一株鸭源血清4型禽腺病毒主要结构蛋白的遗传演化分析及致病性研究

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作者 黄聪 李嘉 +5 位作者 黄远玲 韩靖宜 魏常青 刘静宜 陈鸿军 陈宗艳 《中国家禽》 北大核心 2025年第1期82-88,共7页

为确定2020年浙江地区某养殖场以肝脏白色点状坏死为特征的麻鸭发病原因,试验采集病鸭组织进行病原检测和分离鉴定,并对分离病原进行麻鸭致病性试验。结果显示:病原确定为血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4),命名为QZ2... 为确定2020年浙江地区某养殖场以肝脏白色点状坏死为特征的麻鸭发病原因,试验采集病鸭组织进行病原检测和分离鉴定,并对分离病原进行麻鸭致病性试验。结果显示:病原确定为血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4),命名为QZ20株;QZ20分离株与我国近年流行的FAdV-4毒株处于同一分支,核苷酸序列相似性高达98%~100%;QZ20分离株感染鸡肝癌细胞(Chicken liver hepatocellular carcinoma cell line,LMH)能够产生细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),能在LMH细胞中复制,病毒TCID50为105.5/0.1 mL;QZ20分离株接种鸡胚胚体潮红、全身弥漫性出血,并能致死鸡胚;QZ20分离株感染1日龄麻鸭可导致十二指肠、肝脏和肾脏均发生病理变化。研究表明,从患病麻鸭成功分离一株FAdV-4,其与我国鸡群中流行的FAdV-4差异较小,结果为FAdV-4的流行病学调查和防控提供依据。 展开更多

关键词 麻鸭 血清4型禽腺病毒 致病性

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表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建 被引量：1

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作者 徐贞琦 蒋蕙如 +8 位作者 郭艺文 谢泉 殷楠 李拓凡 万志敏 邵红霞 秦爱建 张俊 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期47-53,共7页

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光... 为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白 CRISPR-Cas9 重组血清4型禽腺病毒 表达

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血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量：1

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作者 陈乐乐 王凯莉 +5 位作者 刘成 杜旭升 曹胜亮 李玉保 路建彪 司振书 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期7-11,共5页

为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检... 为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 六邻体环1区 重组蛋白 胶体金检测方法

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血清4型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及其在抗体检测中的应用

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作者 王圆梦 王伟康 +5 位作者 李拓凡 万志敏 邵红霞 秦爱建 叶建强 谢泉 《中国家禽》 北大核心 2024年第7期51-59,共9页

为建立特异的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)血清学抗体检测技术,试验将FAdV-4纤突蛋白基因fiber-2克隆至载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-28a-Fiber-2,获得纯化的重组蛋白His-Fiber-2,以纯化的His-Fiber-2作为包被抗原建立检测Fiber-2抗... 为建立特异的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)血清学抗体检测技术,试验将FAdV-4纤突蛋白基因fiber-2克隆至载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-28a-Fiber-2,获得纯化的重组蛋白His-Fiber-2,以纯化的His-Fiber-2作为包被抗原建立检测Fiber-2抗体的间接ELISA方法,对该方法进行特异性、重复性、稳定性、灵敏性试验,并与BioChek FAdV商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果显示:建立的ELISA仅与抗FAdV-4阳性鸡血清发生反应,与检测的抗其他病原的血清以及SPF鸡血清均无反应性,批间重复性与批内重复性良好,其变异系数分别在4.345%~6.983%和4.326%~9.391%之间,包被酶标板保存12个月后,变异系数为4.4%~10.0%,其检测灵敏度是间接免疫荧光检测技术的8~32倍,是基于包被GST-Fiber-2蛋白ELISA的2倍;建立的ELISA对FAdV-4灭活疫苗免疫的鸡血清检出率高于BioChek试剂盒,两者对临床感染FAdV-4的鸡血清的检测结果一致。研究表明,试验构建的基于重组蛋白His-Fiber-2的检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法为临床上FAdV-4感染监测以及疫苗的免疫评价提供了技术,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 原核表达 间接ELISA 抗体检测

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血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化 被引量：1

5

作者 万丽军 王盛 +12 位作者 谢芝勋 任红玉 谢丽基 范晴 罗思思 李孟 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 李小凤 韦悠 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2081-2090,共10页

