重组人血管生长素的鉴定 被引量：3

1

作者 张宏斌 江悦华 +3 位作者 王捷 武婕 杨太成 吴锦银 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期613-614,617,共3页

目的 :为了鉴定自行制备的重组人血管生长素。方法 :采用凝胶扫描法分析纯度 ;ELISA等方法检测特异性 ;鸡胚绒毛尿囊膜实验检测生物活性 ,并与商品化标准品进行免疫结合性的对比研究。结果 :重组血管生长素纯度达 96% ,具有促进血管生... 目的 :为了鉴定自行制备的重组人血管生长素。方法 :采用凝胶扫描法分析纯度 ;ELISA等方法检测特异性 ;鸡胚绒毛尿囊膜实验检测生物活性 ,并与商品化标准品进行免疫结合性的对比研究。结果 :重组血管生长素纯度达 96% ,具有促进血管生长的生物活性 ;而且较标准品有理想的免疫结合性。结论 :该重组人血管生长素可用于进一步的实验和临床应用研究。 展开更多

关键词 重组人血管生长素 生物学活性 鉴定 rhANG

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人血管生长素衍生物的重组腺病毒制备 被引量：4

2

作者 黄盛东 董书强 +2 位作者 张宝仁 梅举 李白翎 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期420-422,共3页

目的 :构建并鉴定血管生长素 (ANG)衍生物重组腺病毒 ,为心肌缺血区促血管生长因子基因转染研究作准备。方法 :ANG衍生物 D116 H - ANG重组粘粒与腺病毒 DNA末端肽复合物混合后以磷酸钙共沉淀法转染 2 93人胚肾细胞株细胞。结果 :酶切... 目的 :构建并鉴定血管生长素 (ANG)衍生物重组腺病毒 ,为心肌缺血区促血管生长因子基因转染研究作准备。方法 :ANG衍生物 D116 H - ANG重组粘粒与腺病毒 DNA末端肽复合物混合后以磷酸钙共沉淀法转染 2 93人胚肾细胞株细胞。结果 :酶切结果显示 ,重组粘粒中 ,D116 H - ANG插入方向正确 ,所获重组腺病毒带有 ANG衍生物基因。结论 :所获重组腺病毒为 E1 ,E3缺陷型 。 展开更多

关键词 血管生长素衍生物重组腺病毒 心肌缺血 基因治疗

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重组人血管生长素及其单克隆抗体的特性鉴定 被引量：3

3

作者 张宏斌 江悦华 +3 位作者 王捷 武婕 杨太成 吴锦银 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期277-279,共3页

目的鉴定自制重组人血管生长素(rhANG)及其单克隆抗体(mAb)。方法采用凝胶扫描法分析rhANG的纯度;ELISA等方法检测抗rhANGmAb的特异性,鸡胚绒毛尿囊膜实验检测rhANG及其mAb的生物学活性,并与商品化标准品的免疫结合性进行对比研究。结果... 目的鉴定自制重组人血管生长素(rhANG)及其单克隆抗体(mAb)。方法采用凝胶扫描法分析rhANG的纯度;ELISA等方法检测抗rhANGmAb的特异性,鸡胚绒毛尿囊膜实验检测rhANG及其mAb的生物学活性,并与商品化标准品的免疫结合性进行对比研究。结果rhANG的纯度达96%,具有促进血管生长的生物学活性;抗ANGmAb具有很好的特异性和抑制血管生长的活性;而且二者较标准品均具有良好的免疫结合活性。结论该rhANG及其mAb可用于进一步的实验和临床应用研究。 展开更多

关键词 重组人血管生长素 单克隆抗体 特性鉴定

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肿瘤患者血清血管生长素水平变化的初步研究 被引量：2

4

作者 张宏斌 郭文军 +3 位作者 吴锦银 杨太成 王捷 郑文岭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期190-190,共1页

