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自然流产母胎界面嗜酸粒细胞趋化因子、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S及其受体的表达 被引量:1
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作者 肖世金 董倩 赵爱民 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1170-1174,共5页
目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方... 目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方法检测蜕膜和绒毛组织Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5的表达,并进行线性相关分析。结果 NP组蜕膜、绒毛组织Eotaxin的表达阳性率分别为75%和80%,显著高于AP组的35%和30%(P=0.011,P=0.001);NP组阳性表达强度亦显著高于AP组(P=0.003,P=0.002)。NP组蜕膜、绒毛组织RANTES的表达阳性率分别为40%和45%,显著低于AP组的80%和85%(P=0.01,P=0.008),NP组阳性表达强度亦显著低于AP组(P=0.002,P=0.002)。两组蜕膜、绒毛组织CCR5的表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但AP组阳性表达强度显著高于NP组(P=0.018,P=0.029)。两组CCR3的表达阳性率及阳性表达强度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在NP组中,蜕膜、绒毛RANTES的表达与CCR5的表达均呈正相关(r=0.679,P=0.001;r=0.478,P=0.033);在AP组中,蜕膜、绒毛RANTES的表达与CCR5的表达均为正相关(r=0.610,P=0.004;r=0.620,P=0.004);两组蜕膜、绒毛Eotaxin和CCR3的表达均不存在相关性(P>0.05)。结论趋化因子及其受体Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5在妊娠免疫耐受形成和自然流产的发病机制中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 趋化因子 嗜酸性粒细胞趋化因子 CCR3 T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S CCR5 自然流产
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枯草芽胞杆菌蛋白质表达分泌系统发展及展望 被引量:7
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作者 张大伟 康倩 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期1-10,共10页
枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运... 枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运和菌株改造等方面对表达分泌系统进行优化改良,针对不同的目标蛋白,可进行不同优化模块的组装和拼搭,以达到针对目标蛋白产物定制化地提高产量和分泌量的目的。在未来,随着基因编辑和合成生物技术的发展,菌株改良策略的不断优化,枯草芽胞杆菌将会在工业生产蛋白质制品领域发挥更大的应用价值。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 蛋白质表达分泌 微生物应用 表达分泌系统调控 菌株改造策略
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共染ANP对GH_4和AtT_(20)细胞肾素基因表达分泌的影响
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作者 苏永新 付爱芬 +1 位作者 张梅 王莉 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1994年第4期304-307,共4页
本文应用现代基因共同转染技术,首次对GH4和AtT20细胞进行了重组大鼠ANP和人肾素基因的共同转染,建立了表达细胞模型。并对其表达产物进行分析研究。文章着重分析研究了ANP对肾素基因的表达产物的形成与分泌的调节作用... 本文应用现代基因共同转染技术,首次对GH4和AtT20细胞进行了重组大鼠ANP和人肾素基因的共同转染,建立了表达细胞模型。并对其表达产物进行分析研究。文章着重分析研究了ANP对肾素基因的表达产物的形成与分泌的调节作用。AI形成放免检测结果表明:转染细胞的表达是有效的。转染的GH4能有效地表达分泌肾素原;转染的AtT20细胞则不仅能形成肾素原,而且能分泌具有活性的肾素。ANP转染的实验组不仅显示有明显的拮抗Forskolin的刺激作用,而且ANP对肾素与肾素原的形成分泌有抑制作用,其中抑制肾素分泌的效能大于肾素原的分泌。实验证明,转染基因的表达细胞是有效研究肾素基因表达、分泌等调节的细胞模型。 展开更多
关键词 肾素 ANP 基因转染细胞 表达分泌调节 病理生理
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碳及氮源在提高重组酵母表达分泌水平中的作用 被引量:1
4
作者 刘颖 张小里 +2 位作者 熊朝晖 赵彬侠 夏诏杰 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期127-130,共4页
