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血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响 被引量:2
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作者 袁建玲 邵钟铭 +6 位作者 邹园 伍彩霞 郑阿秀 邢敬慈 白建荣 揭伟 申志华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期535-542,共8页
目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-N(1~254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检... 目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-N(1~254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的表达获得单克隆细胞株,CCK-8实验分析细胞活力的改变,划痕损伤修复实验和Transwell实验分析细胞迁移能力,细胞-基质黏附实验分析细胞黏附能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和上皮-间充质转化(EMT)相关指标的表达,双萤光素酶报告基因实验检测SRF-Full和SRF-N对Snail1启动子的调节效应。结果:成功用SRF-Full、SRF-N及NC慢病毒感染6-10B细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合Flag标签蛋白的表达获得相应的单克隆细胞株,分别标记为6-10B^(SRF-Full)、6-10B^(SRF-N)和6-10B^(NC)。与6-10B^(NC)细胞相比,6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力和与基质的黏附能力均显著增强(P<0.01),而6-10B^(SRF-N)细胞较6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力及黏附能力均显著下降(P<0.01)。6-10B^(SRF-Full)细胞中波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(N-cadherin)和Snail1的表达水平较6-10B^(NC)细胞显著升高(P<0.01),上皮钙黏素(Ecadherin)表达水平显著下降(P<0.01);而6-10B^(SRF-N)细胞中vimentin、N-cadherin和Snail1的表达水平较6-10B^(SRF-Full)细胞显著下降(P<0.05),E-cadherin表达水平显著上升(P<0.05)。双萤光素酶活性实验结果表明,与NC相比,SRFFull显著激活Snail1启动子(P<0.001);与SRF-Full相比,SRF-N显著抑制Snail1启动子活性(P<0.01)。结论:SRF-Full促进而SRF-N抑制NPC细胞的增殖和迁移;SRF-N抑制Snail1启动子活性而介导NPC的EMT;SRF-N具有潜在的抗NPC作用。 展开更多
关键词 鼻咽癌 血清反应因子n端片段 细胞增殖 细胞迁移 上皮-间充质转化
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血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响 被引量:4
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作者 雷洪 王可可 +5 位作者 哈艳平 贾亚楠 李汝佳 申志华 郭峻莉 揭伟 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1109-1115,共7页
目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-S... 目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-N过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。 展开更多
关键词 血清反应因子 血清反应因子n端片段 质粒构建 心脏干细胞 细胞分化
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异常凝血酶原N端F1片段及其抗血清的制备
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作者 蔡丹昭 周利军 张洪祖 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期530-536,共7页
正常人血浆经钡盐吸附、分段盐析、DE-52离子交换层析分离纯化到正常凝血酶原,然后经牛凝血酶酶切、DE-52离子交换层析分离到凝血酶原片段1,再经加热脱羧后得到异常凝血酶原的N端F1片段.将该片段免疫家兔,获得的抗血清与肝细胞性肝癌(H... 正常人血浆经钡盐吸附、分段盐析、DE-52离子交换层析分离纯化到正常凝血酶原,然后经牛凝血酶酶切、DE-52离子交换层析分离到凝血酶原片段1,再经加热脱羧后得到异常凝血酶原的N端F1片段.将该片段免疫家兔,获得的抗血清与肝细胞性肝癌(HCC)患者血浆有抗原抗体反应,而与正常人血浆无反应,为研制新型的HCC检测试剂盒奠定了基础. 展开更多
