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人细胞内Ⅰ型血小板激活因子乙酰水解酶重组蛋白的构建、纯化及酶活性研究
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作者 陈晓莹 徐静 +1 位作者 杨军伟 张怡轩 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1152-1156,共5页
目的构建人细胞内Ⅰ型血小板激活因子乙酰水解酶(PAF-AH)重组蛋白并加以纯化,利用不同底物研究酶活性。方法细胞内Ⅰ型PAF-AHβ亚基基因进行PCR扩增,目的基因经纯化、连接载体转化大肠杆菌DH5α感受态细胞构建重组蛋白,提取质粒行琼脂... 目的构建人细胞内Ⅰ型血小板激活因子乙酰水解酶(PAF-AH)重组蛋白并加以纯化,利用不同底物研究酶活性。方法细胞内Ⅰ型PAF-AHβ亚基基因进行PCR扩增,目的基因经纯化、连接载体转化大肠杆菌DH5α感受态细胞构建重组蛋白,提取质粒行琼脂糖凝胶电泳、NdeⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定。鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞诱导蛋白表达和纯化,15%SDS-PAGE和Western blotting鉴定。分别以乙酸苯酯、l-O-hexadecyl-2-deoxy-2-thioacetyl-sn-glycero-3-phosphocholine(2-Thio PAF)和1-myristoyl-2-(4-nitrophenylsuccinyl)phosphatidylcholine为底物(后两者为血浆型PAF-AH的商业化底物),应用分光光度法检测纯化后重组蛋白的酶活性,以血浆型PAF-AH作为阳性对照。结果人细胞内PAF-AHⅠ型β亚基重组蛋白构建正确,纯化后在大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。与阳性对照血浆型PAF-AH比较,纯化后的重组蛋白同样能够水解乙酸苯酯,具有芳香酯酶活性;能快速水解2-Thio PAF,但不能水解1-myristoyl-2-(4-nitrophenylsuccinyl)phosphatidyl-choline。结论成功构建人细胞内Ⅰ型PAF-AH重组蛋白,其对血浆型PAF-AH的两个商业化底物具有完全不同的水解能力,以此可快速区分细胞内和血浆型PAF-AH。 展开更多
关键词 血小板激活因子水解酶 血浆型血小板激活因子乙酰水解酶 重组蛋白 纯化 酶活性 底物
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钩端螺旋体血小板激活因子乙酰水解酶基因特征分析 被引量:2
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作者 张怡轩 郭晓奎 +3 位作者 茅翔 缪有刚 吴春福 赵国屏 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期17-21,共5页
目的 由于钩端螺旋体病的主要特征之一是组织器官广泛性出血 ,出血部位发生在黏膜、脏器、浆膜和皮肤等处 ,严重者出现大面积肺弥散性出血、咳血 ,是危重钩端螺旋体病早期最常见的死因 ,其致病机理仍不清楚。本文使用生物信息学软件分... 目的 由于钩端螺旋体病的主要特征之一是组织器官广泛性出血 ,出血部位发生在黏膜、脏器、浆膜和皮肤等处 ,严重者出现大面积肺弥散性出血、咳血 ,是危重钩端螺旋体病早期最常见的死因 ,其致病机理仍不清楚。本文使用生物信息学软件分析钩端螺旋体基因LA2 14 4 (血小板激活因子乙酰化酶 ,PafAH)所编码蛋白的结构和功能 ,并探讨其在致病过程中的作用。方法 使用NCBI ,Swissprot/TrEMBL ,ProDom ,Pfam ,Jpred2 ,SWISS -MODEL ,TMpred ,SignalP ,ClustW对问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株全基因组ORF基因诠释 ,编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析。结果 确定了问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株血小板激活因子乙酰化酶基因 ,该基因编码蛋白质与哺乳动物 pafAH在一级结构上相似性达 4 2 % ,以牛脑 pafAH(Ib)γ亚基 (1WAB/PDB)为模件模拟该蛋白三级结构 ,发现两者立体结构与非常相似 ,催化位点完全相同 ,均由Ser-His-Asp组成催化三合体。结论 该基因可能与钩体染色体所编码的胶原酶基因 ,溶菌酶基因 ,YopM基因 ,VwA基因协同在钩端螺旋体病出血过程中起作用 。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 血小板激活因子 水解酶 基因特征分析
