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从噬菌体环肽库中筛选TNF-α表位模拟肽的研究 被引量：3
1
作者 罗海波 刘北一 +2 位作者 刘艳君 朱平 富宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期322-325,共4页
目的 :用具有中和活性的抗TNF α单抗 (mAb)J1D9筛选噬菌体环七肽库 ,从中获得可模拟TNF α表位的短肽。方法 :筛选TNF α表位模拟肽 ,并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆。结果 :对环七肽库进行 3轮筛选后 ,随机挑选 2 0个噬菌体克隆 ,经ELIS... 目的 :用具有中和活性的抗TNF α单抗 (mAb)J1D9筛选噬菌体环七肽库 ,从中获得可模拟TNF α表位的短肽。方法 :筛选TNF α表位模拟肽 ,并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆。结果 :对环七肽库进行 3轮筛选后 ,随机挑选 2 0个噬菌体克隆 ,经ELISA鉴定出 9个阳性克隆。DNA序列分析后 ,推导的氨基酸序列共 3种 :c RRPAQSG c、c NKHNRKI c和c RGMSRKI c。结论 :筛选的环七肽克隆展示肽具有TNF α的抗原性 ,为TNF 展开更多
关键词 噬菌体肽库 TNF—α 表位模拟肽
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人工合成VEGF表位模拟7肽的生物学功能研究
2
作者 向军俭 钟振东 +2 位作者 邓宁 岑健宏 杨红宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期37-38,共2页
目的: 检测人工合成血管内皮细胞生长因子(VEGF)表位模拟 7肽特异抑制VEGF促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的活性。方法: 通过噬菌体展示技术, 筛选获得了表达模拟肽的阳性噬菌体克隆, 经测序得到VEGF表位模拟肽序列: GWYYDAX。人工合... 目的: 检测人工合成血管内皮细胞生长因子(VEGF)表位模拟 7肽特异抑制VEGF促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的活性。方法: 通过噬菌体展示技术, 筛选获得了表达模拟肽的阳性噬菌体克隆, 经测序得到VEGF表位模拟肽序列: GWYYDAX。人工合成该短肽, 用体外细胞培养的方法检测其对HUVEC的生长抑制作用。结果: 表位模拟肽GWYYDAX可剂量依赖性抑制VEGF促进HUVEC生长的活性。结论: VEGF表位模拟肽可能模拟了VEGF的部分结构, 竞争结合HUVEC细胞VEGF受体 (KDR), 阻断了VEGF VEGFR的信号传递而抑制细胞生长, 具有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 血管内皮细胞生长因子 表位模拟肽 人工合成肽
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MUC1模拟表位肽致敏DC对宫颈癌荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫微环境的影响 被引量：3
3
作者 汪祖春 王烈宏 祁青玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1285-1289,共5页
目的:研究黏蛋白1(MUC1)模拟表位肽致敏树突状细胞(DC)对宫颈癌荷瘤小鼠生长和免疫微环境的影响。方法:培养小鼠骨髓细胞,诱导并刺激DC成熟,MUC1模拟表位肽处理构建负载MUC1模拟表位肽的DC。构建稳定表达MUC1的宫颈癌U14细胞株的荷瘤BAL... 目的:研究黏蛋白1(MUC1)模拟表位肽致敏树突状细胞(DC)对宫颈癌荷瘤小鼠生长和免疫微环境的影响。方法:培养小鼠骨髓细胞,诱导并刺激DC成熟,MUC1模拟表位肽处理构建负载MUC1模拟表位肽的DC。构建稳定表达MUC1的宫颈癌U14细胞株的荷瘤BALB/c小鼠模型,随机分为3组:空白对照组(注射0.2 ml生理盐水)、DC组(注射2×10^(5)个未加MUC1模拟表位肽的DCs)和DC+MUC1组(注射2×10^(5)个负载MUC1模拟表位肽的DCs),免疫1周后进行二次免疫。治疗前和二次免疫1周后测量肿瘤体积;二次免疫1周后取小鼠肿瘤组织称重并计算抑瘤率;取小鼠外周血,流式细胞术检测CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp^(3+)Treg水平;ELISA检测小鼠血清IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF浓度。