关键词 肝细胞性肝癌 异常凝血酶原 nF1片段 血清 抗原抗体反应 肿瘤诊断
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人血管能抑素免疫兔抗血清制备及其特性测定
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作者 贺国安 罗进贤 +2 位作者 李瑞芳 张添元 吴群悦 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期134-136,共3页
纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS_PAGE分离,切胶回收目的蛋白,与弗氏不完全佐剂充分乳化后,进行多点皮下注射免疫新西兰白兔,制备兔抗人血管能抑素抗血清,抗血清去除交叉反应抗体后,进行WesternBlotting分析抗血清与人血管能抑素及其... 纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS_PAGE分离,切胶回收目的蛋白,与弗氏不完全佐剂充分乳化后,进行多点皮下注射免疫新西兰白兔,制备兔抗人血管能抑素抗血清,抗血清去除交叉反应抗体后,进行WesternBlotting分析抗血清与人血管能抑素及其N端和C端片段的抗原抗体反应特性。结果表明,经过4次加强免疫后,获得了高效价的兔抗人血管能抑素抗血清。抗血清去除交叉反应抗体后,WesternBlotting分析表明,它能与人血管能抑素发生特异的抗原抗体反应,同时还能与人血管能抑素的N端片段和C端片段发生特异性较弱的抗原抗体反应。证明制备的兔抗人血管能抑素抗血清能应用于人血管能抑素及其N端和C端片段免疫学研究中。 展开更多
关键词 人血管能抑素 n片段 C片段 血清 免疫 特性测定
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芪苈强心胶囊治疗冠心病慢性心力衰竭患者疗效观察 被引量:10
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作者 古思奇 《辽宁中医杂志》 CAS 2023年第1期101-104,共4页
目的探讨芪苈强心胶囊治疗冠心病慢性心力衰竭患者的疗效及对心室重构、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血清胱抑素C(CysC)以及N端前脑钠肽(NT-proBNP)水平的影响。方法选取2019年3月—2020年3月于医院治疗的88例冠心病慢性心力衰竭患者为研究... 目的探讨芪苈强心胶囊治疗冠心病慢性心力衰竭患者的疗效及对心室重构、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血清胱抑素C(CysC)以及N端前脑钠肽(NT-proBNP)水平的影响。方法选取2019年3月—2020年3月于医院治疗的88例冠心病慢性心力衰竭患者为研究对象。依据随机单双数法分对照组和观察组,各44例。对照组实施常规西药治疗,观察组在对照组的基础上给予芪苈强心胶囊治疗。治疗1个月后,对比两组临床疗效、6min步行距离测试(6MWT)、心率(HR)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张期末内径(LVEDD)、左室收缩期末内径(LVESD)、hs-CRP、CysC、NT-proBNP水平。结果观察组的总有效率为93.18%(41/44),明显高于对照组的77.27%(34/44),差异有统计学意义(P<0.05);观察组的6MWT、LVEF水平分别为(549.63±47.24)m、(0.43±0.09)%,明显高于对照组的(307.34±35.83)m、(0.36±0.07)%,HR、LVEDD、LVESD水平为(62.82±6.93)次/min、(46.12±6.15)mm、(34.95±2.50)mm,明显低于对照组的(84.35±6.21)次/min、(56.64±7.57)mm、(43.02±3.64)mm,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组与对照组的hs-CRP、CysC、NT-proBNP水平分别为(5.04±1.27)mg/L、(0.66±0.18)mg/L、(1281.63±175.25)pg/L与(11.15±2.62)mg/L、(0.93±0.11)mg/L、(1674.34±190.35)pg/L,明显低于治疗前的(19.48±3.51)mg/L、(1.33±0.22)mg/L、(2275.35±261.03)pg/L与(20.22±3.62)mg/L、(1.30±0.23)mg/L、(2295.35±265.24)pg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组的hs-CRP、CysC、NT-proBNP水平分别为(5.04±1.27)mg/L、(0.66±0.18)mg/L、(1281.63±175.25)pg/L,明显低于对照组的(11.15±2.62)mg/L、(0.93±0.11)mg/L、(1674.34±190.35)pg/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论芪苈强心胶囊治疗冠心病慢性心力衰竭患者的疗效显著,可改善病患心室重构,同时也可有效降低hs-CRP、CysC以及NT-proBNP水平,值得推广应用。 展开更多
关键词 冠心病慢性心力衰竭 芪苈强心胶囊 疗效 心室重构 超敏C反应蛋白 血清胱抑素C n前脑钠肽
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