓度均为0.05 mmol/L,最佳诱导温度分别为37、37、30℃。研究结果为进一步获得大量重组抗原用于牛皮蝇蛆病的血清学诊断和免疫防控研究提供了依据。 展开更多

关键词 牛皮蝇蛆病 牛皮蝇幼虫抗原 原核表达 表达条件优化

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赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因原核表达条件优化 被引量：4

4

作者 苏友禄 冯娟 +3 位作者 孙秀秀 郭志勋 闫云锋 黄剑南 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第6期2422-2424,2429,共4页

[目的]优化赤点石斑鱼神经坏死病毒的主衣壳蛋白(MCP)基因的原核表达条件。[方法]采用RT-PCR技术扩增出赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因,构建重组表达载体pRSETA-MCP,以其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在不同培养基、温度、pH值条件下进... [目的]优化赤点石斑鱼神经坏死病毒的主衣壳蛋白(MCP)基因的原核表达条件。[方法]采用RT-PCR技术扩增出赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因,构建重组表达载体pRSETA-MCP,以其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在不同培养基、温度、pH值条件下进行诱导表达。[结果]重组菌在SOB和LB培养基、pH值7.0、37℃条件下表达量最高,所得的融合蛋白分子量约为44.5 kD。[结论]该研究为RGNNV-MCP疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 赤点石斑鱼 神经坏死病毒 主衣壳蛋白 表达条件

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重组酪醇糖基转移酶表达条件的优化与纯化 被引量：4

5

作者 胡耀辉 朱蕾 于寒松 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第17期9002-9004,共3页

[目的]研究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为... [目的]研究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为:诱导时间5 h,IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导温度37℃;用镍柱亲和层析对该含有组氨酸标签的融合蛋白进行纯化,获得了纯度达99%以上的目的蛋白。[结论]该项研究为重组糖基转移酶的纯化提供了成功的经验。 展开更多

关键词 酪醇糖基转移酶 重组蛋白 表达条件优化 纯化

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鲑精蛋白基因工程菌高效表达条件的优化 被引量：4

6

作者 鲁健章 王春晓 +1 位作者 刘承初 邓强 《中国食物与营养》 2007年第12期28-31,共4页

为了提高鲑精蛋白基因工程菌融合蛋白的表达量,本文对工程菌的发酵培养基组分、培养基初始pH值、发酵种子接种量、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时机、诱导时间等因子进行了筛选。试验结果表明,培养基组分、诱导温度、诱导时机和诱导时间... 为了提高鲑精蛋白基因工程菌融合蛋白的表达量,本文对工程菌的发酵培养基组分、培养基初始pH值、发酵种子接种量、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时机、诱导时间等因子进行了筛选。试验结果表明,培养基组分、诱导温度、诱导时机和诱导时间是影响融合蛋白表达量的主要因素。经筛选,最佳发酵条件是以PYJ-2为发酵培养基,37℃下培养3～5h后,以5mmol/L的乳糖诱导工程菌6～8h表达融合蛋白,融合蛋白表达量从18.90%提高到40.10%。 展开更多

关键词 鲑精蛋白 基因工程菌 表达条件 融合蛋白 表达量

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犬传染性肝炎病毒Hexon基因原核表达条件的优化与表达蛋白的活性 被引量：1

7

作者 简子健 马素贞 +2 位作者 陶玉成 翟少华 赵森 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期931-936,共6页

【目的】为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性。【方法】在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及... 【目的】为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性。【方法】在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件观察对Hexon融合蛋白表达的影响,以确定最佳表达条件,并用Western-blot检测重组蛋白的生物活性。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养2.25 h后,添加终浓度为2.0 mmol/L的IPTG,27℃培养8 h,Hexon重组蛋白表达量最高(1.67 mg/mL),所表达的重组蛋白能与犬传染性肝炎阳性血清相结合。【结论】在高浓度IPTG诱导和冷培养条件下,Hexon蛋白基因的表达量最高,表达出的重组蛋白具有很好的反应原性,为进一步研究六邻体蛋白的作用机理及亚单位疫苗的研究提供了实验基础。 展开更多

关键词 原核表达 表达条件优化 重组蛋白 生物活性

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犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化 被引量：1

8

作者 简子健 马素贞 +2 位作者 申卫红 翟少华 赵森 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期336-340,共5页

【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量。【方法】研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST-CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件... 【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量。【方法】研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST-CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600=1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8 h,GST-CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL。【结论】确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 N蛋白基因 融合蛋白 原核表达条件的优化 纯化

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合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化 被引量：1

9

作者 毕晓敏 黄桂菊 +2 位作者 范嗣刚 朱文杰 喻达辉 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期100-106,共7页

为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主... 为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白p ET32a-Pearlin约为34.19 k D。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化。结果显示,IPTG浓度在0.6~1.4 mmol·L^(-1)范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmol·L^(-1)、相同培养时间(6 h)下,37℃表达蛋白最多;重组蛋白在p H分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4~6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3~4 h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白p ET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融合蛋白都主要以包涵体形式存在。 展开更多

关键词 合浦珠母贝 Pearlin 原核表达 表达条件优化 包涵体

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抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究 被引量：1