关键词 血清 血管生长素 检测 肿瘤 测定

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动脉注射血管生长素促进缺血肢体血管生长作用的研究 被引量：3

5

作者 包俊敏 曹贵松 景在平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期699-700,共2页

为研究重组人血管生长素 (rhANG)动脉内注射对家兔缺血肢体血管生长的作用 ,制作家兔后肢缺血模型 ,于术后第 11天经动脉内导管一次性注射不同剂量的rhANG。分别作肢体动脉造影、放射性核素血流及肢体肌肉毛细血管密度测定。结果发现 ,... 为研究重组人血管生长素 (rhANG)动脉内注射对家兔缺血肢体血管生长的作用 ,制作家兔后肢缺血模型 ,于术后第 11天经动脉内导管一次性注射不同剂量的rhANG。分别作肢体动脉造影、放射性核素血流及肢体肌肉毛细血管密度测定。结果发现 ,大剂量组、中剂量组与小剂量组和对照组相比 ,各项指标差别有非常显著性意义 (P <0 0 1)。提示动脉内注射rhANG对家兔缺血肢体血管生长有明显促进作用 。 展开更多

关键词 血管生长素 肢体缺血 血管再生 rhANG

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高表达血管生长素的自体骨髓基质细胞移植治疗猪缺血性心脏病 被引量：1

6

作者 徐驯宇 陈前顺 +3 位作者 黄郴 林兴 黄盛东 韩涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期586-591,共6页

目的将高表达血管生长素(ANG)的自体骨髓基质细胞移植于慢性心肌缺血猪模型,观察移植后血管新生程度及对心功能的影响。方法建立猪慢性缺血性心脏病动物模型,随机分为3组:转染ANG重组腺病毒载体(Ad-ANG)的自体骨髓基质细胞移植组(组Ⅰ,n... 目的将高表达血管生长素(ANG)的自体骨髓基质细胞移植于慢性心肌缺血猪模型,观察移植后血管新生程度及对心功能的影响。方法建立猪慢性缺血性心脏病动物模型,随机分为3组:转染ANG重组腺病毒载体(Ad-ANG)的自体骨髓基质细胞移植组(组Ⅰ,n=11),单纯自体骨髓基质细胞移植组(组Ⅱ,n=10),注射无血清DMEM培养液的对照组(组Ⅲ,n=10)。体外培养自体骨髓基质细胞,利用Ad-ANG转染培养细胞,用CM-DiI标记细胞,移植于模型猪心脏的缺血区域。观察指标包括:冠状动脉(冠脉)造影Rentrop分数及心脏射血分数、梗死区百分数、荧光显微镜下标记细胞、血管数量及ANG的表达和分泌。结果与组Ⅱ及组Ⅲ相比,组Ⅰ冠脉造影Rentrop分数、心脏射血分数增高;缺血心肌区新生血管计数增高,可见大量CM-DiI标记的移植成活细胞,梗死区面积较小,ANG蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论高表达ANG的自体骨髓基质细胞移植于慢性缺血心肌,移植细胞成活率高,能明显改善缺血心肌局部血运,改善心功能。 展开更多

关键词 缺血性心脏病 骨髓基质细胞 血管生长素 细胞移植 腺病毒

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血管生长素与治疗性血管生成的研究进展 被引量：4

7

作者 唐春花 郭淮莲 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期210-213,共4页

血管生长素(angiogenin,ANG)是一种分泌性的单链碱性蛋白质,由123个氨基酸组成,分子量为14.4kD,广泛分布在人体中。ANG属于核糖核酸酶超家族中的一员,具有低核糖核酸酶活性。研究证实,ANG是一种有效的促血管生成因子,参与血管生成的各... 血管生长素(angiogenin,ANG)是一种分泌性的单链碱性蛋白质,由123个氨基酸组成,分子量为14.4kD,广泛分布在人体中。ANG属于核糖核酸酶超家族中的一员,具有低核糖核酸酶活性。研究证实,ANG是一种有效的促血管生成因子,参与血管生成的各个阶段,是其它血管生成因子诱导新血管生成的枢纽,在缺血性疾病的治疗方面显示出巨大的潜能。本文对ANG在治疗性血管生成方面的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 血管生长素 治疗性血管生成 核糖核酸酶