【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、2... 【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、24、36、48、60、72、84和96 h的细胞样品,通过实时荧光定量PCR技术检测感染病毒后不同时间点IFN-α和IFN-β及ISGs基因在转录水平上表达量的动态变化规律。【结果】LMH细胞感染FAdV-448 h时出现典型的细胞病变;在感染12 h后,FAdV-4快速增殖,60 h时达到峰值;感染病毒后各时间点,与对照组相比,IFN-α基因转录水平表达量均显著下调(P<0.05);与对照组相比,在感染后12和24 h,IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05),在36 h时迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降且趋于稳定,但仍显著高于对照组(P<0.05);ISG 12、IFIT 5及DDIT 4基因在感染前期变化不大,在感染后36 h时迅速上调,在感染后96 h达到峰值(P<0.05);ZFP 313、IFITM 3及Viperin基因在感染前期表达量变化不大,随后在36 h迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降,但仍显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,CD 47、OAS和PKR基因均呈现下调表达。【结论】在FAdV-4感染LMH细胞后,IFN及多种ISGs在转录水平呈现规律性变化,与病毒在LMH细胞中复制存在一定的联系,表明这些天然免疫因子可能在抗FAdV-4反应中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒(FAdV-4) LMH细胞 干扰素 干扰素刺激基因 转录

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血清4型禽腺病毒的检测方法及疫苗研究进展 被引量：1

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作者 张颖 《安徽农学通报》 2024年第12期63-67,共5页

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)以感染3~6周龄的肉鸡为特征,主要引起心包液-肝炎综合征,其传播范围广,给养禽业造成的损失较大。禽腺病毒有12种血清型,因血清型众多,给血清4型禽腺病毒的诊断及防控带来一定的困难... 血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)以感染3~6周龄的肉鸡为特征,主要引起心包液-肝炎综合征,其传播范围广,给养禽业造成的损失较大。禽腺病毒有12种血清型,因血清型众多,给血清4型禽腺病毒的诊断及防控带来一定的困难。本文对血清4型禽腺病毒的分子生物学检测方法(聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR和环介导等温扩增)、血清学检测方法及其他检测技术,以及灭活疫苗、弱毒疫苗、基因工程疫苗及生物制品的最新研究进展进行了综述,为血清4型禽腺病毒的检测和疫苗的研究提供参考。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 检测方法 疫苗 分子生物学 肉鸡

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基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立 被引量：8

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作者 梅楠 孙海伟 +3 位作者 李允章 汪凯 王桂军 陈鸿军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期807-811,共5页

为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立... 为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 FAdV-4 Fiber-2 原核表达 间接ELISA

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血清4型禽腺病毒fiber-2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析 被引量：7

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作者 梅梅 陆吉虎 +3 位作者 张雪花 唐应华 卢宇 侯继波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1251-1255,共5页

为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免... 为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组蛋白fiber-2的表达,并采用免疫琼扩试验(AGP)检测fiber-2蛋白效价。以fiber-2蛋白作为免疫原制备油乳剂疫苗免疫SPF鸡进行免疫效力试验,分别设fiber-2疫苗组、fiber-2疫苗配伍免疫增强剂CVCVA5组及生理盐水对照组。免疫后14 d、21 d和28 d采集SPF鸡外周血分离血清,利用AGP法检测其血清抗体水平。IFA结果显示fiber-2蛋白在昆虫细胞中获得表达;western blot结果显示该蛋白能够与FAdV-4阳性血清发生特异性免疫反应,蛋白分子量约62 ku;AGP结果显示fiber-2蛋白AGP效价达1:16。免疫后14 d两组实验组鸡均可检测到特异性琼扩抗体,免疫后28 d fiber-2疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:24,配伍CVCVA5疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:104。以上结果表明fiber-2蛋白具有一定的免疫原性,免疫后可诱导机体产生特异性抗体,本研究为进一步研制FAdV-4亚单位疫苗提供实验依据。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 纤突蛋白 表达 免疫原性

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鸡血清4型禽腺病毒与HH9亚型禽流感病毒亚型禽流感病毒、新城疫病毒混合感染的鉴定 被引量：7

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作者 梅梅 陆吉虎 +2 位作者 张雪花 唐应华 侯继波 《中国家禽》 北大核心 2017年第22期59-62,共4页