结果:与治疗前比较,空白对照组、DC组和DC+MUC1组肿瘤体积增大(P<0.05),治疗前各组差异无统计学意义(P>0.05),二次免疫1周后,DC+MUC1组肿瘤体积小于空白对照组和DC组(P<0.05),空白对照组和DC组差异无统计学意义(P>0.05);DC组和DC+MUC1组小鼠抑瘤率均高于空白对照组(P<0.05),DC+MUC1组小鼠抑瘤率高于DC组(P<0.05);DC+MUC1组小鼠外周血CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞水平高于空白对照组和DC组(P<0.05),空白对照组和DC组差异无统计学意义(P>0.05);DC+MUC1组CD4^(+)CD25^(+)Foxp^(3+)Treg和血清IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF水平低于空白对照组和DC组,空白对照组和DC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MUC1模拟表位肽致敏DC可抑制宫颈癌荷瘤小鼠肿瘤生长,改善肿瘤免疫微环境及细胞因子表达。 展开更多
关键词 黏蛋白1 模拟表位肽 树突状细胞 宫颈癌 免疫微环境
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南极磷虾原肌球蛋白纯化鉴定、理化特性及模拟表位肽预测 被引量：2
4
作者 王珊 刘瑶 +3 位作者 刘柯欣 张书琪 林松毅 孙娜 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第24期117-128,共12页
对南极磷虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)进行提取纯化与质谱鉴定,并对其热稳定性、pH值稳定性及消化稳定性进行研究,同时利用生物信息学对其进行序列同源性分析、空间结构同源建模及过敏原模拟表位肽识别。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶... 对南极磷虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)进行提取纯化与质谱鉴定,并对其热稳定性、pH值稳定性及消化稳定性进行研究,同时利用生物信息学对其进行序列同源性分析、空间结构同源建模及过敏原模拟表位肽识别。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳结果显示,经蛋白粗提、热除杂、等电点沉淀、硫酸铵盐析等多步提纯,最终仅在32 kDa附近得到一条清晰条带。利用超高效液相色谱-质谱联用对其进行扫描,经UniProt数据库检索确定该目的蛋白为TM(Euphausia superba),蛋白分子质量32.6 kDa,肽段覆盖率达97%。同源性分析结果表明南极磷虾TM是一种高度保守蛋白,与26种甲壳动物的TM序列同源性在88%~98.2%之间。南极磷虾TM对热、酸碱及胃液消化均具有较强的稳定性,而对肠液消化稳定性较差,易被胰蛋白酶和糜蛋白酶降解生成低分子质量肽段。通过DNAStar Protean、ANTHEPROT、BepiPred 1.0 server、ABCpred server、Immunomedicine Group 5种生物信息学工具最终预测识别出8条南极磷虾TM模拟表位肽(EAQNKETNAKADKADDEVH、DLERSEERLN、TKLAEASQAADESER、EADRKYDE、ERAEERAEAG、VSEEKANQREEAYKEQI、RSVQKLQKEVDR、VNEKEKYKGI),并在其空间结构中进行一一映射。本研究为南极磷虾TM模拟表位肽的精准预测识别及其相关低致敏性产品的开发提供了科学依据。 展开更多
关键词 南极磷虾 原肌球蛋白 提取纯化 蛋白鉴定 稳定性 生物信息学 模拟表位肽
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滋养层细胞促融合表位肽抗生育作用的初步研究
5
作者 张英晨 方针强 叶钢 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1218-1220,共3页