通过摇瓶批式发酵方法和 2 L发酵罐补料分批发酵方法研究了碳及氮源在提高重组酵母 S.cerevisiae2 0 B- 1 2 ( p NA3)表达分泌水平中的作用 ,得出采用分段发酵方法 ,在诱导期补充替代碳源(乳糖或甘油 )并以营养丰富的天然氮源 (酵母膏 ... 通过摇瓶批式发酵方法和 2 L发酵罐补料分批发酵方法研究了碳及氮源在提高重组酵母 S.cerevisiae2 0 B- 1 2 ( p NA3)表达分泌水平中的作用 ,得出采用分段发酵方法 ,在诱导期补充替代碳源(乳糖或甘油 )并以营养丰富的天然氮源 (酵母膏 )诱导产物分泌可使重组酵母表达、分泌水平有较大提高。在补料分批培养中通过生长阶段加速补充碳源 ,产酶阶段补充替代碳源和分次补加酵母膏的方法使重组酵母表达、分泌水平进一步提高 ,从而为流加培养和工业化放大提供了依据。 展开更多
关键词 基因重组酵母 表达分泌水平 分段培养 补料分批发酵 碳源 氮源 基因工程 酿酒酵母
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N端9个谷氨酸或7个天冬氨酸显著增强普鲁兰酶在大肠杆菌中表达分泌
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作者 栗亚美 安展飞 +2 位作者 陈阿娜 杨艳坤 白仲虎 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期11-17,共7页
各种标签被广泛应用于大肠杆菌分泌表达异源蛋白,其中最简单有效地便是氨基酸标签,尤其是带电荷氨基酸标签。为了研究N端添加不同种类和数目的带电荷氨基酸标签对普鲁兰酶(pullulanase,Ba Pul13A)在大肠杆菌中表达分泌水平的影响,构建... 各种标签被广泛应用于大肠杆菌分泌表达异源蛋白,其中最简单有效地便是氨基酸标签,尤其是带电荷氨基酸标签。为了研究N端添加不同种类和数目的带电荷氨基酸标签对普鲁兰酶(pullulanase,Ba Pul13A)在大肠杆菌中表达分泌水平的影响,构建了25株Ba Pul13A变体。实验结果表明:N端添加9个连续的谷氨酸标签,降低了mRNA的转录水平,增加了N端mRNA的稳定性,使得普鲁兰酶总酶活达到179.60 U/m L,比不添加氨基酸标签的对照菌高278.28%。N端添加7个连续的天冬氨酸标签,增强了大肠杆菌细胞内膜通透性,大量的普鲁兰酶,48.18U/m L,分泌到培养基中。通过蛋白质结构预测软件I-TASSER分析得知,N端添加不同带电荷氨基酸标签引起CBM41结构域发生变化,猜测该变化是导致Ba Pul13A变体表达分泌水平差异的主要原因。 展开更多
关键词 带电荷氨基酸标签 表达分泌 mRNA 膜通透性 蛋白结构预测
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热打击诱导血管内皮细胞组织因子早期表达分泌的初步研究
6
作者 钱晶 王凡凡 +4 位作者 万露露 杨加乐 施学智 童华生 周伟梁 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1412-1419,共8页
目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE... 目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE染色观察小鼠肝脏、肺脏及肾脏组织病理学变化;RT-qPCR检测小鼠组织TFmRNA表达水平;ELISA法检测小鼠血浆TF浓度。体外建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)热打击模型,分为对照组与热打击后复温0、3、6、9 h组。采用RT-qPCR、Western blotting及细胞免疫荧光化学技术分别检测HUVECs中TF mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测HUVECs培养上清中TF水平。结果对照组小鼠各组织未见明显病理损伤,热打击复温小鼠存在不同程度组织细胞结构性损伤及出血性、炎症性损伤。与对照组小鼠比较,热打击复温0、3 h组肾脏(1.719±0.018、1.241±0.178 vs.1.000±0.063)、复温3 h组肺脏(2.444±0.511 vs.1.000±0.106)及复温6 h组肝脏(7.312±0.618 vs.1.000±0.147)中TF mRNA表达量均明显升高(P<0.05)。热打击小鼠复温0、3、6、9h组血浆TF水平均较对照组小鼠升高[(132.426±17.920)pg/ml、(119.400±10.267)pg/ml、(107.374±13.495)pg/ml、(163.767±22.810)pg/ml vs.(75.479±13.831)pg/ml,P<0.01]。与对照组比较,热打击后复温6、9h组HUVECs的TFmRNA表达水平明显升高(1.905±0.354、2.564±0.297vs.1.000±0.097,P<0.01);热打击复温0、3、6、9 h组HUVECs培养上清TF水平均明显高于对照组[(36.309±4.101)pg/ml、(38.425±5.484)pg/ml、(41.655±4.380)pg/ml、(43.586±4.718)pg/ml vs.(14.996±0.254)pg/ml,P<0.01]。结论热打击血管内皮细胞中TF的早期表达分泌增加,可能是重症中暑循环TF的主要来源之一。 展开更多
关键词 热打击 血管内皮细胞 组织因子 表达分泌
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表达牛乳铁蛋白肽的罗伊氏乳杆菌分泌型信号肽的筛选及鉴定
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作者 赵文悦 杨景 +5 位作者 邵怡岚 李佳璇 姜艳平 崔文 王晓娜 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1431-1440,共10页
