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地西泮结合抑制剂在牦牛不同大小卵泡中的表达与定位
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作者 王立斌 王强龙 +6 位作者 潘阳阳 黄振华 赵天 丁天翊 刘敏清 崔燕 余四九 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第8期11-17,共7页
【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor, DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径<3 mm,直径3~8 mm,直径>8 mm)... 【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor, DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径<3 mm,直径3~8 mm,直径>8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(qRT-PCR)检测DBI基因mRNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting, WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry, IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence, IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因mRNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P<0.05),表达量随着牦牛卵泡直径的增大而显著上升。DBI蛋白在牦牛成熟卵泡中的颗粒细胞、卵丘细胞均有分布;在卵母细胞中主要定位于细胞质、细胞核。【结论】DBI在类固醇激素合成与卵母细胞成熟过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 牦牛 地西泮结合抑制剂 卵泡发育 卵母细胞 表达与定位
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PP-1催化亚基(PP-1c)在成体小白鼠不同组织器官中的分化表达与定位 被引量:2
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作者 刘文彬 聂磊 +6 位作者 惠珊珊 胡小慧 马慧 王玲 周磊 肖亚梅 李万程 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期437-443,共7页
为了确定蛋白磷酸酶-1(protein phosphatase-1)的催化亚基(PP-1c)在小白鼠不同器官组织(肌肉、卵巢、肾、胃、脾、大脑、心、肝、肺及乳腺)中的表达模式,运用RT-PCR、Western印迹及荧光免疫组织化学技术等实验手段进行了检测和分析.结... 为了确定蛋白磷酸酶-1(protein phosphatase-1)的催化亚基(PP-1c)在小白鼠不同器官组织(肌肉、卵巢、肾、胃、脾、大脑、心、肝、肺及乳腺)中的表达模式,运用RT-PCR、Western印迹及荧光免疫组织化学技术等实验手段进行了检测和分析.结果表明,在mRNA水平,PP-1c在大脑中表达最高,卵巢及肺中表达次之,在肌肉、肾、心、肝中表达较低,在胃和乳腺中表达最低;在蛋白质水平,肝中表达最高,肾、大脑、肺和乳腺中表达较高,而肌肉、卵巢、心和脾中表达相对较低,胃中表达最低.免疫荧光组织化学实验结果显示,PP-1c的表达也具有明显的组织特异性和细胞特异性.这些结果为进一步探讨PP-1在哺乳动物不同组织器官中的功能提供了重要的实验依据. 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶-1 蛋白磷酸酶-1催化亚基 信号传导 差异表达与定位
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神经肽FF在小黄鱼(Larimichthys polyactis)性腺发育早期的表达与定位分析 被引量:1
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作者 肖燃 宋长普 +4 位作者 朱阳 黄伟 郑利兵 迟长凤 楼宝 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期213-221,共9页
神经肽FF是属于RFamide相关肽家族中的一种八肽,在多种生物过程中具有调节功能。本文开展了小黄鱼(Larimichthys polyactis)神经肽FF相关基因(LpNPFF:Accession No.MT012894)的组织表达与定位分析研究。实时荧光定量PCR结果显示,小黄鱼... 神经肽FF是属于RFamide相关肽家族中的一种八肽,在多种生物过程中具有调节功能。本文开展了小黄鱼(Larimichthys polyactis)神经肽FF相关基因(LpNPFF:Accession No.MT012894)的组织表达与定位分析研究。实时荧光定量PCR结果显示,小黄鱼神经肽FF基因在性未成熟期(第Ⅱ期)的小黄鱼的脑和性腺中表达较高,其次是肌肉和脾脏,在胃和肠中表达相对较少;原位杂交结果显示,在小黄鱼中脑的视顶盖(OTec)、圆环体(TL)、结节前核(NAT)、外侧结节核(NLT)、下丘脑弥散核(NDLI)以及延脑(MO)中检测到大量LpNPFF mRNA阳性的细胞,而端脑和小脑部分的表达较少。同时,在小黄鱼第Ⅱ期卵巢细胞的细胞质和核仁中也能观察到明显的阳性信号;免疫组织化学结果显示,在小黄鱼脑部表层细胞和卵巢壁周围的结缔组织中可见明显的RFamide免疫阳性纤维。上述研究结果有助于神经肽进化的深入研究,也为进一步探索NPFF相关基因在生殖调控方面的潜在功能提供了新的思路。 展开更多
关键词 小黄鱼(Larimichthys polyactis) 神经肽FF(neuropeptide FF) 组织表达与定位
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hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位 被引量:1