目的合成多价抗原肽,观察其体液免疫效果,并初步评估其抗生育潜力。方法选择人滋养层细胞促融合表位模拟肽与一种通用辅助T细胞表位(PADRE)作为骨架,合成多价抗原肽(MAP)结构的免疫原,与等量弗氏佐剂混悬后免疫雌性C57BL/6小鼠,观察体... 目的合成多价抗原肽,观察其体液免疫效果,并初步评估其抗生育潜力。方法选择人滋养层细胞促融合表位模拟肽与一种通用辅助T细胞表位(PADRE)作为骨架,合成多价抗原肽(MAP)结构的免疫原,与等量弗氏佐剂混悬后免疫雌性C57BL/6小鼠,观察体液免疫反应的特点及抗血清干扰滋养细胞融合的效果。结果在431A固相自动肽合成仪上成功地合成了MAP多肽,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95%以上;其在小鼠血清中诱导出的特异性抗体的滴度最高达1:1024,且可以特异识别滋养层细胞相关抗原表位;在1:10稀释的抗血清存在时,forskolin诱导的人绒癌细胞(BeWo)间融合显著减少(P<0·01)。结论由含有人滋养层细胞促融合表位模拟肽、具有特异性氨基酸序列的新抗原所制备的抗血清可识别滋养层细胞相关天然抗原表位,并在小鼠体内激发出较理想的特异性体液免疫,同时,抗血清对BeWo细胞间融合具有一定抑制作用。 展开更多
关键词 滋养层细胞 免疫避孕 表位模拟肽 细胞间融合
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麻痹性贝类毒素GTX2,3模拟表位的初步研究 被引量：1
6
作者 向征 刘北一 +2 位作者 侯晓睿 向军俭 富宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期530-532,共3页
目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心EL... 目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心ELISA方法鉴定噬菌体克隆,竞争ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的特异性。对阳性克隆进行DNA测序并推导噬菌体所展示的氨基酸序列。竞争ELISA鉴定模拟GTX2,3表位的合成肽的特异性。结果:经过3轮筛选获得20株能与靶分子高亲和力结合的阳性噬菌体克隆。序列分析表明DXLXPP为保守序列(X为任意氨基酸)。竞争ELISA检测表明,麻痹性贝类毒素GTX2,3可抑制阳性噬菌体克隆phage2与抗GTX2,3mAb结合。根据阳性序列合成的短肽可以抑制phage2与抗GTX2,3mAb的结合(IC50=13μg/mL)。结论:通过噬菌体肽库筛选技术,成功地获得麻痹性贝类毒素GTX2,3的模拟表位,并初步证实以此为基础合成的短肽能够准确和特异的模拟GTX2,3的表位。 展开更多
关键词 噬菌体展示肽库 麻痹性贝类毒素GTX2 3 模拟表位肽
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有机磷农药广谱抗原表位多肽的制备及应用
7
作者 赵扬 武爱华 +4 位作者 张霄 莫海珍 张存政 刘贤金 胡梁斌 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共6页
利用噬菌体展示技术,以广谱型单克隆抗体筛选十二肽噬菌体展示库,获得能够模拟有机磷类农药抗原表位的十二肽,建立了一种间接竞争ELISA方法用于检测多种有机磷类农药。结果表明,获得的特异性多肽氨基酸序列为HPAPDHSSQSHQ,呈现出较好的... 利用噬菌体展示技术,以广谱型单克隆抗体筛选十二肽噬菌体展示库,获得能够模拟有机磷类农药抗原表位的十二肽,建立了一种间接竞争ELISA方法用于检测多种有机磷类农药。结果表明,获得的特异性多肽氨基酸序列为HPAPDHSSQSHQ,呈现出较好的抗原性、亲水性及表面可及性,可广谱模拟有机磷农药抗原表位。所建立的间接ELISA方法对有机磷农药通用结构半抗原(BPB)的IC50和IC10分别为1.776μg/ml及0.358μg/ml,与对硫磷、蝇毒磷、乙拌磷、辛硫磷、喹硫磷和三唑磷的交叉反应率分别为58.74%、44.93%、52.03%、43.98%、36.82%和4.87%。建立的检测方法具有绿色、广谱、高效的特点,是一种新型有机磷类农药累积毒性检测技术。 展开更多
关键词 有机磷类农药 噬菌体展示十二肽库 模拟抗原表位多肽 间接竞争ELISA
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脂多糖模拟肽13L诱导对小鼠内毒素休克的保护反应 被引量：2
8
作者 罗海波 郑健 +2 位作者 朱平 黄来强 富宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1312-1319,共8页