本研究旨在构建一株高效表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌,通过筛选不同信号肽的方式提高牛乳铁蛋白肽的分泌表达水平,提高重组菌株的应用效率。对实验室分离的一株罗伊氏乳杆菌进行全基因组测序,筛选分泌蛋白的信号肽基因,构建表达... 本研究旨在构建一株高效表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌,通过筛选不同信号肽的方式提高牛乳铁蛋白肽的分泌表达水平,提高重组菌株的应用效率。对实验室分离的一株罗伊氏乳杆菌进行全基因组测序,筛选分泌蛋白的信号肽基因,构建表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组菌株,通过Western blot、ELISA、激光共聚焦等技术分析和比较信号肽分泌LFCA的效果,对重组菌分泌的LFCA对金黄色葡萄球菌增殖抑制作用及其半数最低抑菌浓度进行检测。结果显示,A2、A3、A4和A8信号肽能够表达LFCA,其中A3和A8能够使LFCA分泌到培养上清中,且A3信号肽使LFCA的分泌表达水平提高了近2倍,对宿主菌株的生长性能无显著影响,重组菌株分泌的LFCA对金黄色葡萄球菌的半数最低抑菌浓度为97.50μg·mL^(-1)。本研究成功筛选出能够高效分泌牛乳铁蛋白肽的信号肽,重组菌株的抑菌效率得到显著提高。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白肽 罗伊氏乳杆菌 重组蛋白分泌表达信号肽 抑菌活性
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共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化 被引量:1
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作者 曾静 郭建军 +1 位作者 王通 袁林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第10期149-157,共9页
本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PU... 本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明,共表达分子伴侣蛋白PrsA^(Ba)的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL,提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_(2)·6H_(2)O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO4·7H_(2)O、0.01 g/L MnSO4·4H_(2)O、0.001 g/L ZnSO4·7H_(2)O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下,该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时,其胞外酶活达到192.68 U/mL,提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达,为TK-PUL的应用提供了基础。 展开更多
关键词 III型普鲁兰水解酶 短小芽孢杆菌 胞外分子伴侣蛋白 发酵优化 分泌表达
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分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2重组枯草芽孢杆菌的构建与抗体检测
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作者 邓瑞鹏 龚海燕 +2 位作者 兰卓 陈兆国 王春仁 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第6期72-78,133,共8页
鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的... 鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的主要病原,因此,研究旨在通过芽孢杆菌表达系统,构建能够分泌表达柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2(Eimeria tenella isolate microneme protein 2,EtMIC2)重组枯草芽孢杆菌菌株,为研发新型鸡球虫疫苗奠定基础。首先,采用PCR及质谱分析方法鉴定食用性及饲用性菌株,然后从柔嫩艾美耳球虫基因组中扩增EtMIC2基因,通过无缝克隆技术将其克隆至pBE2-R质粒中,构建重组质粒pBE2-R-EtMIC2,并采用冰浴转化将重组质粒分别整合至两株枯草芽孢杆菌中,最后采用PCR、SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。将重组菌株饲喂雏鸡,免疫7 d后初步检测抗体效价。结果表明:EtMIC2基因克隆成功,且成功整合于饲用性枯草芽孢杆菌基因组,目的蛋白正确表达,并分泌至胞外,将重组菌株饲喂给雏鸡后,血液中检测出EtMIC2抗体。研究成功构建了分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌,且重组菌株能刺激动物产生抗体,可用于后续的抗球虫免疫保护性试验。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 枯草芽孢杆菌 EtMIC2 分泌表达 抗体检测
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一种酿酒酵母组成型分泌表达载体的构建及应用
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作者 王国平 欧阳蓓 +2 位作者 胡紫艳 刘启铃 赵喜华 《江西师范大学学报(自然科学版)》 北大核心 2024年第5期509-513,共5页
该文利用重叠延伸PCR和无缝分子克隆技术构建酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21,该载体由酿酒酵母组成型分泌表达组件(翻译延伸因子1组成型启动子、α因子N-末端分泌信号肽DNA序列和乙醇脱氢酶2终止子所组成)、2μ复制子、大肠杆菌复制... 该文利用重叠延伸PCR和无缝分子克隆技术构建酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21,该载体由酿酒酵母组成型分泌表达组件(翻译延伸因子1组成型启动子、α因子N-末端分泌信号肽DNA序列和乙醇脱氢酶2终止子所组成)、2μ复制子、大肠杆菌复制元件以及URA3筛选标记所组成.将草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶与pYAT21连接并转化到酿酒酵母中,其发酵上清液粗酶活达到106.8 U·mL^(-1).酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21可应用于异源蛋白的组成型分泌表达. 展开更多