试验对临床疑似血清4型禽腺病毒与H9亚型禽流感、新城疫混合感染鸡的病例进行了病毒分离与鉴定。通过接种鸡胚、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、PCR鉴定,确定该病例为三种病毒混合感染。动物回归试验证明,1 000 ELD_(50)病毒量对2日... 试验对临床疑似血清4型禽腺病毒与H9亚型禽流感、新城疫混合感染鸡的病例进行了病毒分离与鉴定。通过接种鸡胚、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、PCR鉴定,确定该病例为三种病毒混合感染。动物回归试验证明,1 000 ELD_(50)病毒量对2日龄SPF鸡致死率达到100%,剖检病变呈现典型心包积液-肝炎综合征,而H9亚型禽流感和新城疫病变特征不明显,说明混合感染中血清4型禽腺病毒病变非常典型,H9亚型禽流感和新城疫则呈现非典型病变。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 H9亚型禽流感病毒 新城疫病毒 混合感染 鉴定

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11株血清4型禽腺病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量：5

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作者 苗立中 祖立闯 +2 位作者 毕研丽 王艳 沈志强 《中国家禽》 北大核心 2018年第14期49-52,共4页

为了阐明Ⅰ群禽腺病毒在我国部分地区鸡群的感染状况,对2015年10月~2016年10月采集自山东、河北等鸡场疑似禽腺病毒感染病鸡的肝脏样品,通过病毒分离、PCR、动物回归试验等进行分离鉴定,最终鉴定出11株血清4型禽腺病毒。根据Gen Bank上... 为了阐明Ⅰ群禽腺病毒在我国部分地区鸡群的感染状况,对2015年10月~2016年10月采集自山东、河北等鸡场疑似禽腺病毒感染病鸡的肝脏样品,通过病毒分离、PCR、动物回归试验等进行分离鉴定,最终鉴定出11株血清4型禽腺病毒。根据Gen Bank上发表的Ⅰ群禽腺病毒(FAd VⅠ)Hexon基因序列设计引物,对分离的11个毒株测序,并与其他血清型参考毒株进行比较分析。结果表明:分离的11株FAd V同源性高达99.7%以上,与FAd V-4参考毒株的核苷酸序列的同源性在98.3%~99.7%之间,与FAd V-10血清型序列同源性较近,为97.2%,而与FAd V-5、FAd V-8血清型同源性较低,仅在66.4%~87.2%之间。研究结果为FAd V的防控和新疫苗研发提供了可靠的理论依据。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 Hexon基因 遗传进化 基因型

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血清4型禽腺病毒Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：4

11

作者 吴双 张聪 +4 位作者 袁慧莎 戴利霞 林梦舟 吴植 朱善元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期134-141,共8页

为建立快速检测血清4型禽腺病毒病(Fowl aviadenovirus serotype 4,FAdV-4)的基于Taq Man探针的Quantitative real-time PCR(qPCR)检测方法,本研究根据Hexon基因序列,设计相关的qPCR特异性引物和探针,经特异性、敏感性和重复性试验以及... 为建立快速检测血清4型禽腺病毒病(Fowl aviadenovirus serotype 4,FAdV-4)的基于Taq Man探针的Quantitative real-time PCR(qPCR)检测方法,本研究根据Hexon基因序列,设计相关的qPCR特异性引物和探针,经特异性、敏感性和重复性试验以及反应程序等系列优化后,最终建立荧光定量检测方法并应用于临床样品的病原检测。FAdV-4的qPCR结果表明,优化后标准曲线决定系数(R^(2))为0.998,扩增效率(E)为95.226%,该方法效果良好。利用该方法,除FAdV-4外其他禽类常见病原均未检测到,该方法具有良好的特异性。该qPCR方法检出阳性的最低拷贝数为100个拷贝,而普通PCR方法检出阳性的最低拷贝数为10000个拷贝,说明其具有良好的灵敏度。组内和组间变异系数均≤0.22%,该方法的重复性较高。对180份从江苏、安徽、江西和广西等省份采集的临床疑似样品进行检测,结果显示,qPCR方法检出率为51.1%,而普通PCR方法检出率为32.8%;同时基于qPCR引物的检出符合率为100.00%,而基于普通PCR特异性引物检出的符合率为82.35%,表明该qPCR方法针对临床疑似样品的检测准确性更高。该方法的建立有助于推动禽腺病毒病的分子流行病学研究和防控。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 荧光定量PCR 临床应用