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血管生长素促血管生成机制及其与疾病关系的研究进展 被引量：3

8

作者 程敏 郭淮莲 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期55-57,共3页

血管生长素 (angiogenin ,ANG)是一种促使新血管生成的诱导剂 ,它属于核糖核酸酶超家族中的一员。ANG蛋白含 12 3个氨基酸 ,相对分子量为 14 .4kD ,在肿瘤细胞中首先发现 ,也存在于正常细胞中 ,可由多种细胞分泌 ,其核糖核酸酶活性较弱... 血管生长素 (angiogenin ,ANG)是一种促使新血管生成的诱导剂 ,它属于核糖核酸酶超家族中的一员。ANG蛋白含 12 3个氨基酸 ,相对分子量为 14 .4kD ,在肿瘤细胞中首先发现 ,也存在于正常细胞中 ,可由多种细胞分泌 ,其核糖核酸酶活性较弱。研究证实 ,ANG可以在细胞间及细胞内发挥促血管生长作用。ANG与缺血性疾病、肿瘤、及其它疾病的关系已见不少报道。 展开更多

关键词 血管生长素 促血管生成 核糖核酸酶

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血管生长素对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响 被引量：1

9

作者 赵亚锋 郭淮莲 程敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第z1期20-22,共3页

目的:观察腹腔注射重组人血管生长素(Recombinant human angiogenin,rhANG)对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带区凋亡细胞数目的影响。方法:大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注72h制作脑缺血再灌注模型。大鼠分为假手术组、脑缺血对照组、rhANG腹腔... 目的:观察腹腔注射重组人血管生长素(Recombinant human angiogenin,rhANG)对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带区凋亡细胞数目的影响。方法:大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注72h制作脑缺血再灌注模型。大鼠分为假手术组、脑缺血对照组、rhANG腹腔注射组(15ng/100g体重)。采用凋亡细胞DNA原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果:rhANG腹腔注射组与脑缺血对照组相比缺血半暗带区凋亡细胞数目差异无显著性(P>0.05)。脑缺血对照组及rhANG腹腔注射组大鼠脑内缺血侧凋亡细胞数目明显多于非缺血侧。结论:腹腔注射rhANG(15ng/100g体重)对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带区凋亡细胞数目无显著影响。 展开更多

关键词 血管生长素 脑缺血再灌注 大鼠 凋亡

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重组腺相关病毒介导的RNAi抑制血管生长素表达对肺鳞癌细胞成瘤能力的影响

10

作者 袁扬 刘晓红 +2 位作者 龚德军 李白翎 黄盛东 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期355-359,共5页

目的:通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制肺鳞癌细胞SK-MES-1的血管生长素(angiogenin,ANG)表达,观察其对癌细胞生长及成瘤能力的影响。方法:构建H1启动子驱动的表达针对ANG的小干扰R... 目的:通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制肺鳞癌细胞SK-MES-1的血管生长素(angiogenin,ANG)表达,观察其对癌细胞生长及成瘤能力的影响。方法:构建H1启动子驱动的表达针对ANG的小干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒AAV-shANG,转染SK-MES-1细胞;同时以正常SK-MES-1细胞以及转染AAV-Null的SK-MES-1细胞作为对照。培养72 h后,蛋白质印迹法检测3组细胞ANG蛋白表达变化,并检测细胞周期。将以上3组细胞移植胸腺缺陷小鼠观察其生长和成瘤能力的变化,并进行微血管密度计数。结果:成功构建重组腺相关病毒AAV-shANG,转染SK-MES-1细胞后ANG蛋白表达水平为两对照组细胞的20％,细胞增殖指数未见差异。AAV- shANG转染细胞在胸腺缺陷小鼠中的成瘤体积、瘤质量和微血管密度均较两对照组细胞显著下降(P<0．05)。结论:腺相关病毒介导的shANG表达能有效抑制SK-MES-1细胞中ANG蛋白表达,抑制其成瘤能力,对肺鳞癌的治疗具有重要的意义。 展开更多