关键词 酿酒酵母 组成型分泌表达载体 异源蛋白
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异源果聚糖蔗糖酶在乳酸乳球菌中的分泌表达
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作者 包书健 李兴江 +1 位作者 吴学凤 穆冬冬 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第4期527-532,共6页
为了实现果聚糖蔗糖酶简便有效的纯化,文章将来源于解淀粉芽孢杆菌的基因sacB添加组氨酸标签后与信号肽基因usp45融合形成基因片段usp45-sacB,然后插入质粒pNZ8048中,导入乳酸乳球菌(L.lactis)NZ9000构建重组菌株L.lactis(pNZ8048-usp45... 为了实现果聚糖蔗糖酶简便有效的纯化,文章将来源于解淀粉芽孢杆菌的基因sacB添加组氨酸标签后与信号肽基因usp45融合形成基因片段usp45-sacB,然后插入质粒pNZ8048中,导入乳酸乳球菌(L.lactis)NZ9000构建重组菌株L.lactis(pNZ8048-usp45-sacB)。通过电泳验证纯化蛋白的分子量为51 kDa,符合预期大小,确定果聚糖蔗糖酶成功表达。为了进一步提高果聚糖蔗糖酶的产量,该研究对诱导时间和诱导剂的质量浓度进行优化,得出最优的表达条件为:诱导时间48 h,诱导剂nisin质量浓度2μg/L。 展开更多
关键词 sacB基因 果聚糖蔗糖酶 质粒 分泌表达 乳酸乳球菌
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阿魏酸酯酶和木聚糖酶在大肠杆菌中共表达高效制备阿魏酸
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作者 兰佳鑫 李诚昊 +1 位作者 姬淑洁 李晓敏 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期33-42,共10页
【目的】实现阿魏酸酯酶(feruloyl esterases,Fae)和木聚糖酶(xylanase,Xyn)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中的高效分泌表达。【方法】从7种信号肽中筛选出适于中国荷斯坦奶牛瘤胃宏基因组来源的Fae和骆驼瘤胃宏基因组来源的β-1... 【目的】实现阿魏酸酯酶(feruloyl esterases,Fae)和木聚糖酶(xylanase,Xyn)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中的高效分泌表达。【方法】从7种信号肽中筛选出适于中国荷斯坦奶牛瘤胃宏基因组来源的Fae和骆驼瘤胃宏基因组来源的β-1,4-内切木聚糖酶在大肠杆菌中分泌表达的信号肽,并构建相应的大肠杆菌工程菌,通过对发酵条件的优化实现2种酶的高效分泌表达。进一步以脱淀粉麦麸(de-starched wheat bran,DSWB)为底物发酵制备阿魏酸,确定了最佳发酵工程菌及最佳发酵条件。【结果】摇瓶发酵48 h,阿魏酸产量和释放率分别达314.1 mg/L和90.0%。【结论】以共表达Fae与Xyn的大肠杆菌工程菌发酵制备阿魏酸,为提高阿魏酸的快速高效生产提供了依据。 展开更多
关键词 阿魏酸酯酶 木聚糖酶 分泌表达 信号肽 阿魏酸
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猪IFNα基因在毕赤酵母中的高效分泌表达 被引量:12
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作者 黄海 谢蓓 +4 位作者 于瑞嵩 刘惠莉 张德福 曹祥荣 李震 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期215-220,共6页
巴斯德毕赤酵母载体质粒 pPICZαA含有强启动子 PAOXⅠ和α MF信号肽序列,构建猪 IFNα基因的重组质粒pPICZαA IFNα,并转入E .coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪 IFNα基因。通... 巴斯德毕赤酵母载体质粒 pPICZαA含有强启动子 PAOXⅠ和α MF信号肽序列,构建猪 IFNα基因的重组质粒pPICZαA IFNα,并转入E .coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪 IFNα基因。通过电击将经 SacⅠ酶切后线性化的 pPICZαA IFNα质粒转化到巴斯德毕赤酵母 KM71中。SDS PAGE和Western blot鉴定表达产物的结果表明,分泌于胞外的猪 IFNα蛋白分子量比猪IFNα理论值分子量稍大,估计是糖基化的原因。表达的蛋白可发生正确的抗原 抗体反应,表达量为 0.45 mg/mL。将蛋白表达上清经细胞毒性实验检测表达产物的抗病毒活性为2.1×104 IU/mL。 展开更多
关键词 IFNΑ 巴斯德毕赤酵母 基因重组 分泌表达
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白芍总苷对骨关节炎软骨细胞增殖及分泌表达的影响 被引量:31
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作者 杜旭召 杨豪 +2 位作者 邓素玲 史栋梁 孟庆良 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1375-1379,1385,共6页