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血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与黎族支气管哮喘相关作用的研究 被引量:1
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作者 何海武 丁毅鹏 +2 位作者 陈靖 石慧芳 林莉 《中国全科医学》 CAS CSCD 2006年第7期548-550,共3页
目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与黎族支气管哮喘之间的关系。方法采用等位基因特异性聚合酶链式反应技术等方法,检测108例黎族支气管哮喘患者及115例健康黎族人PAF-AH基因第9外显子Val279Phe基因多态性和酶活性... 目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与黎族支气管哮喘之间的关系。方法采用等位基因特异性聚合酶链式反应技术等方法,检测108例黎族支气管哮喘患者及115例健康黎族人PAF-AH基因第9外显子Val279Phe基因多态性和酶活性。结果(1)哮喘组与对照组研究对象血浆PAF-AH突变基因型频率、突变等位基因频率间差别均无显著性意义(P>0.05);(2)哮喘缓解组与对照组研究对象血浆PAF-AH活性间差别无显著性意义(P>0.05),二者均高于哮喘发作组(P<0.001);(3)不论是在对照组,还是在哮喘缓解组,Val/Val基因型和Val/Phe基因型血浆PAF-AH活性间差别均有显著性意义(P<0.01),而两组研究对象在同一基因型中血浆PAF-AH活性间差别均无显著性意义(P>0.05)。结论海南黎族哮喘与PAF-AH基因型无关,但其哮喘所处状态与PAF-AH活性有关。 展开更多
关键词 黎族 哮喘 血小板活化因子水解酶 基因
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妇女分娩前后血浆血小板激活因子水平的变化
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作者 司远征 肖慧珠 +3 位作者 熊忠明 李郁 王凤华 魏文宁 《同济医科大学学报》 CSCD 北大核心 1996年第5期386-388,共3页
采用生物分析法检测妇女孕38周和分娩后1h血浆血小板激活因子(PAF)的水平,以了解分娩前后母体PAF水平的变化及其与妊娠高血压综合征(妊高征)的潜在关系。结果:正常妊娠组孕38周的PAF活性为(25.00±5.... 采用生物分析法检测妇女孕38周和分娩后1h血浆血小板激活因子(PAF)的水平,以了解分娩前后母体PAF水平的变化及其与妊娠高血压综合征(妊高征)的潜在关系。结果:正常妊娠组孕38周的PAF活性为(25.00±5.65)μg/L,显著高于轻中度妊高征组[(14.74±4.56)μg/L]和重度好高征组[(11.45±6.08)μg/L](均为P<0.05)。三组孕妇分娩后1h的PAF活性分别为(33.90±4.12)、(32.28±5.93)和(35.93±10.83)μg/L,均显著高于同组孕38周的水平(均为P<0.05)。结果提示,血小板激活因子可能参与好高征的发病机制,而胎盘在血小板激活因子的代谢调节中具有重要的地位。 展开更多
关键词 血小板激活因子 水解酶 分娩 妊娠高血压综合征
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类风湿性关节炎患者高凝血状态与核因子κB活化及致炎因子增加有关 被引量:60
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作者 章平衡 刘健 +2 位作者 谈冰 朱福兵 方利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期364-368,共5页
目的基于核因子κB(NF-κB)信号转导通路探讨类风湿性关节炎(RA)患者高凝血状态的机制。方法选取RA患者35例,健康志愿者20例。ELISA检测两组血清中白细胞介素10(IL-10)、IL-6、IL-4、IL-17、NF-κB激活子1(Act1)、p50、p65、NF-κB抑制... 目的基于核因子κB(NF-κB)信号转导通路探讨类风湿性关节炎(RA)患者高凝血状态的机制。方法选取RA患者35例,健康志愿者20例。