10

作者 刘细霞 王弘 +4 位作者 杨金易 张宏斌 雷红涛 沈玉栋 孙远明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期161-165,共5页

初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导... 初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8～0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 克伦特罗 单链抗体 碱性磷酸酶 融合蛋白 表达条件

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大肠杆菌F1菌毛表达条件的初探 被引量：2

11

作者 陈雷 成大荣 +2 位作者 徐建生 李俊宝 董国雄 《中国兽药杂志》 北大核心 2000年第5期8-11,共4页

F1菌毛在体外表达受到许多因素的影响。为了对 F1菌毛的进一步研究 ,本试验以只产F1菌毛的菌株 C60 0为对象 ,从培养基、温度、p H、通氧等条件进行了摸索 ,实验结果表明 :培养条件的限制极为显著 ,在 MD- 1肉汤 ( p H6.8～ 7.2 )中、3... F1菌毛在体外表达受到许多因素的影响。为了对 F1菌毛的进一步研究 ,本试验以只产F1菌毛的菌株 C60 0为对象 ,从培养基、温度、p H、通氧等条件进行了摸索 ,实验结果表明 :培养条件的限制极为显著 ,在 MD- 1肉汤 ( p H6.8～ 7.2 )中、37℃、静止培养 48h可使 F1菌毛获得较好表达 ;通入氧气将有利于 展开更多

关键词 F1菌毛 表达条件 禽大肠杆菌 致病菌 体外表达

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黄粉甲抗冻蛋白AFP84a原核表达条件的优化和纯化 被引量：1

12

作者 闫清华 康静 +1 位作者 杨理 邵强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期45-48,共4页

为纯化黄粉甲抗冻蛋白AFP84a,对已构建的重组大肠埃希菌TBI诱导表达,对诱导温度、初始菌浓度I、PTG浓度及诱导时间等表达条件进行优化后,纯化该重组蛋白。通过分析比较,建立了目的蛋白表达的最优条件:温度25℃,初始菌OD600=0.6;IPTG终浓... 为纯化黄粉甲抗冻蛋白AFP84a,对已构建的重组大肠埃希菌TBI诱导表达,对诱导温度、初始菌浓度I、PTG浓度及诱导时间等表达条件进行优化后,纯化该重组蛋白。通过分析比较,建立了目的蛋白表达的最优条件:温度25℃,初始菌OD600=0.6;IPTG终浓度0.5 mmol/L,时间8 h。SDS-PAGE及Bandscan4.3软件分析表明,融合蛋白含量超过总可溶蛋白的40%。融合蛋白经Amylose柱亲和纯化,Factor Xa酶切,电泳显示获得的目的蛋白呈单一条带。本研究结果为进一步对抗冻蛋白的性质和应用研究提供了有用的实验材料。 展开更多

关键词 抗冻蛋白 表达条件 优化 亲和纯化

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人孕酮受体激素结合区片段在大肠杆菌中的表达条件 被引量：3

13

作者 王鲜忠 李跃民 张家骅 《动物医学进展》 CSCD 2000年第2期60-62,65,共4页

本试验研究了人孕酮受体激素结合区片段在大肠杆菌中的表达条件 ,结果发现 ,随着诱导时间的延长 ,表达量增加 ,4h时 ,表达量最大 ,诱导时间进一步延长 ,表达量并未增加 ;当诱导剂浓度增加时 ,表达量增加 ,浓度为 1mmol/ L时 ,表达量最... 本试验研究了人孕酮受体激素结合区片段在大肠杆菌中的表达条件 ,结果发现 ,随着诱导时间的延长 ,表达量增加 ,4h时 ,表达量最大 ,诱导时间进一步延长 ,表达量并未增加 ;当诱导剂浓度增加时 ,表达量增加 ,浓度为 1mmol/ L时 ,表达量最大 ,浓度进一步增加 ,表达量无明显变化 ;培养液中青霉素浓度在 10 0～ 180 μg/ m L 时表达量最大 ,进一步增加青霉素浓度 ,表达量开始下降。当浓度为 30 0μg/ m L时 ,仅见一条非常模糊的带。用 Western印迹检测时发现 ,在与 45k Da平行的位置 ,最适反应条件下的产物与不加 IPTG时相比 。 展开更多

关键词 人孕酮受体 大肠杆菌 LBD片段 乳腺癌 表达条件

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猪IL-18在毕赤酵母中分泌表达条件的优化 被引量：1

14

作者 宋世斌 陈国华 +3 位作者 王颖 王笑笑 宗瑞谦 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期38-42,共5页

采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了... 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IL-18的发酵工艺.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为72 h,甲醇最适浓度为20 g/L,最适pH范围为6.0-8.0,最适接种量1∶1.与单纯甲醇诱导相比,甘油/甲醇诱导后的表达量明显提高. 展开更多

关键词 猪IL-18 毕赤酵母 摇瓶发酵 表达条件

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植物甜蛋白monellin基因工程菌表达条件的研究 被引量：1