为研究LPS 2630表位模拟肽13L是否能诱导抗脂多糖(LPS)抗体的产生、对细菌攻击及内毒素休克的保护性反应,合成了模拟LPS表位的短肽13L.用合成肽13L-蓝载体(blue carrier,BC)交联物免疫Balb/C小鼠,观察小鼠体内抗LPS抗体产生的规律,并观... 为研究LPS 2630表位模拟肽13L是否能诱导抗脂多糖(LPS)抗体的产生、对细菌攻击及内毒素休克的保护性反应,合成了模拟LPS表位的短肽13L.用合成肽13L-蓝载体(blue carrier,BC)交联物免疫Balb/C小鼠,观察小鼠体内抗LPS抗体产生的规律,并观察免疫小鼠细菌感染存活时间,用颈总动脉插管测定技术观察免疫小鼠内毒素休克的血压变化.结果显示,合成肽13L-BSA交联物能与兔抗鼠伤寒和大肠杆菌LPS抗血清及抗鼠伤寒LPS单抗结合,证明短肽13L可模拟LPS的抗原性.用13L-BC交联物免疫可诱发小鼠体内针对大肠杆菌LPS 2630和鼠伤寒沙门氏菌LPS 7261的抗体反应,该反应可被灭活大肠杆菌及两种LPS所加强,其抗体亚类主要为IgG2a,其次为IgG2b与IgM,而IgG1与IgG3含量极低.免疫13L-BC小鼠显示对细菌攻击的抵抗,与免疫BC对照小鼠比较,其存活时间分别为(12±1.3)天和(5.3±0.4)天(P<0.01).免疫13L-BC小鼠对静脉注射LPS诱发内毒素休克的保护作用体现在血压下降幅度明显低于对照动物,在LPS 2630攻击后1、2、3及4h时两组动物血压明显差别(P<0.05、P<0.01、P<0.05及P<0.01),而LPS 7261攻击后1、2、3及4h时两组动物血压差别则略小于LPS 2630组(P>0.05、P<0.05、P<0.05及P<0.01).上述结果证明,LPS表位模拟肽13L交联物免疫小鼠可产生针对细菌攻击及内毒素休克的保护性效应,提示该模拟肽作为LPS交叉保护性疫苗候选的可行性. 展开更多
关键词 脂多糖 表位模拟肽 内毒素休克 保护性免疫
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赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制及与传统胶体金试纸条的比较 被引量：14
9
作者 赖卫华 许杨 +2 位作者 熊勇华 陈媛 刘文娟 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期465-468,共4页
本实验介绍了赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、无毒体系试纸条的组装等步骤。所制备的赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条和传统的胶体金试纸条进行了比较,测试结果表明,赭曲霉毒素A无... 本实验介绍了赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、无毒体系试纸条的组装等步骤。所制备的赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条和传统的胶体金试纸条进行了比较,测试结果表明,赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的检测限和检测时间与传统的胶体金试纸条相同,适合于赭曲霉毒素A现场筛查之用。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 胶体金:试纸条 模拟表位肽
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噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用 被引量：2
10
作者 胡骁飞 栗力 +7 位作者 邢广旭 裴亚峰 职爱民 王耀 孙亚宁 王磊 赵丽娜 邓瑞广 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第6期32-35,共4页
霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一。毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大。噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术。综述了此项技术... 霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一。毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大。噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术。综述了此项技术的发展和在筛选霉菌毒素模拟表位肽中的作用及模拟表位肽在毒素检测中的应用,并展望了该技术的应用前景。 展开更多
关键词 霉菌毒素 检测 噬菌体展示技术 模拟表位肽
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