目的研究白芍总苷(TGP)对人骨关节炎软骨细胞(HOCs)增殖、凋亡、分泌表达的影响及其作用机制,为白芍总苷在骨关节炎治疗方面提供初步的实验依据。方法组织块法培养原代人骨关节炎软骨细胞;TGP处理人骨关节炎软骨细胞并培养12、24和48 h... 目的研究白芍总苷(TGP)对人骨关节炎软骨细胞(HOCs)增殖、凋亡、分泌表达的影响及其作用机制,为白芍总苷在骨关节炎治疗方面提供初步的实验依据。方法组织块法培养原代人骨关节炎软骨细胞;TGP处理人骨关节炎软骨细胞并培养12、24和48 h;采用CCK-8检测细胞存活率;ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)以及Caspase-3表达水平;Western blotting检测Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和核转录因子κB(NF-κB)的蛋白表达水平。结果 TGP能促进细胞增殖,并存在时间和浓度依赖性,其中8μmol/L TGP作用24 h时细胞存活率最高,存在显著性差异(P<0.05);TGP可以显著抑制凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3表达,并促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.05);TGP可以显著降低与软骨退化相关的MMP-13/TIMP-1比值(P<0.05);TGP可以抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8表达(P<0.05);TGP可以抑制NF-κB的表达(P<0.05)。结论 TGP促进人骨关节炎软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡、降低MMP-13/TIMP-1比值以及炎症因子的分泌,其机制可能是与抑制NF-κB的表达相关。 展开更多
关键词 中医中药 白芍总苷 人骨关节炎软骨细胞 增殖 分泌表达
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猪α干扰素基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达 被引量:8
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作者 刘健 陈瑞爱 +3 位作者 刘珊珊 朱杰仪 唐明森 罗满林 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期93-97,共5页
根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转... 根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经Zeoc inTM抗性筛选后获得大量多拷贝重组子,SDS-PAGE和W estern-b lot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出相对分子质量约为19 000的PoIFN-α特异蛋白,其有效蛋白表达量较高达54.105 mg/L.经Vero-VSV系统测定,PoIFN-α效价达到5.87×107U/L.试验将PoIFN-α成熟肽全基因密码子进行改造,并实现了其在毕赤酵母菌表达系统中的高效分泌表达. 展开更多
关键词 Α干扰素 密码子改造 毕赤酵母 分泌表达
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hITF毕赤酵母表达载体的构建及分泌表达 被引量:12
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作者 孙勇 彭曦 +2 位作者 张勇 吕尚军 汪仕良 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期527-530,共4页
目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转... 目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tric ine SDS-PAGE分析及W estern b lot检测。结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中。Tric ine SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为10×103,W estern b lot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论成功构建出酵母表达载体pGAPZαA-hITF,获得重组hITF,为深入研究hITF奠定了基础。 展开更多
关键词 人肠三叶因子 毕赤巴斯德酵母 分泌表达
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犬α_1干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究 被引量:10
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作者 曹瑞兵 王艳 +1 位作者 魏建超 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期107-112,共6页
亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A,构建转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,... 亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A,构建转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了CaIFN-α1在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE检测结果表明表达产物相对分子质量约为2.7×104,比其推导结果(约1.9×104)大,推测可能是发生了糖基化。酵母分泌表达的CaIFN-α1具有较高的抗病毒活性,约为1.45×106U·mL-1,蛋白含量约为96mg·L-1,比活性为1.49×107U·mg-1。重组CaIFN-α1的生物学活性具有较强的种属特异性,在犬肾细胞(MDCK)上具有很高的抗病毒活性,在鸡胚成纤维细胞上活性较低,而在猫肾细胞(F81)和牛肾细胞(MDBK)上几乎没有抗病毒活性。进一步研究发现,重组犬α1干扰素对犬瘟热病毒和伪狂犬病毒在犬肾细胞中的增殖具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 犬α干扰素 毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性