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鸭源血清4型禽腺病毒的分离鉴定 被引量：2

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作者 卢凤英 孙华伟 +4 位作者 张敬峰 刘传敏 范鑫 张晓曦 张小飞 《中国家禽》 北大核心 2018年第5期62-64,共3页

山东省某鸭场发生以心包积液-肝炎为特征的传染性疾病,并造成死亡。为探究其发病原因,对病料进行临床剖检、细菌学检查、病毒分离以及动物回归等试验,结果显示:剖检均可见心包大量淡黄色或透明积液,肝脏有不同程度的坏死出血;细菌分离... 山东省某鸭场发生以心包积液-肝炎为特征的传染性疾病,并造成死亡。为探究其发病原因,对病料进行临床剖检、细菌学检查、病毒分离以及动物回归等试验,结果显示:剖检均可见心包大量淡黄色或透明积液,肝脏有不同程度的坏死出血;细菌分离呈阴性;PCR检测显示血清4型禽腺病毒为阳性;动物回归试验与临床病例一致。确定引起山东省鸭心包积液-肝炎综合征的病原为血清4型禽腺病毒。 展开更多

关键词 心包积液-肝炎综合征 鸭 血清4型禽腺病毒

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血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

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作者 罗思思 邓显文 +7 位作者 谢芝勋 张艳芳 张民秀 谢志勤 谢丽基 李孟 王盛 李小凤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3092-3099,共8页

【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白... 【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 penton蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞株

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血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定 被引量：1

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作者 刘娜 刘青涛 +2 位作者 李银 杨婧 李祥瑞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期106-110,共5页

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片... 通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32 a进行连接,构建pET-32 a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 原核表达

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血清4型禽腺病毒的分离鉴定及动物回归试验 被引量：1

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作者 李琳 杨金生 +4 位作者 赵寒冬 袁陆 管郡 王楠 刘云志 《家禽科学》 2023年第1期8-11,共4页

吉林省长春市某蛋鸡场49日龄蛋鸡发生以心包积液为剖检特征的传染性疾病,造成大批鸡死亡。我们对病死鸡进行了临床检查、细菌学检查、血凝试验、试纸条检测、病毒的初步分离及PCR检测,采集的尿囊液命名为FADV-4CC株,并用分离的病毒攻毒... 吉林省长春市某蛋鸡场49日龄蛋鸡发生以心包积液为剖检特征的传染性疾病,造成大批鸡死亡。我们对病死鸡进行了临床检查、细菌学检查、血凝试验、试纸条检测、病毒的初步分离及PCR检测,采集的尿囊液命名为FADV-4CC株,并用分离的病毒攻毒SPF鸡。结果显示,剖检可见病鸡心脏被淡黄色透明液体包裹,肝脏肿大变黄、有出血点,未见血凝现象,禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病毒以及细菌学检测均呈阴性,PCR检测出现明显的目的条带,初步判定为血清4型禽腺病毒,攻毒的SPF鸡全部死亡,对照组正常存活无异常。试验表明,吉林长春地区仍有禽腺病毒病流行,且是各日龄均易感的血清4型禽腺病毒。 展开更多

关键词 禽 血清4型禽腺病毒 心包积液

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血清4型禽腺病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用 被引量：3

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作者 招丽婵 王占新 +2 位作者 罗洋洋 林欣 鲁俊鹏 《广东畜牧兽医科技》 2020年第5期48-52,共5页

根据多个GenBank登录的血清4型禽腺病毒株hexon基因序列,经多序列比对分析选取高度保守区域设计特异性引物探针,建立了检测FADV⁃4的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法扩增产物长度为71 bp,在101~107 copies/μL范围内具有良好的线性关系,... 根据多个GenBank登录的血清4型禽腺病毒株hexon基因序列,经多序列比对分析选取高度保守区域设计特异性引物探针,建立了检测FADV⁃4的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法扩增产物长度为71 bp,在101~107 copies/μL范围内具有良好的线性关系,其扩增相关系数为0.995,初始模板最低检测下限为7.3×101 copies/μL质粒DNA,与常规PCR相比灵敏度高约1000倍。以H9亚型流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管病毒、传染性法氏囊病毒、网状内皮增生病毒、白血病病毒、减蛋综合征病毒、传染性贫血病毒核酸为模板时,均检测不到荧光信号,批内和批间重复性试验变异系数均不超过2%,具有良好的特异性和重复性。本文建立的方法可为FADV⁃4的早期感染诊断及定量分析提供有效技术手段。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 TaqMan荧光定量PCR

