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大豆表皮模式因子GmEPFL6a荫蔽响应分析及原核表达条件优化
1
作者
罗芮洁
闫飞燕
+5 位作者
蒋亨珂
廖树琳
杨辉
孙歆
余靓
杜俊波
《中国油料作物学报》
2025年第4期929-938,共10页
为了更多了解大豆避荫反应机制中mGmEPFL6a(MATURE EPIDERMAL PATTERNING FACTOR LIKE6a)蛋白的功能,需要在进行体外纯化时得到大量高活性的蛋白,实验优化了蛋白的原核表达条件,即以实时荧光定量PCR检测GmEPFL6各同源基因在荫蔽处理下...
为了更多了解大豆避荫反应机制中mGmEPFL6a(MATURE EPIDERMAL PATTERNING FACTOR LIKE6a)蛋白的功能,需要在进行体外纯化时得到大量高活性的蛋白,实验优化了蛋白的原核表达条件,即以实时荧光定量PCR检测GmEPFL6各同源基因在荫蔽处理下的表达情况,从中选出响应程度最高的GmEPFL6a,克隆其成熟区段,即mGmEPFL6a用以构建原核表达载体pCold-mGmEPFL6a,转化BL21(DE3)表达菌株,借助异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,利用酶标仪、SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达量,经单因素试验和正交试验确定最优表达条件。实时荧光定量结果显示:GmEPFL6a在上胚轴、叶柄、单叶中高度响应荫蔽,且对不同光质响应程度有所差异。重组蛋白最优表达条件包括加入0.5 mmol·L~(-1)IPTG诱导剂,在28℃的温度下120 r/min低速孵育24 h。各因素的影响主次分别为诱导温度>诱导时间>IPTG浓度。结果可为进一步研究mGmEPFL6在大豆避荫反应机制中的功能提供数据支撑。
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关键词
避荫反应
表皮模式因子
mGmEPFL6a
原核表达纯化
诱导条件优化
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职称材料
甜瓜CmEPF基因家族的鉴定及表达分析
被引量：
2
2
作者
陈春林
李白雪
+3 位作者
李金玲
杜清洁
李猛
肖怀娟
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期130-138,共9页
【目的】表皮模式因子(epidermal patterning factor,EPF)是一类植物特有的分泌蛋白,在植物生长发育特别是气孔形态建成过程中发挥着重要作用,旨为揭示甜瓜EPF基因的特性和功能。【方法】对甜瓜CmEPF基因家族进行基因组鉴定,利用生物信...
【目的】表皮模式因子(epidermal patterning factor,EPF)是一类植物特有的分泌蛋白,在植物生长发育特别是气孔形态建成过程中发挥着重要作用,旨为揭示甜瓜EPF基因的特性和功能。【方法】对甜瓜CmEPF基因家族进行基因组鉴定,利用生物信息学手段对其基因结构、系统进化以及组织表达特性进行分析。【结果】甜瓜基因组存在11个可分为3个亚家族的CmEPF成员,它们的基因结构相对保守,含有1-3个内含子,且大都分布于甜瓜的叶绿体上;基于系统进化分析将其分为3个亚家族。不同器官RT-qPCR分析发现,CmEPFs基因在甜瓜器官中广泛表达,但不同家族成员在不同器官中的表达模式存在差异,其在第二片叶表达量较高,且气孔密度、光合速率和蒸腾速率最高,其表达量与光合参数和气孔密度显著相关。【结论】CmEPFs基因通过影响甜瓜的气孔密度,影响其光合作用,从而调控甜瓜叶片气孔对外界环境的响应。
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关键词
甜瓜
表皮模式因子
拟南芥
气孔
叶绿体
基因表达分析
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职称材料
题名
大豆表皮模式因子GmEPFL6a荫蔽响应分析及原核表达条件优化
1
作者
罗芮洁
闫飞燕
蒋亨珂
廖树琳
杨辉
孙歆
余靓
杜俊波
机构
四川农业大学农学院
出处
《中国油料作物学报》
2025年第4期929-938,共10页
基金
国家自然科学基金:(32372059、32171939)
四川省科技计划项目(2023YFH0011)
国家现代农业技术体系四川大豆创新团队专项资金(SCCXTD-2024-21)。
文摘
为了更多了解大豆避荫反应机制中mGmEPFL6a(MATURE EPIDERMAL PATTERNING FACTOR LIKE6a)蛋白的功能,需要在进行体外纯化时得到大量高活性的蛋白,实验优化了蛋白的原核表达条件,即以实时荧光定量PCR检测GmEPFL6各同源基因在荫蔽处理下的表达情况,从中选出响应程度最高的GmEPFL6a,克隆其成熟区段,即mGmEPFL6a用以构建原核表达载体pCold-mGmEPFL6a,转化BL21(DE3)表达菌株,借助异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,利用酶标仪、SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达量,经单因素试验和正交试验确定最优表达条件。实时荧光定量结果显示:GmEPFL6a在上胚轴、叶柄、单叶中高度响应荫蔽,且对不同光质响应程度有所差异。重组蛋白最优表达条件包括加入0.5 mmol·L~(-1)IPTG诱导剂,在28℃的温度下120 r/min低速孵育24 h。各因素的影响主次分别为诱导温度>诱导时间>IPTG浓度。结果可为进一步研究mGmEPFL6在大豆避荫反应机制中的功能提供数据支撑。
关键词
避荫反应
表皮模式因子
mGmEPFL6a
原核表达纯化
诱导条件优化
Keywords
shade avoidance response
epidermal patterning factor
mGmEPFL6a
prokaryotic expression
optimization of induction conditions
分类号
S565.1 [农业科学]
S311 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
甜瓜CmEPF基因家族的鉴定及表达分析
被引量：
2
2
作者
陈春林
李白雪
李金玲
杜清洁
李猛
肖怀娟
机构
河南农业大学园艺学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期130-138,共9页
基金
国家自然科学基金项目(32202578)。
文摘
【目的】表皮模式因子(epidermal patterning factor,EPF)是一类植物特有的分泌蛋白,在植物生长发育特别是气孔形态建成过程中发挥着重要作用,旨为揭示甜瓜EPF基因的特性和功能。【方法】对甜瓜CmEPF基因家族进行基因组鉴定,利用生物信息学手段对其基因结构、系统进化以及组织表达特性进行分析。【结果】甜瓜基因组存在11个可分为3个亚家族的CmEPF成员,它们的基因结构相对保守,含有1-3个内含子,且大都分布于甜瓜的叶绿体上;基于系统进化分析将其分为3个亚家族。不同器官RT-qPCR分析发现,CmEPFs基因在甜瓜器官中广泛表达,但不同家族成员在不同器官中的表达模式存在差异,其在第二片叶表达量较高,且气孔密度、光合速率和蒸腾速率最高,其表达量与光合参数和气孔密度显著相关。【结论】CmEPFs基因通过影响甜瓜的气孔密度,影响其光合作用,从而调控甜瓜叶片气孔对外界环境的响应。
关键词
甜瓜
表皮模式因子
拟南芥
气孔
叶绿体
基因表达分析
Keywords
melon
epidermal patterning factor
Arabidopsis
stomata
chloroplast
gene expression analysis
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S652 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大豆表皮模式因子GmEPFL6a荫蔽响应分析及原核表达条件优化
罗芮洁
闫飞燕
蒋亨珂
廖树琳
杨辉
孙歆
余靓
杜俊波
《中国油料作物学报》
2025
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
甜瓜CmEPF基因家族的鉴定及表达分析
陈春林
李白雪
李金玲
杜清洁
李猛
肖怀娟
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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职称材料
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