15

作者 蔡恒 陈忠军 万红贵 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期23-26,共4页

将带有monellin基因的重组分泌型表达载体pETMO转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组工程菌株BMC33。经IPTG诱导,其所含有的甜蛋白基因可高效表达。研究不同的表达条件对甜蛋白表达水平的影响,得到优化发酵条件:装液量为50 mL/250 mL三角瓶,... 将带有monellin基因的重组分泌型表达载体pETMO转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组工程菌株BMC33。经IPTG诱导,其所含有的甜蛋白基因可高效表达。研究不同的表达条件对甜蛋白表达水平的影响,得到优化发酵条件:装液量为50 mL/250 mL三角瓶,当培养液OD值达0.8时,添加诱导剂IPTG至终浓为0.9mmol/L,32℃诱导5 h。此时,甜蛋白monellin表达量可高达细菌可溶性蛋白的44.8%。 展开更多

关键词 大肠杆菌 甜蛋白MONELLIN 重组菌株 表达条件

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抗真菌活性肽段CGA-N46的免疫学鉴定及其高效表达条件研究 被引量：1

16

作者 李瑞芳 薛雯雯 赵玉峰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12622-12623,12626,共3页

[目的]嗜铬粒蛋白Chromogranin AN端31-76位氨基酸组成的多肽CGA-N46具有较强的抗真菌活性,对其表达条件进行研究具有重要意义。[方法]将CGA-N46基因重组大肠杆菌BL21(DE3,pET-N46)接种于含有氨苄青霉素的2×YT培养基中,于37℃、230... [目的]嗜铬粒蛋白Chromogranin AN端31-76位氨基酸组成的多肽CGA-N46具有较强的抗真菌活性,对其表达条件进行研究具有重要意义。[方法]将CGA-N46基因重组大肠杆菌BL21(DE3,pET-N46)接种于含有氨苄青霉素的2×YT培养基中,于37℃、230r/min振荡培养3 h后加入诱导剂IPTG至终浓度1 mmol/L,25℃条件下诱导6 h,离心收集菌体进行SDS-PAGE蛋白电泳。利用抗6-His的单克隆抗体进行免疫印迹,结果有免疫印迹条带,但表达量不高。鉴于此,对CGA-N46基因的表达条件进行了优化。[结果]在37℃下培养3 h后加入IPTG25℃诱导9 h,目的蛋白表达量较高,当诱导剂IPTG的浓度超过0.4 mmol/L时,其浓度的改变对目的蛋白的表达没有多大影响。 展开更多

关键词 嗜鉻粒蛋白A CGA-N46 免疫印迹 表达条件

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杂合抗菌肽MgJ基因在毕赤酵母中表达条件的优化 被引量：2

17

作者 尹佳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期162-166,共5页

为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达... 为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达。优化杂合抗菌肽MgJ诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、初始菌体浓度表达条件。结果表明杂合抗菌肽MgJ的最佳表达条件为:28℃、250 r/min诱导培养,每24 h添加体积分数0.5%的甲醇,诱导时间120 h,MgJ表达量可达11.9 mg/L。纯化后获得的表达产物MgJ对S.aureus ATCC 29213有较好的抑菌活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为10μg/m L。 展开更多

关键词 杂合抗菌肽MgJ 毕赤酵母 表达条件优化

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纳豆激酶基因在毕赤酵母中的表达条件研究

18

作者 黄志立 罗立新 +1 位作者 杨汝德 梁世中 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期20-22,共3页

通过设计正交试验,对重组Pichiapastrois酵母利用YEPD培养基表达纳豆激酶基因的发酵条件进行了研究,确定最适条件:pH值6·0,培养温度30℃,培养时间36h,诱导时间84h,甲醇添加量1·0%,其中培养温度为主要影响因素。在该条件下进... 通过设计正交试验,对重组Pichiapastrois酵母利用YEPD培养基表达纳豆激酶基因的发酵条件进行了研究,确定最适条件:pH值6·0,培养温度30℃,培养时间36h,诱导时间84h,甲醇添加量1·0%,其中培养温度为主要影响因素。在该条件下进行重组子的培养及诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明外源蛋白的表达量占菌体蛋白的10%。 展开更多

关键词 纳豆激酶基因 表达条件 毕赤酵母 SDS-PAGE电泳 PICHIA 培养温度 正交试验 发酵条件 最适条件 培养时间 诱导时间 诱导表达 菌体蛋白 外源蛋白 培养基 pH值 添加量 重组子 表达量

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PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定 被引量：4

19

作者 张煜彬 叶路芬 +6 位作者 吴忠秀 薛维娜 何彬 杨畅 李勇军 王永林 刘亭 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期42-49,共8页

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化 亲和层析 蛋白质印迹法

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单核细胞增多性李斯特菌p60蛋白表达条件的优化 被引量：3

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作者 吕添 曹正茂 +1 位作者 武海涛 王小红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期160-163,共4页

在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-... 在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),在摇床温度为25℃,转速为150r/min条件下诱导表达6h,可得到重组表达的p60蛋白占总蛋白的比例为42.32%,其中可溶性蛋白占总p60蛋白的比例为85.36%左右,为p60蛋白诱导表达的最优条件。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 p60蛋白 表达条件 优化

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