本研究采用表面等离子体共振技术,以血管紧张素转换酶(angiotensin I converting enzyme,ACE)为蛋白配体,分析马氏珠母贝肉蛋白酶解产物(protein hydrolysate of Pinctada martensii,PHPM)超滤组分与配体的结合情况,利用质谱鉴定结合肽...本研究采用表面等离子体共振技术,以血管紧张素转换酶(angiotensin I converting enzyme,ACE)为蛋白配体,分析马氏珠母贝肉蛋白酶解产物(protein hydrolysate of Pinctada martensii,PHPM)超滤组分与配体的结合情况,利用质谱鉴定结合肽段的氨基酸序列后,筛选潜在抑制ACE活性强的肽段进行合成,研究其体外ACE抑制活性、抑制类型及多肽与ACE蛋白的相互作用。结果显示,PHPM分子质量在3 000~5 000 Da的超滤组分与ACE蛋白具有较强的结合信号,在结合物质的肽序列中优选出4种具有潜在活性的ACE抑制肽进行合成,其中多肽SLPWPMKPMNLIE的半数抑制浓度最低,并且通过氢键与ACE蛋白C端结构域的疏水口袋结合。展开更多
本实验以脂质体作为包埋载体,研究血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽Arg-Leu-Ser-Phe-Asn-Pro(RLSFNP)脂质体的制备工艺。以包封率为考察指标,采用单因素试验和响应面试验优化RLSFNP脂质体的制备工艺。得出最...本实验以脂质体作为包埋载体,研究血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽Arg-Leu-Ser-Phe-Asn-Pro(RLSFNP)脂质体的制备工艺。以包封率为考察指标,采用单因素试验和响应面试验优化RLSFNP脂质体的制备工艺。得出最优制备条件为:大豆卵磷脂用量120.0 mg、胆固醇用量24.6 mg、RLSFNP用量15.3 mg、乙醚用量15.0 m L、磷酸盐缓冲液(p H 7.4)用量5.8 m L、探头超声时间5.2 min。在此条件下制备的脂质体平均粒径在168 nm左右,电位为-31.2 m V,实际包封率为(67.5±0.8)%,由脂质体包埋后的RLSFNP具有一定的缓释效果。展开更多
运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为...运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为单一肽组分。对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/E S I-M S)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALD I-TO F M S)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-G lu-Ile-Trp(KE IW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律。经过对两种方法分析过程的比较,认为E S I-M S可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALD I-TO F M S可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.000 1),从而可以得到确定的肽的序列。展开更多
文摘本实验以脂质体作为包埋载体,研究血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽Arg-Leu-Ser-Phe-Asn-Pro(RLSFNP)脂质体的制备工艺。以包封率为考察指标,采用单因素试验和响应面试验优化RLSFNP脂质体的制备工艺。得出最优制备条件为:大豆卵磷脂用量120.0 mg、胆固醇用量24.6 mg、RLSFNP用量15.3 mg、乙醚用量15.0 m L、磷酸盐缓冲液(p H 7.4)用量5.8 m L、探头超声时间5.2 min。在此条件下制备的脂质体平均粒径在168 nm左右,电位为-31.2 m V,实际包封率为(67.5±0.8)%,由脂质体包埋后的RLSFNP具有一定的缓释效果。
文摘运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为单一肽组分。对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/E S I-M S)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALD I-TO F M S)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-G lu-Ile-Trp(KE IW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律。经过对两种方法分析过程的比较,认为E S I-M S可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALD I-TO F M S可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.000 1),从而可以得到确定的肽的序列。