关键词 血管生长素 腺相关病毒 RNA干扰 基因疗法 肺肿瘤

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基因重组人血管生长素衍生物Asp116His对缺血心肌再血管化的影响

11

作者 唐昊 黄盛东 +2 位作者 蔡凯华 梅举 张宝仁 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期238-241,共4页

在建立家兔心肌梗死模型的基础上 ,以基因重组人血管生长素衍生物Asp1 1 6His于缺血心肌边缘部作心肌多点注射。术后 8～ 1 0天取注射点心肌切片作HE染色、VB染色及Ⅷ因子标记的免疫组化染色观察 ;术后 1 8～ 2 0天 ,做非选择性冠脉造... 在建立家兔心肌梗死模型的基础上 ,以基因重组人血管生长素衍生物Asp1 1 6His于缺血心肌边缘部作心肌多点注射。术后 8～ 1 0天取注射点心肌切片作HE染色、VB染色及Ⅷ因子标记的免疫组化染色观察 ;术后 1 8～ 2 0天 ,做非选择性冠脉造影。病理学检查 ,可见心肌间质内大量小血管结构 ,毛细血管明显增多 ,冠脉造影 ,示有侧支血管形成。本研究首次证实血管生长素衍生物Asp1 1 6His在心肌作用局部可引起明显新生血管形成 ,提示在心脏冠状血管内存在其有效作用位点。 展开更多

关键词 血管生长素衍生物 心肌缺血 再血管化 基因重组

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从牛奶提取血管生长素的简化方法

12

作者 任岱 John M.McMurtry Kin-Ping Wong 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期331-334,共4页

血管生长素(Angiogenin,Ang)与血管内皮生长因子(vascular endotherial growth fac-tor,VEGF)属于同一类型的生物活性物质,1985年Fett从人体HF-29腺癌中分离出Ang,1987年Shapiro又自人血浆中获得Ang,1988年Bond从牛血浆中提取Ang、其获... 血管生长素(Angiogenin,Ang)与血管内皮生长因子(vascular endotherial growth fac-tor,VEGF)属于同一类型的生物活性物质,1985年Fett从人体HF-29腺癌中分离出Ang,1987年Shapiro又自人血浆中获得Ang,1988年Bond从牛血浆中提取Ang、其获得率为30～80μg/L。人体的Ang分子量为14.4kD,是由123个氨基酸组成,只需35fmol就能促进血管增生。牛的Ang氨基酸组成与人Ang极类似。 展开更多

关键词 血管生长素 牛奶 提取

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基因重组人血管生长素衍生物Asp116His的原核表达 被引量：3

13

作者 唐昊 黄盛东 +4 位作者 梅举 张宝仁 朱家麟 应康 李白翎 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第12期937-940,F004,共5页

目的:在大肠杆菌内表达基因重组人血管生长素衍生物Asp116His(rhD116H-ANG)并恢复其天然活性。方法:采用EcoR和BamH双酶切,重组构建pBV220/D116H-ANG表达载体,转化大肠杆菌TG1基因工程菌,温控表达,破菌提取包涵体,变性、溶解、纯化、复... 目的:在大肠杆菌内表达基因重组人血管生长素衍生物Asp116His(rhD116H-ANG)并恢复其天然活性。方法:采用EcoR和BamH双酶切,重组构建pBV220/D116H-ANG表达载体,转化大肠杆菌TG1基因工程菌,温控表达,破菌提取包涵体,变性、溶解、纯化、复性、浓缩,以鸡胚绒毛尿囊膜法及RNA降解试验测活。结果:成功表达rhD116H-ANG,表达量约30%,经纯化、复性、测活,证实获得活性蛋白,并取得较高得率及复性效率。结论:本实验建立的原核表达体系是获取活性rhD116H-ANG的有效途径,为规模化制备奠定了技术基础。 展开更多