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里氏木霉木聚糖酶XYN II基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:6
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作者 欧阳嘉 王向明 +2 位作者 张清 严明 许琳 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 2007年第5期83-88,共6页
采用RT—PCR方法克隆到里氏木霉RutC-30木聚糖酶(XYNⅡ)的cDNA序列。测序结果表明,XYNⅡ的cDNA基因开放阅读框长度为669bp,编码223个氨基酸,N端1~19个氨基酸为潜在的信号肽序列,删去潜在信号肽序列,将里氏木霉木聚糖酶的基因(... 采用RT—PCR方法克隆到里氏木霉RutC-30木聚糖酶(XYNⅡ)的cDNA序列。测序结果表明,XYNⅡ的cDNA基因开放阅读框长度为669bp,编码223个氨基酸,N端1~19个氨基酸为潜在的信号肽序列,删去潜在信号肽序列,将里氏木霉木聚糖酶的基因(xynⅡ)构建到巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K上,线性化后电击转化到巴斯德毕赤酵母中,经G418筛选和PCR鉴定后的转化子用1%的甲醇进行诱导,对重组木聚糖酶活检测显示该基因能在毕赤酵母中表达有生物活性的XYNⅡ并分泌到胞外。发酵液中的酶活在诱导培养60h达到1.45IU/mL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为6.0。 展开更多
关键词 里氏木霉 木聚糖酶 毕赤酵母 分泌表达
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古细菌Pyrococcus furiosus高嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达 被引量:11
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作者 沈微 王正祥 +3 位作者 唐雪明 邵蔚蓝 刘吉泉 诸葛健 《中国酿造》 CAS 北大核心 2003年第1期12-14,44,共4页
该文将大肠杆菌表达载体pKK223-3中含tac启动子的片段以BamHI、EcoRI酶切后接入表达载体pET28a 中,构建成新的表达载体pEtac,通过PCR扩增获得P.furiosus 胞外α- 淀粉酶完整结构基因,接入pEtac 中,转化大肠杆菌JM10... 该文将大肠杆菌表达载体pKK223-3中含tac启动子的片段以BamHI、EcoRI酶切后接入表达载体pET28a 中,构建成新的表达载体pEtac,通过PCR扩增获得P.furiosus 胞外α- 淀粉酶完整结构基因,接入pEtac 中,转化大肠杆菌JM109。在IPTG诱导下,转化子周质中能测出明显酶活,证明Pyrococcusfuriosus 的胞外α- 淀粉酶能在自身信号肽引导下分泌到大肠杆菌细胞周质中。重组酶最适pH为4.5,最适温度为95℃,重组酶经121℃保温1h,酶活仍能保持50%以上,性质与由P.furiosus自身分泌的胞外α- 淀粉酶相似。 展开更多
关键词 “Pyrococcus furiosus” α-淀粉酶 大肠杆菌 分泌表达 酶制剂 基因
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人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析 被引量:7
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作者 田生礼 刘丽 +5 位作者 芦兴武 孟岩 谢宝树 刘立忠 王颖 冷爱军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第4期358-364,共7页
外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母(Pichiapastoris)染色体上,获得遗传性稳定分泌表达株.利用酵母信号肽MFα,对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计,使天然人TPO成熟肽在毕赤酵母系统中分... 外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母(Pichiapastoris)染色体上,获得遗传性稳定分泌表达株.利用酵母信号肽MFα,对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计,使天然人TPO成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功.表达产物经Western-blot进行分析,分子量约为66kD处蛋白条带可被TPO抗体识别;表达量约为0.1g/L;N端氨基酸序列分析结果与设计的一致;表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位(megakary-ocytecolonyformingunit,CFU-Meg)具有明显的刺激作用. 展开更多
关键词 血小板生成素 毕赤酵母 分泌表达 活性测定
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