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高致病性血清4型禽腺病毒hexon基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

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作者 梅梅 陆吉虎 +2 位作者 张雪花 唐应华 侯继波 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期862-865,共4页

为获得杆状病毒表达的重组高致病性血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)六邻体蛋白(Hexon),本研究通过PCR从高致病性血清4型禽腺病毒基因组中扩增到hexon基因,克隆到杆状病毒转移载体p Fast Bac-1,获得重组转移质粒p F... 为获得杆状病毒表达的重组高致病性血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)六邻体蛋白(Hexon),本研究通过PCR从高致病性血清4型禽腺病毒基因组中扩增到hexon基因,克隆到杆状病毒转移载体p Fast Bac-1,获得重组转移质粒p Fast Bac-hexon,将其转化DH10Bac大肠杆菌并筛选,获得重组杆状病毒穿梭质粒r Bacmid-hexon,将重组杆状病毒穿梭质粒转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒r BV-hexon。间接免疫荧光试验和免疫印迹试验结果显示,Sf9细胞中的Hexon蛋白能够与血清4型禽腺病毒阳性血清发生特异性反应,蛋白质分子量约110 000,表明Hexon蛋白在Sf9细胞中获得良好的表达。 展开更多

关键词 高致病性血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 hexon基因

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血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量：8

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作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页

【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒(FAdV-4) Fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting

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抗血清4型禽腺病毒纤突蛋白2的单克隆抗体研制及其部分特性研究 被引量：8

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作者 王萍 王伟康 +7 位作者 梁广成 李拓凡 高巍 张建军 呼高伟 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2017年第19期27-31,共5页

近年血清4型禽腺病毒(Serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)在国内鸡群流行,给养鸡业带来了巨大经济损失。目前尚无针对FAdV-4特异性单克隆抗体的制备及其应用报道。研究通过将FAdV-4全病毒免疫小鼠,以纤突蛋白2原核表达产物为筛选抗原,... 近年血清4型禽腺病毒(Serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)在国内鸡群流行,给养鸡业带来了巨大经济损失。目前尚无针对FAdV-4特异性单克隆抗体的制备及其应用报道。研究通过将FAdV-4全病毒免疫小鼠,以纤突蛋白2原核表达产物为筛选抗原,研制出了4株针对FAdV-4的单克隆抗体,分别命名为3C2、4A6、5C4、5H6。间接免疫荧光试验证明4株单克隆抗体不与所检测的血清8型禽腺病毒反应,也不与FAdV-4的纤突蛋白1反应,仅与FAdV-4的纤突蛋白2反应,并且单克隆抗体3C2在体外能有效抑制FAdV-4的感染。4株抗FAdV-4纤突蛋白2单克隆抗体的成功获得为研制FAdV-4快速诊断试剂盒及探究纤突蛋白2在FAdV-4致病机制中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 纤突蛋白2 单克隆抗体

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血清4型禽腺病毒研究进展 被引量：11

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作者 孙自若 林维鹏 +4 位作者 杨晓龙 韩海玉 杨增岐 党如意 王兴龙 《中国家禽》 北大核心 2018年第16期43-49,共7页

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是引起心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis,HPS-IBH)的主要病原。HPS-IBH在多个国家均有报道;2015年6月在我国暴发,主要危害鸡,尤其是3~7周... 血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是引起心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis,HPS-IBH)的主要病原。HPS-IBH在多个国家均有报道;2015年6月在我国暴发,主要危害鸡,尤其是3~7周龄肉鸡,已成为危害我国养禽业的主要疫病之一。随着HPS-IBH疫病严重程度的增加,国内外对该病的重视程度也不断增加。近年来,在该病的诊断技术、疫苗和防控技术等领域的研究都取得了一定的进展,为更加全面地了解该病最新研究成果,文章对FAdV-4近年来取得的研究结果进行综述,以期为该病防控提供技术资料。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 流行病学 病变 诊断 疫苗

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