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作者 蔡鑫泽 顾卉 +1 位作者 刘彤 李丰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期816-819,共4页
目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋... 目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。 展开更多
关键词 hLMO1基因 质粒构建 基因表达与定位
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棕头蜘蛛猴Atfu-B基因α2结构域缺失剪切异构体的表达及其细胞内定位 被引量:1
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作者 曹玉华 严翔 +7 位作者 刘一 曾林 隋丽华 赵彦斌 刘冰 刘慧芳 孙兆增 李莲瑞 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第10期63-66,I0006,共5页
目的 Atfu-B* sv1是棕头蜘蛛猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的一种剪切异构体,其α2结构域缺失。本实验旨在初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Atfu-B基因的表达情况进行比较,观察... 目的 Atfu-B* sv1是棕头蜘蛛猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的一种剪切异构体,其α2结构域缺失。本实验旨在初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Atfu-B基因的表达情况进行比较,观察两者之间的差异。方法分别构建Atfu-B*sv1以及全长Atfu-B基因AtfuB*02:03和Atfu-B*03:01的真核表达载体,并将这三种重组质粒分别转染293T细胞。利用Western blot免疫印迹实验检测这三种基因在细胞内的表达情况,并利用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术分别分析这三种基因在细胞内的表达定位。结果 Atfu-B*sv1、Atfu-B*02:03和Atfu-B*03:01均能在293T细胞内正常表达,并且都发生了糖基化的修饰,三种基因都在细胞膜上表达。结论虽然Atfu-B*sv1的α2结构域缺失,但其细胞内的表达和定位与全长全长Atfu-B基因没有明显差异,其功能有待于进一步探索。 展开更多
关键词 棕头蜘蛛猴 Atfu-B基因 剪切异构体 表达与定位
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Mamu-B* 007:03及其剪切异构体Mamu-B* 007:03-sv1基因的表达与细胞内定位
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作者 严翔 曹玉华 +6 位作者 刘一 曾林 隋丽华 崔晓霞 刘慧芳 孙兆增 何剑斌 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第12期1-4,F0002,共5页
目的 Mamu-B*007:03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B*007:03基因的表达情况进行... 目的 Mamu-B*007:03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B*007:03基因的表达情况进行比较。方法分别构建Mamu-B*007:03-sv1-myc-pEGFPN3和Mamu-B*007:03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。利用Western-blot免疫印迹实验检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。结果 Mamu-B*007:03-sv1和Mamu-B*007:03基因均能在293T细胞内正常表达。Mamu-B*007:03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B*007:03基因在细胞膜上表达,Mamu-B*007:03-sv1基因在细胞内表达。结论 Mamu-B*007:03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B*007:03基因有明显差异,其功能有待于进一步探索。 展开更多
关键词 中国恒河猴 Mamu-B*007-sv1基因 Mamu-B*007基因 剪切异构体 表达与定位
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天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测 被引量:1
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作者 蒋玉萌 赵雪 +3 位作者 王宁 王洪才 张惊宇 杨子超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期344-346,350,共4页
目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行... 目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒。用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况。结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与Gen-Bank中的人UBE3a cDNA序列一致。经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集。结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 UBE3a基因 天使综合征 体外神经元培养 基因表达与定位
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