关键词 血管生长素 原核表达 基因重组 Asp116His

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Ad.ANG体外转染骨髓基质细胞表达产物对血管内皮细胞生长的促进作用 被引量：2

14

作者 李志刚 梅举 张宝仁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1198-1200,共3页

目的:研究Ad.ANG转染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的转染效率、产物表达和其表达产物的促血管内皮细胞生长作用。方法:体外培养扩增SD大鼠BMSCs,通过转染β-半乳糖苷酶基因评价腺病毒转染BMSCs的转染效率;通过Wester... 目的:研究Ad.ANG转染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的转染效率、产物表达和其表达产物的促血管内皮细胞生长作用。方法:体外培养扩增SD大鼠BMSCs,通过转染β-半乳糖苷酶基因评价腺病毒转染BMSCs的转染效率;通过Western印迹分析和ELISA检测血管生长素(ANG)在细胞内表达和细胞外分泌情况;通过细胞计数的方法研究转染Ad.ANG后的BMSCs培养上清的促内皮细胞生长作用。结果:腺病毒对于BMSCs具有很高的转染效率,转染倍数为50时,转染效率>95％,而且对细胞生长没有影响。Ad.ANG转染BMSCs后可以获得很高的表达水平,第7天达表达高峰[(1 086.808±83.301 pg/ml],15 d后仍可检测到蛋白表达。含有ANG的培养上清与对照组相比具有明显的促血管内皮细胞生长作用(P<O.01)。结论:腺病毒可以安全、有效地转染BMSCs,其携带ANG基因可获得很高的瞬时表达水平,并能促进血管内皮细胞生长。 展开更多

关键词 血管生长素 腺病毒 骨髓基质细胞 转染 血管内皮细胞

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血管生成素1基因真核表达质粒的构建及测序

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作者 单志新 余细勇 +4 位作者 林秋雄 符永恒 谭虹虹 郑猛 林曙光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1283-1285,共3页

目的 :构建血管生成素 1(Ang1)的真核表达质粒psecTagBk -Ang1。方法 :用PCR方法从人心脏文库中扩增Ang1基因全外显子片段 ,并定向插入真核表达载体psecTagBk中 ,用限制性内切酶酶切和测序鉴定克隆的Ang1基因。结果 :扩增出人Ang1cDNA片... 目的 :构建血管生成素 1(Ang1)的真核表达质粒psecTagBk -Ang1。方法 :用PCR方法从人心脏文库中扩增Ang1基因全外显子片段 ,并定向插入真核表达载体psecTagBk中 ,用限制性内切酶酶切和测序鉴定克隆的Ang1基因。结果 :扩增出人Ang1cDNA片段 ,测序结果显示扩增的Ang1cDNA包括长为 14 97bp、14 94bp的 2种剪切体 ,分别编码 4 98和 4 97个氨基酸残基。限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒psecTagBk -Ang1。结论 :发现 2种共存的Ang1cDNA剪切体 ,并成功构建真核表达质粒psecTagBk -Ang1。 展开更多

关键词 血管生长素 质粒 克隆 分子

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HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定

16

作者 李彬 王晓静 +2 位作者 刘拥军 韩忠朝 庞天翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期991-993,997,共4页

目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基... 目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达,产物利用Ni2+-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化。采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响。结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段,成功构建重组质粒pET22b(+)-HA-PO,其表达的融合蛋白以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的10%,经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%。活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性。结论:可溶性表达了HAPO蛋白,并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用。 展开更多

关键词 促血液血管细胞生长素 可溶性表达 分离纯化 人脐静脉内皮细胞

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