ELISA检测两组血清中白细胞介素10(IL-10)、IL-6、IL-4、IL-17、NF-κB激活子1(Act1)、p50、p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、血小板激活因子(PAF)、PAF-乙酰水解酶(PAF-AH)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平,全自动血细胞分析仪检测血小板(PLT)数量,魏氏法检测血沉(ESR),全自动生化仪检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF),全自动凝血仪检测D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FBG)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)水平;同时半定量反转录PCR检测Act1、p65、p50、IκBα、IκB激酶α(IKKα)mRNA水平,Western blot法检测p65、p50、IκBα蛋白水平。采用Spearman分析RA患者外周血中凝血纤溶指标与细胞因子、NF-κB、活动性指标以及临床症状体征之间的相关性。结果与正常组相比,RA患者外周血中D-D、FBG、PLT明显升高,TT缩短,APTT和PT无明显改变;RA患者血清IL-4、IL-10、PAF-AH的水平明显降低,IL-6、IL-17、Act1、p50、p65、IκBα、IKKα,PAF明显升高;相关性分析显示,RA患者外周血中凝血纤溶指标与细胞因子、NF-κB、活动性指标以及临床症状体征均明显相关。结论 RA患者体内普遍存在高凝状态,并与炎性因子、活动性指标及NF-κB异常活化密切相关。 展开更多
关键词 因子κB(NF-κB) 类风湿性关节炎 细胞因子 血小板激活因子血小板激活因子-水解酶 高凝状态
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PAFAH1B3表达水平与多发性骨髓瘤患者自体造血干细胞移植后疾病进展风险的相关性 被引量:1
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作者 顾喆赟 陶健 +1 位作者 蔡奕峰 王铃 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期448-454,共7页
目的:探讨接受自体造血干细胞移植(AHSCT)治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓CD138^(+)细胞中血小板激活因子乙酰水解酶1B3(platelet-activating factor acetylhydrolase 1B3,PAFAH1B3)基因表达水平与2年内预后之间的相关性。方法:选取2014... 目的:探讨接受自体造血干细胞移植(AHSCT)治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓CD138^(+)细胞中血小板激活因子乙酰水解酶1B3(platelet-activating factor acetylhydrolase 1B3,PAFAH1B3)基因表达水平与2年内预后之间的相关性。方法:选取2014年5月至2019年5月间于南通大学第一、第二附属医院就诊的147例行AHSCT治疗的MM患者作为研究对象,检测患者骨髓CD138^(+)细胞中PAFAH1B3 mRNA的表达水平,并将随访2年间疾病进展或死亡者纳入进展组,其余纳入预后良好组。比较两组患者的临床资料和PAFAH1B3 mRNA表达水平,以入组患者PAFAH1B3 mRNA表达水平中位数为界将患者分为PAFAH1B3高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法比较两组患者的无进展生存率(PFSR)。应用单因素分析和多因素COX回归分析法分析患者2年内预后的相关因素。结果:随访结束时共有13/147例患者失访,最终进展组纳入44例,预后良好组纳入90例。进展组年龄高于预后良好组,移植后达CR^(+)VGPR患者比例低于预后良好组,两组ISS分期例数分布差异有统计学意义(均P<0.05);进展组PAFAH1B3 mRNA表达水平和LDH>250 U/L患者比例均高于预后良好组,PLT值低于预后良好组(均P<0.05);PAFAH1B3高表达组2年PFSR显著低于低表达组(log rankχ^(2)=8.167,P=0.004);LDH>250 U/L(HR=3.389,P=0.010)、PAFAH1B3 mRNA表达水平(HR=50.561,P=0.001)和ISSⅢ期(HR=1.000,P=0.003)为患者预后的独立危险因素,ISSⅠ期(HR=0.133,P=0.001)为患者预后的独立保护因素。结论:接受AHSCT治疗的MM患者骨髓CD138^(+)细胞中PAFAH1B3 mRNA表达水平与预后相关,检测PAFAH1B3 mRNA表达水平对预测患者的PFSR和预后分层具有一定意义。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 无进展生存 血小板激活因子水解酶1B3 预后
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